《时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物定量检测中的临床应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物定量检测中的临床应用（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物定量检测中的临床应用摘要 目的：探讨乙肝患者血清乙肝标志物的相互关系，为乙肝的诊治、预防提供科学依据。方法：用 TRFIA 法定量测定乙肝表面抗原、表面抗体、e 抗原、e 抗体和核心抗体指标。结果：在 720例血清中共检出 13 种抗原抗体模式，HBsAg 阳性的模式共 6 种533 例， HBsAg 检出率为 74.03，且在 5 ngml 及以下 HBsAg检出率为 8.75(63 720)；其中 1+3+5 模式 167 例占23.19，1+4+5 模式 313 例占 43.37， 1+5 模式 21 例占2.92%，1+3 模式 18 例占 2.5
2、%，1+4 模式 9 例占 1.25，1 模式5 例占 0.69。HBsAg 阴性模式共 6 种 164 例占病例总数的22.78；其中 2 模式 23 例占 3.19，4+5 模式 15 例占2.08，2+4+5 模式 16 例占 2.22%，2+5 模式 39 例占5.42%，5 模式 18 例占 2.5%,2+4 模式 53 例占 7.36。抗原抗体全阴性 23 例占 3.19。结论：TRFIA 是测定乙肝患者血清中HBVM 含量较特异、灵敏的方法，能反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；乙肝血清学标志物定量检测能反映患者体内病毒的存在状态和机体的免疫状况，对疾病诊断、病情监测、药效评价、预
3、后监控及筛选用药方案等都具有很高的实用价值。关键词 乙肝病毒标志物；时间分辨荧光免疫技术；临床2应用我国为乙肝病毒(HBV) 感染高发区，约有 1 亿人为乙肝表面抗原携带者。HBV 感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂，临床常用酶联免疫吸附试验(ELISA) 法进行乙肝病毒标志物(HBVM)的检测和用聚合酶链反应(PCR)法进行 HBVDNA 的检测来判断HBV 的感染或疗效。由于 ELISA 法简单、方便、快速的优点在临床得到广泛应用，但受方法学本身的限制，它不能提供 HBVM 的具体含量，只能作为阴阳性判断，故不可能完成 HBV 感染的动力学观察。用 PCR 法进行 HBVDNA 的检测
4、由于受到各种因数的影响，不能在临床上广泛使用，而时间分辨荧光免疫技术(TRFIA) 的出现提供了对 HBVM 进行定量检测的手段。TRFIA 法具有灵敏度高、重复性好、特异性强、定量范围宽等优点1，2 。作者采用 TRFIA法对 720 份血清标本进行 HBVM 检测，并对结果进行了分析。现报告如下。1材料与方法1.1 标本来源 本院门诊和住院部的 720 例患者，男 4353例，女 285 例，年龄 3 岁78 岁。清晨空腹静脉取血 3 ml 送检。1.2 肝炎病毒血清学标志物检测 720 例患者均以采用TRFIA 法检测血清 HBVM(HBsAg、抗HBs 、HBeAg、抗HBe、抗HBc
5、) ，TRFIA 检测仪泰莱1 及配套试剂由广州丰华生物工程有限公司提供。阳性标准为：HBsAg0.2 ngml；抗HBsAg10 mIUml；HBeAg0.03 Ncuml；抗HBe2.00 Ncuml；抗HBc0.1 Ncuml 。操作步骤严格按说明书进行。对可疑结果：如低浓度阳性结果，HBsAg 和抗HBs 或 HBeAg 和抗HBe 同时阳性的均进行双孔复查。1.3 统计与分析 抗原抗体排列顺序：HBsAg ；抗HBs；HBeAg；抗HBe ；抗HBc 。以阳性项目的序号代表该阳性项，同一患者血清 HBVM 组合称抗原抗体模式(如 1+3+5 代表HBsAg，HBeAg，抗HBc 同时
6、阳性)，按抗原抗体模式统计分析。2结果42.1 抗原抗体模式 实验中共检出 13 种抗原抗体模式，HBsAg 阳性的模式共 6 种，533 例，HBsAg 检出率为 74.03，且在 5 ngml 及以下 HBsAg 检出率为 8.75(63 720)；其中1+3+5 模式 167 例占 23.19；1+4+5 模式 313 例占43.37；1+5 模式 21 例占 2.92；1+3 模式 18 例占2.5；1+4 模式 9 例占 1.25；1 模式 5 例占 0.69。HBsAg 阴性的模式共 6 种，164 例占病例总数的 22.78%；其中 2 模式 23 例占 3.19；4+5 模式
7、15 例占 2.08%，2+4+5 模式 16 例占2.22；2+5 模式 39 例占 5.42；5 模式 18 例占 2.5%，2+4 模式 53 例占 7.36。抗原抗体全阴性 23 例占 3.19。2.2 HBVM 浓度在 1+3+5 模式中 HBsAg、HBeAg、抗HBc 的浓度分别为：(215.3898.76) ngml、(1.150.82) Ncuml、(12.325.16) Ncuml ；在 1+4+5 模式中 HBsAg、抗HBe 、抗HBc 的浓度分别为：(152.59113.38) ngml 、(25.7312.54) Ncuml 、(14.128.74) Ncuml；在
8、1+5 模式中 HBsAg、抗HBc 的浓度分别为：(125.3898.73) ngml 、(12.525.79) Ncuml；在 1+3 模式中HBsAg、HBeAg 的浓度分别为：(183.5675.24 )ngml 、(1.020.74) Ncuml ；在 1+4 模式中 HBsAg、抗5HBe 的浓度分别为：(118.2867.23) ngml 、(24.496.89) Ncuml；1 模式中 HBsAg 的浓度为(2.120.75) ngml。且1+3+5 模式中 HBsAg 分布在 200 ngml 以上的占此模式的74.85%(125 例)；在 1+4+5 模式中 HBsAg 分
9、布在 200 ngml 以上的占此模式的 39.62(124 例)；1 模式中 HBsAg 的浓度在 0.3 ng/ml6 ng/ml 之间。2+4+5 模式中抗HBs 、抗HBe 、抗HBc 的浓度分别为：(637.52578.25) mIUml、(18.2410.92) Ncuml、(6.345.70) Ncuml；2+5 模式中抗HBs 、抗HBc的浓度分别为：(260.1775.36) mIUml、0.290.11(Ncu ml)；2+4 模式中抗HBs 、抗 HBe 的浓度分别为：(536.56300.34) mIUml、(15.128.13) Ncuml； 4+5 模式中抗HBe
10、、抗HBc 的浓度分别为：(15.1211.35) Ncuml、(12.2410.11) Ncuml；2 模式中抗 HBs 的浓度为(289.34156.29) mIUml；2+4+5 模式中抗HBs 的浓度主要分布在 870 mlU ml 以上；2+5 模式和 2+4 模式、2 模式中抗HBs 的浓度主要分布分别在 130 mIUml 260 mIUml 、130 mIUml420 mIUml 之间，5 模式中抗HBc 的浓度为：0.60 Ncuml0.28 Ncuml。3讨论6本实验中检出率居前 5 位的是 1+4+5 模式(43.47)、1+3+5 模式(23.19%)、2+4 模式(7
11、.36%)、2+5 模式(5.42%) 、2模式(3.19%)。可能同有些文献报道不一致，主要是本资料收集的标本绝大部分为乙肝患者血清。对乙肝抗原抗体模式及标志物浓度检测分布情况研究中，在一定程度上可看出乙肝标志物出现次序或乙肝临床转归情况。感染 HBV 后，最早出现 HBsAg，其次为HBeAg、抗HBc 、抗HBe 、抗HBs 3 。实验中，1+3+5 模式中 HBsAg 浓度显著高于 1+4+5 模式、 1+5 模式、1+3 模式、1+4 模式、1 模式 HBsAg 浓度，且从实验中也可见 HBeAg 及抗HBe 的出现与 HBsAg 的浓度呈一定的关系4 ，HBsAg 浓度越高 HBe
12、Ag 检出率越高；有文献5报道 HBVDNA 含量与HBeAg、HBsAg 的存在有明显关系，HBeAg、HBsAg 在一定程度上也能反映 HBVDNA 的复制程度；1 模式 HBsAg 浓度低，多为急性感染早期或隐性携带。2+4+5 模式、2+4 模式、2 模式、2+5模式中抗HBs 浓度差异有显著性(P0.01)，HBsAg 的体液免疫应答是 T 细胞依赖的，产生的抗HBs 认为与循环中病毒清除有关，故抗HBs 是一种保护性抗体，是对乙肝感染后获得免疫力的标志，乙肝治愈或趋向治愈的象征。1+4+5 模式、1+4 模式中抗HBe 浓度显著高于 2+4+5 模式、4+5 模式中的抗HBe 浓度
13、；有 HBsAg阳性或抗HBe 阳性模式中抗HBc 的浓度显著高于抗HBs 阳性模式中抗HBc 的浓度(P肝硬化 慢性乙肝，提示多数患者 HBV 感染时间较长，且抗HBe 主要见于低浓度 HBsAg 或抗HBs 阳性的急、慢性患者；抗HBc 浓度波动与病情呈平行关系，与病毒增殖和肝细胞损害有关，在临床上常用高浓度或低浓度来判断乙肝的转归和预后，如果检出高浓度提示患病中，且抗HBc 是 HBV 感染后血清中最早出现的标志抗体，是流行病学调查的良好指标，其效价高，持续时间长，甚至终生携带。近年来医学临床和预防的要求对低水平存在的血清学标志物进行有效检测，具有更重要的临床和流行病学意义。在部分 HB
14、V 感染的人群中，血清表面抗原呈低水平存在，容易造成漏检。尤其是目前普遍采用的 ELISA 检测方法，对低水平人群更容易造成漏检(ELISA 检测的灵敏度是 2 ng/ml)。多方面研究表明，低水平血清 HBsAg 人群占有不小的比例，尤其我国是乙肝的高发区，加之人口众多，此类人群不容忽视。由于检查方法上的不灵敏，还可导致乙肝病毒通过手术，输血等途径发生传播等严重后果。因此，运用 TRFIA 法( 灵敏度可达 0.2 ngml)对乙肝 5 项进行定量检测极大地弥补了 ELISA 法定性检测的不足，成为乙型肝炎血清学标志物现代临床检验的发展方向。TRFIA 技术具有定量检测功能，它对 HBVM
15、临床检测的意义可简述为：动态观察疗效和监测病情；定量分析 HBeAg 和抗HBe 的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果；抗HBc 浓度的高低可反映病毒感染的状态；有利8于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断；TRFIA 和定量 PCR 技术可互相补充；抗HBs 的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用。参考文献：1Diamandis EP Timeresolved fluorometry in nucleic acid hybridization and western blotting techniquesJ Electrophoresis，1993，14(9)：866875 2黄飚，肖华龙，朱利国，等.甲胎蛋白时间分辨荧光免疫分析J 中华肝脏病杂志，2000，8(4)：2483唐珊熙. 微生物学及微生物学检验M 北京：人民卫生出版社,2000:388.4林永焕现代传染病文集M 第 3 卷.
