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1、!#$%&($)%*)!# 年 第 # 期工 艺 技 术黑 木 耳 多 糖 酶 法 提 取 条 件 的 优 化 及脱 蛋 白 工 艺 的 研 究张 立 娟 ， 于 国 萍（ 东 北 农 业 大 学 食 品 学 院 ， 黑 龙 江 哈 尔 滨 !#$#）摘 要 ： 对 黑 木 耳 多 糖 酶 法 提 取 的 因 素 进 行 了 条 件 优 化 ， 并 以%&() 法 为 基 础 ， 进 行 了 脱 除 蛋 白 质 的 正 交 实 验 。 通 过 实验 得 出 复 合 酶 的 添 加 量 为 *+， 反 应 ,#-./； 蛋 白 酶 的 添 加量 为 !0*+， 反 应 1#-./ 时 的 提 取
2、 率 最 高 ， 为 !,02+。 脱 除蛋 白 质 的 最 佳 条 件 是 氯 仿 与 正 丁 醇 的 体 积 比 为 3!， 样 液与 %&() 试 剂 的 体 积 比 为 43!。 蛋 白 质 的 脱 除 率 达1*0#2+， 多 糖 含 量 为 4*0$5+。关 键 词 ： 黑 木 耳 ， 多 糖 ， 提 取 ， 酶!#$%&$(!# $%&()* % +,$-.#,&# (, # #,/01%+)%& 0+#-3 ($ 4.)+&.-%)+% %.)+&.-%)5(-0*%&%)+3#* %)# (5+1+/#36 %,3 ()(7(,%-#25#)+1#,* 8#)# &%)
3、+#3 (. $() )#1(9+,7 5)(#+,:0 1#(3 ($ ;#9%7 )#%7#,? %,3 #)#%&+(, +1# +* A1+,6 %,3 # %1(., ($5)(#%*# +* B6-)# 离 心 机 ， ?)#(& 旋 转 蒸 发 仪 ，9#(&0 恒 温 水 浴 锅 ， ;0)* 循 环 水 多 用 真 空 泵 ， 微型 漩 涡 混 合 器 ， # 分 光 光 度 计 ， 玻 璃 仪 器 气 流 烘 干器 等 。$%! 实 验 方 法&%#%& 葡 萄 糖 标 准 曲 线 及 酪 蛋 白 标 准 曲 线 的 制作 参 见 文 献 .*/。&%#%# 多 糖 提 取
4、 的 工 艺 流 程 黑 木 耳 !粉 碎 !加 水 浸泡 !加 酶 水 浴 中 提 取 多 糖 !离 心 !上 清 液 浓 缩 !乙 醇 沉 淀 !烘 干 !得 粗 多 糖&%#%* 1234 法 脱 除 蛋 白 质 的 工 艺 流 程 沉 淀 多 糖 复溶 !加 %&() 试 剂 除 蛋 白 !上 清 液 浓 缩 !乙 醇 沉 淀 !得 脱 蛋白 后 的 粗 多 糖&%#%- 黑 木 耳 多 糖 酶 法 提 取 的 正 交 实 验.-A$/影 响 黑木 耳 多 糖 提 取 率 的 因 素 很 多 ， 如 复 合 酶 添 加 量 及 反应 时 间 ， 蛋 白 酶 添 加 量 及 反 应 时
5、间 。 针 对 这 些 因 素 ，采 用 四 因 素 三 水 平 的 正 交 实 验 确 定 黑 木 耳 多 糖 酶 法提 取 的 最 佳 反 应 条 件 ， 因 素 水 平 见 表 &。!#!#$%$ &% ($)%*+*,- *. /* 0%1234-!# 年 第 # 期工 艺 技 术!#$ 脱 除 蛋 白 质 实 验 %&() 法 脱 除 蛋 白 质 ， 将 第一 次 乙 醇 沉 淀 得 到 的 粗 多 糖 复 溶 于 !*+, 水 中 ， 加一 定 体 积 的 %&() 试 剂 （ 氯 仿 与 正 丁 醇 按 照 一 定 的 比例 混 合 ） 。 充 分 混 匀 后 静 止 一 定 时
6、 间 ， 放 置 于 分 液 漏斗 中 ， 分 层 后 弃 去 下 层 有 机 溶 剂 层 及 中 间 的 蛋 白 质层-./。针 对 样 液 与 %&() 试 剂 的 体 积 比 、 氯 仿 与 正 丁 醇的 体 积 比 两 个 因 素 ， 设 计 一 个 两 因 素 三 水 平 的 正 交实 验 ， 各 因 素 水 平 见 表 # 所 示 。!#. 实 验 参 数 的 测 定 及 计 算!#.! 糖 含 量 的 测 定 总 糖 测 定 采 用 苯 酚 0硫 酸法 ， 还 原 糖 测 定 采 用 12% 法 。 多 糖 量 3总 糖 量 0还 原糖 量!#.# 多 糖 提 取 率 计 算多
7、糖 提 取 率 （ 4） 3多 糖 量子 实 体 干 重5!*4!#.6 多 糖 含 量 计 算多 糖 含 量 （ 4） 3多 糖 量粗 多 糖 量5!*4! 结 果 与 讨 论!$% 总 糖 标 准 曲 线由 实 验 得 出 的 结 果 绘 制 总 糖 标 准 曲 线 ， 其 结 果见 图 !。!$! 还 原 糖 标 准 曲 线由 实 验 得 出 的 结 果 绘 制 还 原 糖 标 准 曲 线 ， 其 结果 见 图 #。!$& 酪 蛋 白 标 准 曲 线由 实 验 得 出 的 结 果 绘 制 酪 蛋 白 标 准 曲 线 ， 其 结果 见 图 6。!$ 黑 木 耳 多 糖 酶 法 提 取 条
8、件 的 优 化根 据 因 素 水 平 表 分 7 组 实 验 ， 每 组 称 取 $) 黑 木耳 粉 碎 后 按 !87* 的 比 例 加 水 浸 泡 6*+9:， 加 复 合 酶与 蛋 白 酶 于 $*;水 浴 中 反 应 一 定 时 间 ， 进 行 正 交 实验 ， 结 果 见 表 6。水 平因 素（ +9:） 1?+9:! !#$ ! A* B*# !$ !$ !* .*6 !C$ # !#* A*注 ： 为 复 合 酶 反 应 时 间 ， 1 为 蛋 白 酶 反 应 时 间 。表 ! 因 素 水 平 表水 平因 素1 D! B $# 6 66 # !注 ： 1 为 样 液 与 %&()
9、 试 剂 的 体 积 比 ， D 为 氯 仿 与 正 丁 醇 的 体积 比 。表 # 因 素 水 平 表图 ! 总 糖 标 准 曲 线!*A*.*B*#*E3*76F0*!7G#3*77A$吸光度值* #* B* .* A* !*葡 萄 糖 含 量 （ !)H+,）图 # 还 原 糖 标 准 曲 线!*A*.*B*#*E3*!BF0*!7#G#3*77C.吸光度值* !* #* 6* B* $*葡 萄 糖 含 量 （ !)H+,）图 6 酪 蛋 白 标 准 曲 线*.*$*B*6*#*!*E3*!FI*B6G#3*7776吸光度值* !* #* 6* B* $* .*含 蛋 白 质 量 （ !
10、)）实 验 号 1 提 取 率 （ 4）!#6B$.CA7J!J#J6K!K#K6G!#6#6!6!#BB6B*667A!BCC!6B6!6#C!$1!1#16161!1#161!6AABBB!.!#76!B.C!6AC!CB!#6!6.!67!#B!#!.C!6C!$6!B6表 6 ,7（ 6B） 实 验 方 案 及 结 果 分 析!#$%&($)%*)!# 年 第 # 期工 艺 技 术!#$%&( %&!#)$ *%!%+ &,-.*%$& %( #-,$ /+ +%,$0(,-%(%(1 02*$,#*3456 4789:;9?7:ABBCADCEAAFGDHDIJDHDK63D5 董
11、朝 菊 6以 色 列 发 现 柿 果 能 抗 动 脉 硬 化 3456柑 桔 与 亚 热 带果 树 信 息 DHHDACEDFGAL63I5 M-,$N. -.-,- O 72,- P , -*6 Q0#(%(1 /#-(,%R%+-(, -0,%)%,S %( +%.* !*-(, !#+N0,$G T&!-#%$( /*U V+($%,S *%!#,%( R%+-,%( -$-S WXXO #-+%0-*$0-)(1%(1 -$-S -(+ =*%(VT%0-*,N -$-S3456 4789:;89;9P DHHD ECFGDIBAJDIBL635 M-U-$ ,2-$2% : Q-,2
12、 M , -*6 %*1%0-*-0,%)%,S / !#$%&( EW%$!S#$ _-_%F !* R,#-0,$ 3456XOP7OZ9;XP 9ZQZ;9TO DHHIAKEFGBJHH635 Q2%(&, O M%&N#- P-&-1%$2% M , -*6 ;(,%&N,-1(%0%,S/ /#N%, R,#-0,$ ( ,#!V!D %(+N0+ &N,-1(%0%,S / Q-*&(*-,S!2%&N#%N& ;BC 3456 4789:;OZ 4;X;:ZQZQ7T?ZP =79 =77W QT?Z:TZ ;:W ZTO:77YP V:?XX7: QO7M8O?: M;Y;M
13、8 M7Y;M8 M;?QO? DHHDBEIFG DHIJDHL3L5 张 惟 杰 6复 合 多 糖 生 化 研 究 技 术 356上 海 G上 海 科 技 出 版社 ABCK6L63K5 李 建 武 余 瑞 元 袁 明 秀 等 6生 物 化 学 实 验 原 理 和 方 法 356北 京 G北 京 大 学 出 版 社 ABB6ALC63C5 吴 东 儒 主 编 6糖 类 的 生 物 化 学 356北 京 G高 等 教 育 出 版 社 ABCK6从 极 差 分 析 结 果 来 看 ， 初 步 得 出 影 响 多 糖 提 取率 的 因 素 大 小 分 别 为 WT;， 最 佳 组 合 为IWDT
14、A;I， 按 照 最 佳 反 应 条 件 进 行 验 证 实 验 ， 结 果 黑木 耳 多 糖 的 提 取 率 为 AL6CIa， 较 黑 木 耳 多 糖 提 取 率最 高 的 L 号 样 （ AL6Ka） 略 高 。!$# %&() 法 脱 蛋 白 的 正 交 实 验 结 果进 行 B 组 实 验 ， 按 照 方 法 中 所 述 进 行 ， 实 验 结 果如 表 所 示 。从 实 验 结 果 可 以 看 出 ， 影 响 蛋 白 质 脱 除 率 因 素的 主 次 顺 序 为 ZW， 即 氯 仿 与 正 丁 醇 的 体 积 比 样 液与 Q)-1 试 剂 的 体 积 比 ； 各 因 素 的 最
15、好 水 平 分 别 是 氯仿 与 正 丁 醇 的 体 积 比 为 IbA， 样 液 与 Q)-1 试 剂 的 体积 比 为 IbA。影 响 多 糖 含 量 的 因 素 主 次 同 样 为 ZW； 各 因 素的 最 好 水 平 分 别 是 氯 仿 与 正 丁 醇 的 体 积 比 为 bA， 样液 与 Q)-1 试 剂 的 体 积 比 为 bA。综 合 蛋 白 质 脱 除 率 和 多 糖 含 量 两 方 面 的 因 素 来考 虑 ， 选 取 氯 仿 与 正 丁 醇 的 体 积 比 为 bA， 样 液 与Q)-1 试 剂 的 体 积 比 为 bA 为 最 佳 组 合 ， 此 时 蛋 白 质的 脱 除 率 为 CD6HKa， 多 糖 含 量 为 D6IBa。* 总 结影 响 黑 木 耳 多 糖 提 取 率 的 主 次 因 素 依 次 为 复 合酶 添 加 量 ， 复 合 酶 反 应 时 间 ， 蛋 白 酶 添 加 量 ， 蛋 白 酶反 应 时 间 。 通 过 实 验 得 出 复 合 酶 的 添 加 量 为 Da， 反应 L
