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1、细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论借助工程学原理技术，有目的利用改造生物遗传性状获得特定细胞组织产品或新型物种的综合性科学技术。细胞全能性:指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整的个体的潜能。脱分化：又叫去分化，是已有特定结构和功能的植物组织，其细胞被诱导改变原有发育途径，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。愈伤组织：由脱分化的细胞经过分裂产生的无组织结构无明显极性的松散细胞团，它具有再分化成为完整植物体的潜能。继代培养：是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，随着营养的消耗和代谢产物的积累，需将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继
2、代或传代培养。外植体：主要指用于离体培养的植物或组织切段，可以是组织器官细胞等。胚状体：离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。植物组织培养： 在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体等外殖体，培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽等，或者长成新的完整植株一种实验技术。人工种子：将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有和保护功能的人工胚乳和人工种皮形成的颗粒。胚胎工程：又叫发育工程。主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物的技术。 超数排卵：利用促性腺激素处理，使得卵巢中有更多的卵
3、泡发育，更多的卵被排出，利用手术的取出卵母细胞。目的是最大限度地利用母畜的生殖能力。 胚胎移植：是指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎从供体母畜取出（也可是体外发育的胚胎） ，移植到另外一头与供体同时发情排卵、但未经配种的母畜（称为“受体” ）的相应部位。 胚胎分割：借助显微操作技术或徒手操作方法，切割早期胚胎成 2、4 等多等份，再移植给受体母畜，从而制造同卵多仔后代的技术。胚胎分割是扩大胚胎利用率的一种有效途径。 试管动物：又叫体外受精动物。将供体的精子和卵子在体外受精、体外培养胚胎，然后将发育到一定程度的胚胎移植入受体完成发育出生的动物。细胞重组：细胞重组又叫细胞拆合，指从活细胞中分离出细胞
4、器及其组分，在体外将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞的一种技术。微细胞:又可被称为微核体，是指含有一条或几条染色体（即只含一部分基因组） ，外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。核质体:与胞质分离得到的细胞核，带有少量胞质并围有质膜，称为“核体” 。 胞质体:是除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。胞质杂种: 将两种来源不同的核外遗传物质与一个特定的核组合在一起得到的细胞。 细胞融合:又称体细胞杂交，是指用人工的方法使二个或二个以上的细胞或原生质体(除去细胞壁的细胞) 融合成一个细胞的技术。染色体工程：按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体
5、的技术，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的目的。广义上讲它还应包括染色体内部的部分遗传操作技术，因此也称为染色体操作。 胚胎融合：是将两枚或两枚以上的胚胎（同种或异种动物）的部分或全部细胞融合在一起，使之发育成一个胚胎，然后移植到受体母畜体内让其继续发育形成一种嵌合体后代的技术。植物细胞培养:在离体条件下，将分离的植物细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。植物细胞两相培养技术: 在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系形成上下两相，细胞在水相中生长合成次生代谢物质，分泌出来的产物被转移至有机相中的培养技术。 原代培养：是指将机体
6、取出的细胞或组织进行培养，在首次传代前的培养。 传代培养：从原代培养的细胞继续转接培养称为传代培养。 单克隆抗体：经过免疫哺乳动物单一的 B 淋巴细胞,可以分泌单一抗体,这种具有特异性的、同质性的抗体。 HAT 培养基：其有三种成分：H:次黄嘌呤、A:氨甲蝶呤、T:胸腺嘧啶核苷。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能，可在 HAT 培养基中通过补救途径合成 DNA，又能长期存活与繁殖。ES 细胞胚胎干细胞简称 ES 细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞系，可分化成任何一种组织类型的细胞。转基因动物：是指在基因组内稳定地整合以实验方法导
7、入的外源基因，并且可以稳定地遗传给后代的遗传工程动物。 组织工程：是应用生命科学、医学和工程学原理与技术，利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一种技术。 温度休克法：包括冷热休克法两种，作用于动物细胞，组织细胞分裂或卵子第二极释放形成多倍体试述植物组织培养的步骤。（1）一般采用茎尖、根尖等幼嫩部位等。 材料的消毒：自来水清洗、酒精浸泡、漂白粉饱和溶液或氯化汞溶液消毒、无菌水冲洗。 2）制备外植体：在无菌的环境中切取生长点位置的外植体一般 0.5 厘米左右。 3）接种与培养：无菌条件下，将切好的外植体立即接种在合适培养基上，封口，保持一定温度，培养。4）芽球增殖：将获得的新生材料分株
8、或者切段，转入增殖分化培养基中继代培养长成侧芽或不定芽，一般 1 个月左右。 5）长成完整植株（母瓶）：转入生根培养基中培养，1 个月左右生根，发育成完整植株。 （6）扩充多个子瓶培养：分株、分瓶。 （7）练苗、移栽:打开容器，室内自然条件下适应一段时间。取出试管苗，移栽到合适基质中。一段时间后，移栽到大田土壤中。试述植物组织培养的意义应用（1）无性系快速繁殖技术：与传统的无性繁殖相比，工作不受季节限制，具有用材少、速度快等特点。尤其对繁殖系数低、不能利用种子繁殖的名、优、特植物品种的繁育意义重大。（2）获得无病毒植株：不会或很少发生病毒病害。（3）新品种选育：新品种有效率高、周期短、纯度高等
9、优点。 （4）在遗传、生理生化和病理等研究上的应用：能快速、大量地获得性状一致的实验材料。（5）种质资源的保存：节省人力、物力，大大延长保存期。同时也便于种子资源的交换和转移，防止病害。（6）产业化前景：花卉种苗的产业化生产、蔬菜水果种苗的脱毒试述细胞培养的灭菌方法和各自的适用范围。（1）物理灭菌方法：（）湿热消毒：即高压蒸汽灭菌法。使用最广最有效的消毒方法。主要用于培养液、培养器皿等灭菌。 （2）紫外线消毒：只适用于空气和物体表面的灭菌，一般要求紫外灯距离地面不超过 2.5m 为宜， ，消毒物品是不宜相互遮挡。 （3）过滤除菌：主要用于气体的除菌。（2）化学消毒法 ：常用的是 70%的乙醇，
10、主要用于操作者皮肤、操作台表面及无菌室内的壁面处理。 （三）抗生素消毒：在细胞培养时，在培养基中加入青霉素等抗生素抑制细菌、真菌等污染。试述人工种子的制作流程。1）选取目标植物，从合适的外植体诱导愈伤组织 2）把愈伤组织转移到液体培养基上，并在培养基中增生扩大 3）把愈伤组织转移到无激素培养基上，使其形成体细胞胚 4)选用合适的介质包埋体细胞胚，包裹形成人工种皮和胚乳。5)放于温室中播种，获得目标植物试管动物的培育步骤。1、采集精子并选择有活力的精子。钙离子、血清蛋白有助于精子的体外获能。卵母细胞成熟的标志：生发泡破裂；染色体凝集；极体排出；透明带软化；卵丘细胞扩展。2、体外受精：与卵子放在一
11、起培养，精子顶体外终雄体原核和雌体原核合二为一 3、受精卵与胚胎体外培养：受精成功的标志至少是看受精卵是否可以发育至桑葚胚或囊胚期阶段。4、胚胎移植：受体的选择：与供体发情周期同步、无疾病、繁育史好的雌性动物。移植方法有手术法和非手术法。5、体内发育、出生。细胞核移植克隆动物的的技术路线 1、核供体细胞的选择（胚胎细胞/胚胎干细胞/成体细胞）与细胞核的获得。 2、核受体细胞的选择（为成熟的卵母细胞）与细胞核的去除（显微去核/射线去核/化学法去核） 。3、细胞核移植：将供体核移植入已去核的受体细胞内 常用方法胞质内注射和透明带下注射两种方法4、重组胚泡的激活与培养(电激活和化学激活)。培养有体内
12、和体外两种 5、胚胎移植 供体要与受体同时发情 6、体细胞核移植后代的鉴定体细胞克隆应用与意义 1、检验动物细胞全能性 2、加速动物繁殖、优良育种、保护珍贵动物。3、利用转基因克隆动物进行生物药物的生产 4、异种器官移植 5、治疗性克隆（可以用患者本人细胞培育出新组织。 ）细胞融合的方法和各自特点 1、生物法 有仙台病毒法等。 各种病毒都具有凝集细胞的能力。仙台病毒除有此能力外，还具有促使凝集的细胞发生融合的能力。缺点：融合随机，融合率低。要提前培养病毒，并且灭活后才能使用 2，化学法 最常用的方法：PEG 结合高 Ca2+-高 pH 诱导法诱导 优点：融合成本低，产生异核率高，不受物种限制，
13、融合率较高 缺点：过程繁琐，可能对细胞有毒害。 3、物理法 主要采用电融合诱导法。基优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小；方便简单、可在显微镜下观察或录像融合过程；免去 PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控制性强等等。缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。叙述原生质体的纯化、活力鉴定与培养方法1、原生质体的纯化：（1）离心沉淀法，操作简便，但原生质体得率低且易损伤。 （2）漂浮法：原生质纯净、完整，但得率低。 （3）界面法，原生质体的完整，得率高。2、活力鉴定：（1）染色法：二乙酸荧光素（FDA）法。结果：产生荧光的是有活力的原生质体酚藏花红（0.001%)染色法：有活力的原生质体吸收染料显示
14、红色，无活力不能染色伊文思蓝（0.25%)染色法： 有活力的原生质体不吸收染料，无活力显示蓝色。 （2）渗透压变化：有活力的原生质体在低渗液是体积膨胀，在高渗液中体积缩小，无活力的原生质体无体积的变化。 （3）胞质环流法：有活力的原生质体能在显微镜下观察到胞质环流现象。3、培养方法：（1）液体培养法：悬浮于液体培养基中进行培养。 （2）固体平板培养法：种到或混合到装有一薄层固体培养基的培养皿内进行培养。 （3）双层培养法：在琼脂培养基上部加入一薄层液体原生质体培养原生质体多倍体特点：（1）形态上的巨大性（2）优良性状：光合效率提高、生长速度快、营养成分提高等。 （3）抗病能力强：在对逆境的耐抗
15、性方面会得到增强。单倍体的优点 (1)极易发现产生的突变尤其是隐性突变，是理想的实验材料(2)在育种上具有极高的价值 缩短育种年限；克服远缘杂交不亲和；提高诱变育种效率；合成育种新材料单倍体植物的特点：单倍染色体 细胞全能性 叶小株矮，生活能力弱，高度不育 种质纯，不受显性等位基因的遮蔽影响单倍体产生的途径 1) 自然界的自然发生 自发产生单倍体株的机率很低，小于千分之一 2)人工诱导； 组织培养：花粉和花药培养 核置换 染色体的消失物理因素诱导：X 射线处理花粉后授粉诱发孤雌生殖体外植物细胞培养的特点是什么？ 1）与微生物细胞相比，植物细胞要大很多（30-100 倍） 。2）很少以单一细胞形
16、式悬浮生长 ，常以非均相集合细胞团的方式存在。3）植物细胞的纤维素细胞壁和大的液泡很容易被剪切力高的传统搅拌式微生物反应器损伤。 4）植物细胞生长速度慢，操作周期长。5）植物细胞培养基成分丰富而复杂劳动，适合微生物生长，防止污染的发生更困难。6）与微生物不同，植物细胞培养一般需要光照，通过光合作用合成有机物，因此氧气和 CO2 的含量与传递对培养过程影响较大植物细胞固定化培养有什么优点？ 1)细胞经包埋后使所受的剪切力损伤减小，维持了细胞的稳定性，利于采用传统的生物反应器进行大规模培养。2) 细胞密度高于悬浮培养且利于传质。3）细胞生长缓慢，利于次生代谢产物的积累。4) 增加了细胞间的接触和信息传递，有利于代谢产物的合成。5） 有利于进行连续培养和生物转化。 6）可以反复利用，可以方便的进行产物的连续性收获，降低成本。叙述植物单细胞制备方法与培养方法。 A 机械法 主要通过机械磨碎、切割植物体从而获得游离的细胞。效率很低，获得的细胞数量也非常有限。B 酶解法 最有效。主要是
