3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖一．原理3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，再一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量 次法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法二．试剂1. 3,5－二硝基水杨酸试剂(DNS试剂)甲液－溶解6.9克结晶酚（苯酚）于15.2毫升10％氢氧化钠中，并稀释至69毫升，再此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠乙液－称取255克酒石酸甲钠，加到300毫升10％氢氧化钠中，再加入880毫升1％3,5－二硝基水杨酸溶液将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天后使用2.0.1％葡萄糖标准液准确称取100毫克分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100毫升，保存于冰箱备用三.制作标准曲线取9支大试管，分别按表一顺序加入各种试剂表 一管号数量项目空白12345678含糖总量(毫克)00.20.40.60.81.01.21.41.6葡萄糖液(毫升)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸馏水(毫升)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4DNS试剂(毫升)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5加热均在沸水浴中加热5分钟冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水(毫升)21.521.521.521.521.521.521.521.521.5光密度(O.D.520nm)将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上用绿色滤光片 (520nm) 进行比色测定，用空白管溶液调零，记录光密度值。
以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线四.定糖根据所取样品的个数来确定所需的试管数，在这里以7支试管为例，分别按表二顺序来加入各种试剂 将各管混匀后，按制作标准曲线时的同样方法的操作，测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出还原糖含量 还原糖%= (还原糖毫克数样品稀释倍数)/培养基中总含糖量100表 二管号数量项目样 品空 白1 23456样品量(毫升)01.01.01.01.01.01.0蒸馏水(毫升)2.01.01.01.01.01.01.01.0DNS试剂(毫升)1.51.51.51.51.51.51.5加热均在沸水浴中加热5分钟冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水(毫升)21.521.521.521.521.521.521.5光密度(O.D.520nm)。
