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1、1Apelin 对两肾一夹高血压大鼠离体主动脉环的舒张作用作者：庄红，金戈，陈磊，杨鹏麟 【摘要 】 目的: 探讨小分子活性肽 Apelin-13 对两肾一夹（2K1C）高血压大鼠离体主动脉环的舒张作用及意义。方法: 清洁级雄性 SD 大鼠 27 只，随机分为正常对照组和 2K1C 高血压模型组。测定平均颈动脉压(mCAP)、左心重与体重比值(LVM/BW)以及右肾重/左肾重(RK/LK)，以评价 2K1C 模型。 采用累计加药法，观察 Apelin-13 分别对用去甲肾上腺素（ NE）预收缩的对照组大鼠和 2K1C 高血压组大鼠离体胸主动脉环张力的作用。结果: 模型组大鼠 mCAP、LVM/
2、BW 和 RK/LK 分别较对照组高 50.38(P 0.01)、32.16%(P 0.01)和 51.02%(P 0.01)。Apelin-13 在（10-1110-7）molL-1 浓度范围内对内皮完整的两组大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用，且模型组舒张率高于对照组 (P 0.05)。结论: Apelin-13 具有显著的舒张主动脉的作用，并且对高血压大鼠血管环的舒张作用更强，提示 Apelin-13 在血管的保护作用中扮演了重要角色。 2【关键词】 Apelin；主动脉；舒张作用；两肾一夹；高血压；肾性Abstract: Objective: To investigate the
3、effect of apelin on vasodilatation of isolated thoracic aorta rings in rats of two Kindey one-clip renal hypertension and its significance. Methods: Twenty-seven male Sprague-Dawley（SD ）rats with weight of 150180 g were randomly divided into two groups，control rats(n =12) was estimated and model rat
4、s of two Kindey one-clip (2K1C) renal hypertension (n =15). Then，the model of 2K1C renal hypertension by monitoring the mean carotid arterial pressure (mCAP)， measuring the ratio of left ventricular mass (left ventricle plus septum) to bodyweight (LVM/BW)， and right kidney to the left (RK/LK). Isola
5、ted aorta rings were perfused and were given the resting tension. Then，the effects of accumulated Apelin-13 on aorta rings with endothelium in pre-constricted with norepinephrine (NE) were observed. Results: The mCAP and LVM/BW of 2K1C group were 50.38% and 32.16% higher than those of the control gr
6、oup， respectively (P 0.01， P 0.01). And the ratio of RK/LK in the 2K1C group was 51.02% higher than that in the control group (P 0.01). Apelin-13 3was a potent vasodilatator on rat thoracic aorta. Apelin-13 at 10-1110-7 molL-1 caused dose-depenent vasodilatation in endothelium intact rings pre-const
7、ricted with NE. Response of arteries from renal hypertension rats was increased (P 0.05). Conclusion: These results indicate that apelin-13 relaxes the thoracic aorta in the two groups and the response of vasodilatation is enhanced in the rat thoracic aortas from the 2K1C hypertension group. It may
8、be an important protecting factor and play an important role in the protection of blood vessel.Key words: Apelin-13；aorta；vasodilatation；two-kidney and one-clip；hypertension；RenalApelin 是从牛胃分泌物中提取并纯化出的新的小分子活性肽，为 G 蛋白耦联受体 血管紧张素受体 AT1 相关的受体蛋白(putative receptor protein related to the angiotensin recept
9、or AT1, APJ )的天然配体1,2。Apelin 及其 APJ 在体内分布广泛，以内分泌、旁/自分泌的方式调节心血管系统稳态，具有扩张血管、降低血压和增强心肌收缩力的效应及利尿等生物学作用3-12。动物实验发现 Apelin 能显著降低大鼠平均动脉压，而不引起心率的变化48；且 SHR 大鼠对 Apelin 的降压作用更敏感7 。本实验旨在通过观察 Apelin-13 对离体大鼠主动脉环张力的影响，探讨 Apelin-13 对血管作用，并且通过观察 Apelin-13 对两肾一夹高血压大鼠离体胸主动脉环张力的变化，初步探 Apelin-APJ 系统在肾性高血压发生发展中可能的作用。1
10、材料和方法1.1 药品与试剂 Apelin-13 购自美国 Phoenix Pharmaceuticals Inc；乙酰胆碱( acetylcholine， ACh)购自Sigma 公司；去甲肾上腺素（Norepinephrine，NE）购自上海禾丰制药有限公司，产品批号：6A11005。Krebs-Henseleit(K-H)液(mmolL-1)：含 NaCl 120，KCl 5.5，MgCl26H2O 1.2，CaCl2 2.5，NaH2PO4 1.2，NaHCO3 20，EDTA-Na2 0.03，Dextrose 10，pH 7.27.4。1.2 实验动物分组及模型复制 本实验采用健康
11、雄性 SD 大鼠 27只，体重 150180 g（由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2003-0003 ） 。大鼠适应新环境 2 d 后，将大鼠随机分为两组：正常对照组（n =12）及两肾一夹肾性高血压模型组（n =15） 。51.2.1 模型组大鼠13,14：术前禁食过夜，自由饮水，用戊巴比妥钠(35 mg/kg，ip.)麻醉，上腹部正中切口，沿腹白线逐层分离，暴露肾脏及肾动静脉，玻璃分针分离动静脉，用银夹将肾动脉套住，并打结固定，术后正常进食与喂水。1.2.2 对照组大鼠：仅开腹但不行肾动脉狭窄术，术后给予正常进食及喂水。1.3 大鼠平均颈动脉压及（LV+S）/
12、BW 和 RK/LK 的测定 大鼠饲养 8 周后，用戊巴比妥钠（ 35 mg/kg BW，ip. ）麻醉，称重，左颈总动脉插管连接 Powerlab 生理记录仪，记录平均颈动脉压（mCAP)。放血处死动物，迅速剪开胸腔和腹腔，取出心脏、两侧肾脏。剪去右心房组织，沿室间隔边缘剪下右心室，然后称取左心室加室间隔（LV+S，LVM ）的重量，并计算出（ LV+S）/BW ；两侧肾脏去包膜后分别称左肾（LK）及右肾（ RK）重量，并计算出RK/LK。1.4 胸主动脉环的制备与稳定 大鼠用戊巴比妥钠(35 mg/kg，ip.)麻醉，左颈总动脉插管放血处死动物，迅速取胸主动脉，置于通以 95% O2+5%
13、 CO2 混合气体的 K 璈液中。小心去除周围结缔组织后将血管剪成约 34 mm 宽的血管环。避免过度牵拉，以保护内皮的完整。然后，将血管环放入含 Krebs 液的浴槽6内，持续通以 95% O2+5% CO2 的混合气体，将静息张力调至 2 g。在 37 下稳定 90 min，期间每 15 min 换液一次。血管内皮的完整性用 ACh 检验。待血管稳定后换液一次，再向浴槽中加入 1molL-1的 NE 使血管收缩，收缩达到峰值后稳定 15 min，然后加入 10molL-1的 Ach 观察能否引起血管舒张，若使预收缩的血管环舒张 60%80%则可认为内皮完整；如不产生舒张或舒张幅度小于 10
14、%，则视为内皮不完整，弃之。以 NE(1molL-1) 诱发最大收缩幅度为 100%，以加入药物后的血管张力幅度与 NE 诱发最大收缩幅度之间的比率反映血管张力的变化。1.5 Apelin-13 对两组大鼠离体主动脉环的舒张效应的观察 对照组和模型组血管环均分别在 2 g 最适静息张力下平衡 90 min 后，向浴槽内加入最终浓度为 1molL-1 NE 预收缩血管，待血管收缩稳定后，向浴槽内依次加入最终浓度分别为 10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 molL-1 Apelin-13，记录血管的张力变化。1.6 统计学处理方法 用不同浓度下的血管收缩值制备剂量-效应曲线，在每
15、次实验中分别计算舒张百分数，半数有效浓度（EC50）值用 Scatchar 法将浓度 -效应曲线转化为直线后通过回归运算求得。7数据用 SPSS 11.5 统计学软件进行统计学处理，两组间比较采用独立样本 t 检验，组内比较采用单因素方差分析。2 结果2.1 两肾一夹肾性高血压大鼠模型指标(mCAP 、LVM/BW) 模型组大鼠 mCAP 较对照组高 50.38%(P 0.01)，LVM/BW 较对照组高 32.16%(P 0.01)，RK/LK 较对照组高 51.02%(P 0.01)。见表 1。2.2 Apelin-13 对 NE 预收缩的主动脉环张力的影响2.2.1 Apelin-13 对对照组主动脉环张力的效应：在 10-1110-7molL-1 的浓度范围内 Apelin-13 对内皮完整的对照组离体大鼠胸主动脉环有舒张作用，其舒张作用随着浓度的增大而显著增强(P0.01)，且在 Apelin-13 在浓度为 10-7mol/L 时，对预收缩的胸主动脉环的最大舒张率 Emax=(44.4311.1)%，EC50=(0.390.21) 。见表 2 与图 1。2.2.2 Apelin-13 对模型组主动脉环张力的效应：8在 10-1110-7molL-1 的浓度范围内 Apelin-13 对内皮完整的模型组离体大鼠胸主动脉环有舒张作用，其舒张作用随着浓度的增大而显
