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1、1HLA DRB1 基因多态性与贵州地区汉族人群结核病的易感性分析【摘要】 目的：探讨 HLA DRB1 基因多态性与汉族人群结核病的遗传相关性。方法：用聚合酶链反应 序列多态性分析(PCRSSP)技术分别对 47 例贵州地区汉族活动性结核病患者及 53 例汉族健康对照者进行 HLA DRB1 等位基因分型。结果：在等位基因HLADRB1 中，结核病患者的 HLADRB1*16 的基因频率明显高于正常对照组(P0.05)，而 HLADRB1*11 基因频率则低于正常对照组(P0.05)。结论：HLADRB1*16 可能为贵州地区汉族人群结核病的易感基因，HLADRB1*11 可能为汉族人群结核
2、病的保护基因。 【关键词】 HLADRB1 基因; 多态性;易感性;结核病;贵州省Study on the association of the polymorphisms of HLA DRB1 genes with the susceptibility to tuberculosis in a population of Han nationality in GuizhouWANG Yongxia(Department of Clinical Microbiology and Immunology, Hainan Medical College, Haikou 571101, China)
3、ABSTRACT Objective: To determine whether or not the polymorphisms of the HLA DRB1 gene are associated 2with tuberculosis heredity in Han people. Methods: The polymorphisms of the HLA DRB1 gene were typed by polymerase chain reaction sequence specific primers (PCRSSP) technique among 53 healthy contr
4、ols and 47 tuberculosis cases of Han people from Guizhou province. Results: The frequency of HLADRB1*16 allele in tuberculosis cases was significant higher than that in healthy controls (P0.05), but frequency of HLADRB1*11 allele was lower than (P0.05). Conclusion: The results suggest that HLADRB1*1
5、1 allele is closely correlated to the incidence of tuberculosis in this population of Han nationality, while HLADRB1*11 allele may be associated with an antagonist effect in the pathogenesis of pulmonary tuberculosis in this population.KEY WORDS Polymorphisms; HLADRB1*11 gene; Susceptibility; Tuberc
6、ulosis; Guizhou province结核病是由结核分枝杆菌感染引起的严重危害人类健康的全球性传染病。据统计全球每年约 300 万人死于结核病，成为由单一感染因素引起死亡人数最多的疾病。然而，并非所有感染结核分枝杆菌者都发展成为结核病，据 WHO 的统计资料，仅有不到 1/103的感染者会进一步发展成为临床结核病1,这说明结核病的发病不仅与感染有关，还与环境及机体的遗传易感性密切相关。 HLADRB1 基因位于人第 6 对染色体短臂上，是最具多态性的遗传系统，国内外已有其多态性与结核病易感性的相关报道，但不同民族和人群结果不一致。本研究应用聚合酶链反应一序列特异性引物(polymer
7、ase chain reaction sequence specific primers， PCRSSP)技术研究贵州地区汉族人群 HLADRB1 基因多态现象与结核病易感性的相关性，以获得与结核病易感相关的遗传学资料。1 材料与方法1.1 研究对象病例组: 病例标本来自于贵阳市结防所经检查确诊为活动性肺结核的汉族患者 47 例, 男性 27 例，女性 20 例，年龄 2459 岁，平均年龄 32 岁，无艾滋病、糖尿病、高血压等合并症。正常对照组: 随机选取无血缘关系的健康汉族人群 53 例, 男性 32 例, 女性21 例, 年龄 2354 岁，平均年龄 30 岁, 无结核病接触史、结核病史
8、及遗传病史。1.2 试剂4DNA 抽提试剂盒购自美国 PELFREEZ 公司, Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 DNA Marker 购自大连宝生物工程有限公司 ,HLADRB1 PCRSSP 分型试剂盒购自美国 Lambda 公司。1.3 标本采集静脉采血约 23 mL , 用 EDTA.Na2 抗凝备用。1.4 DNA 提取采用 DNA 抽提试剂盒严格按说明书操作。提取的 DNA 用紫外分光光度计测定浓度和纯度,A 260/280 nm 应在 1.61.8, DNA 浓度在 80 ng/L, 抽提的 DNA 于20 保存备用。1.5 PCRSSP 分析 HLA DRB1 基因多态性按
9、试剂盒说明操作, 对抽提的 DNA 样本进行 PCR 扩增。扩增条件: 96 预变性 150 s; 96 变性 15 s， 65 复性 60 s，共10 个循环;95 变性 15 s， 62 复性 50 s，72 延伸 30 s, 共22 个循环。 取 PCR 扩增产物于 2% 琼脂糖凝胶上 100 V 稳压电泳 1 h，于凝胶成像仪观察结果, 按试剂盒提供的基因电泳格局图确定基因位点。51.6 统计学处理患者组与正常组之间基因频率差异分析采用 2 检验, 当1T5, 但 n40 时, 用连续性校正检验; 当 T1 或 n40时, 用 Fisher 精确检验。P0.05 为差异有统计学意义。2
10、 结果2.1 PCRSSP 分析 HLA DRB1 基因多态性根据各 PCR 产物是否扩增出目的片段综合判定 HLADRB1基因型, 如图 1 显示该例基因型为 HLADRB1* 04/15。2.2 等位基因 HLADRB1 基因频率的比较HLA DRB1 基因共出现 13 个位点, 基因频率见表 1。在 53例正常对照组的 HLADRB1 等位基因中, DRB1*03、 DRB1*08、DRB1*09、 DRB1*11 及 DRB1*12 等位基因频率较高; 而 DRB1*01、DRB1*04 、DRB1*15 及 DRB1*16等位基因频率较低。在 47 例结核病患者的 HLADRB1 等
11、位基因中, DRB1*04、DRB1*08、DRB1*09 、DRB1*14 及 DRB1*16 等位基因的频率较高;而 DRB1*01、DRB1*11 及 DRB1*12 等位基因频6率较低。其中 DRB1*16 等位基因频率明显高于正常对照组(P0.05) ; DRB1*11 等位基因频率明显低于正常对照组，(P0.05) , 其他差异无统计学意义。表 1 病例组与正常对照组HLADRB1 等位基因频率分布3 讨论大量研究表明，结核病的发生不仅与环境因素有关，还与机体的遗传因素密切相关。不同种族人群携带的不同基因可能影响结核病的易感性2。HLA 复合体作为人体最复杂的基因系统，与结核病的相
12、关性越来越受到研究者的重视，尤其是其中的 HLADRB1等位基因更成为研究的重点。但关于 HLADRB1 等位基因与结核病易感性的相关性研究结果不尽相同，这也表明不同种族人群中易感基因是有差别的。本文旨在研究中国汉族人群 HLADRB1 等位基因与结核病易感性的相关性，通过对 47 例贵州地区汉族结核病人及 53 例正常对照的研究发现，病人组中 DRB1*16 等位基因频率明显高于正常对照组(P0.05); 而 DRB1*11 等位基因频率明显低于正常对照组，(P0.05)。说明 DRB1*16 等位基因可能为中国汉族人群结核病的易感基因，DRB1*11 等位基因可能为结核病的保护性基因。这与
13、刘志辉3等报道的中国南方汉族人群结核病的易感基因为 DRB1*16 是一致的，但保护性基因却不同，刘志辉3等报道的为 DRB1*13.3 及 DRB1*01,而本研究结果为 DRB1*11，说明7易感基因与保护基因还可能与地域有关, 王敬慧等4 报道中国北方汉族肺结核可能的易感基因是 DRB1*15，可能的抗性基因为DRB1*11，也说明了这一点。国外研究也表明结核病的发病与HLADRB1 等位基因密切相关，印度、韩国等均发现5,6肺结核的发病与 HLADRB1 呈正相关，其中印度报道的主要位点是DRB1*1501，而韩国为 DRB1*0803。保护性基因却不尽相同，如俄罗斯人为 DRB1*0
14、37，墨西哥人为 DRB1*03 和 DRB1*07。因此，研究基因与结核病的相关性必须结合种族与地域。导致这种不一致的可能原因为：(1)遗传背景和环境的差异:遗传背景不同,其DRB1 等位基因也不同，对疾病结果的影响也不同。环境因素也至关重要,研究表明，基因型完全相同的个体在不同条件下可表现为不同的表型;(2)有些亚型在人群中的携带率偏低,研究可能需要更大样本量7。HLADRB1 基因与结核病易感性的关联可能是其编码的DR 分子参与了结核菌体成分中致病肽的递呈，产生多种细胞因子，诱发细胞免疫应答及迟发性超敏反应，增加或降低了机体对结核病的易感性。也可能 HLADRB1 基因不是致病的真正基因
15、，而与致病基因连锁。【参考文献】1 HW Tso, WK Ip, WP Chong, et al . Association of interferon gamma and interleukin 10 genes wit h tuberculosis in Hong Kong ChineseJ. Genes and 8Immunity,2005,6:358363.2 林容,薄建萍,蔡望伟,等.NRAMP1 基因 DNA 多态性与海南黎族人结核病易感性的研究J.实用临床医药杂志,2008, 12(1): 6164.3 刘志辉，罗一鲁，周琳，等.HLADR 基因与中国南方汉族部分人群肺结核易感基
16、因的研究J.中华结核和呼吸杂志，2004，28(6)：390394.4 王敬慧，宋长兴，王苏民, 等.人类白细胞抗原 DRB1 基因与肺结核的相关性研究J.中华结核和呼吸杂志，2001，28(24)：302306.5 Selvaraj P. HLA antigen profile in pulmonary tuberculosis patients and their spousesJ. Indian J Med Res，1998，107(2)：155159.6 Kim HS, Park MH, Song EY, et al. Association of HLADR and HLADQ genes with susceptibility to pulmonary t
