《甘草酸诱导人乳腺癌细胞凋亡和细胞内Ca2＋的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《甘草酸诱导人乳腺癌细胞凋亡和细胞内Ca2＋的关系（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1甘草酸诱导人乳腺癌细胞凋亡和细胞内 Ca2的关系【关键词】 甘草酸 人乳腺癌细胞（MCF7 凋亡 细胞内 Ca2+甘草酸（Glycyrrhizin ，GL ）是甘草中最重要的有效成分之一，有研究1,2表明甘草酸对人癌细胞增殖有明显的抑制和诱导其凋亡的作用。本研究即探讨甘草酸诱导人乳腺癌细胞（MCF7 ）凋亡与细胞内 Ca2浓度变化的关系。1 材料与方法1.1 细胞株 MCF7 由美国引进2；甘草酸单胺（纯度99.7%） 浙江强力宁制药公司研究所产品。1.2 细胞增殖抑制测定 用 MTT 比色法测定。1.3 细胞凋亡测定 用末端脱氧核苷酸转移酶介导 dUTP 末端标记法、Annexin V 流
2、式细胞仪法和单细胞凝胶电泳（彗星试验）法2检测凋亡细胞。7.5mmol/L 甘草酸处理细胞 24h，用 Fura2 荧光负载方法3测定Ca2+i 的变化。1.4 统计学方法 t 检验，半增殖抑制浓度（IC50）用加权直线回归法计算。2 结果2.1 甘草酸对 MCF7 细胞增殖抑制作用 从 5mmol/L 甘草酸浓度起对细胞的增殖抑制作用出现显著性差异(P0.01)，且抑制程度呈剂量依赖性，IC50 为 15.84mmol/L。其中5mmol/L、7.5mmol/L 和 10mmol/L 甘草酸的增殖抑制率分别为22.5%、32.9%和 40.2%（P0.05，*P0.05，*P0.012.2
3、甘草酸对 MCF7 细胞凋亡的诱导作用 用选定的甘草酸浓度处理 MCF7 细胞 24h 后，检测的细胞凋亡结果见表 1，可见7.5mmol/L 和 10 mmol/L 甘草酸使细胞凋亡率明显增加（P0.01 和 P0.05） ，并呈剂量依赖性。在同等浓度作用下，三种方法检测的结果相差不大。32.3 甘草酸诱导 MCF7 细胞凋亡时Ca2+i 的变化 7.5mmol/L甘草酸处理 MCF7 细胞 24h 后，测得甘草酸处理组 Ca2+i 为(58.591.03)nmol/L，对照组Ca2+i 为(129.1711.45) nmol/L，甘草酸处理组Ca2+i 显著低于对照组（P0.05） 。2.
4、4 细胞内 Ca2+螯合剂阻遏甘草酸诱导 MCF7 细胞凋亡的作用 用 100mol/L 细胞内 Ca2+螯合剂 BAPTAAM 和 7.5mmol/L甘草酸组合处理 MCF7 细胞 24h 后，单细胞凝胶电泳法检测的凋亡结果见表 2，组合处理组的凋亡率明显低于单纯的 7.5mmol/L 甘草酸处理组（P0.05，*P0.053 讨论本研究结果显示甘草酸具有抑制人乳腺癌 MCF7 细胞增殖的作用。癌细胞增殖抑制可由多种机制导致，其中癌细胞发生凋亡是近年来人们关注的热点。本研究用碱性单细胞凝胶电泳法检测得到的凋亡率，与检测反映早期凋亡特征的细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸的Annexin V 流式细胞仪
5、法、以及与高灵敏度检测中、晚期凋亡的特征即凋亡细胞 DNA 断裂的 TUNEL 法所得的结果有明显的一致性。结果显示，三种方法测定的在同等甘草酸浓度作用下的凋亡率基本相等，这可能反映甘草酸诱导凋亡细胞发生 DNA 断裂的速率很快。4另外，甘草酸诱导 MCF7 细胞凋亡的凋亡率，只略低于相应甘草酸浓度作用的细胞增殖抑制率，可见甘草酸诱导凋亡的作用在抑制MCF7 细胞增殖中起重要作用。目前，多数文献3,4报道细胞内Ca2+水平升高与诱发细胞凋亡密切相关，而 Kluck 等5 和 Bansal等6用 EGTA 等 Ca2+络合剂处理 NS1 鼠骨髓瘤细胞和CEMC7 人 T 淋巴细胞，发现Ca2+i
6、 下降伴随细胞凋亡发生，他们认为Ca2+i 下降抑制 DNA 和蛋白质合成，影响许多 Ca2+依赖性的蛋白质活性、细胞活动和基因表达等。本研究结果显示甘草酸诱导人乳腺癌 MCF7 细胞凋亡组的细胞内 Ca2+水平明显低于对照组，这一结果与 Kluck 等5和 Bansal 等6报道相符，我们推测甘草酸诱导乳腺癌 MCF7 细胞凋亡可能与细胞内 Ca2+水平降低有关。但是通过细胞内 Ca2+螯合剂 BAPTAAM 络合细胞内游离Ca2+而减弱 18甘草次酸对 MCF7 细胞凋亡的诱导作用，这表明甘草酸诱导 MCF7 凋亡并不全依赖于细胞内 Ca2+水平下调，可能还与其他诱导癌细胞凋亡的信息传递途
7、径有关，具体甘草酸诱导肿瘤细胞凋亡的机制尚有待进一步探讨。【参考文献】 1 Malagoli M, Castelli M, Baggio A, et alEffect of glycyrrhizin and its diastereoisomers on the growth of human 5tumor cells: Preliminary finding JPhytother Res, 1998, 12(1):S95S972 黄炜，黄济群，张东方，等全反式维甲酸、18 甘草次酸和甘草酸诱导人肝癌细胞分化和凋亡的研究J中西医结合肝病杂志，2003，13(3):148150 3 Grynki
8、ewicz G, Poene M,Tsien RY. A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties J. J Biol Chem, 1985, 260(3):34403450.4 Mattana A, Tozzi MG, Costa M, et al. By releasing ADP, Acanthamoeba castellanii causes an increase in the cytosolic free calcium concentration and apop
9、tosis in wish cells J. Infect Immun, 2001, 69(6):41344140.5 Kluck RM, McDougall CA, Harmon BV, et al. Calcium chelators induce apoptosisevidence that raised intracellular ionised calcium is not essential for apoptosis J. Biochim Biophys Acta, 1994, 1223(2): 247254.6 Bansal N, Houle AG, Melnykovych G. 6Dexamethasoneinduced killing of neoplastic cells of lymphoid derivation: lack of early calcium involvement J. J Cell Physiol, 1990, 143(1): 105109.
