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1、1海风藤酮治疗大鼠实验性急性胰腺炎【关键词】 胰腺炎；血小板活化因子；海风藤酮；肿瘤坏死因子；白细胞介素Role of kadsurenone in treatment of experimental acute pancreatitis in rats【Abstract】 AIM: To explore the effect of kadsurenone on inflammatory mediators in rats during acute pancreatitis (AP). METHODS: A total of 104 SD male rats which weighed 250
2、-300 g were randomly divided into sham group (n=24), AP group (n=40) and kadsurenone group (n=40). The animals in the groups were killed in 3, 6, 12, 24 h after operation for experimental observation. RESULTS: The serum levels of PAF, TNF and IL6 of AP rats significantly increased （P0.01）, and the s
3、erum level of TNF got to a peak at 6h and the serum IL6 at 12 h after operation (P0.01 vs sham group in each period of time). After kadsurenone was used in AP rats, the serum levels of PAF, TNF and IL6 were significantly decreased （P0.05）. CONCLUSION: Kadsurenone can inhibit inflammatory mediators a
4、nd relieve the damages of 2the pancreas or lung in AP rats.【Keywords】 pancreatitis; plateletactivating factor; kadsurenone; tumor necrosis factor; IL6【摘要】 目的：探讨海风藤酮对急性胰腺炎炎症介质的影响及其治疗作用. 方法：雄性 SD 大鼠 104 只，质量 250300 g，随机分为假手术对照组（n=24） ，急性胰腺炎组(n=40)和海风藤酮治疗组(n=40)，每组又按 3，6 ，12，24 h 分为 4 小组. 结果：急性胰腺炎组各时段血
5、清 PAF，TNF ，IL6 显著升高，其中 PAF 在各时相持续升高，TNF 在 6 h 时达高峰，而 IL6 在 12 h 达高峰，与假手术组各个时相段比较有显著性差异（P0.01） ；用药后治疗组各个时相段可显著降低血清 PAF，TNF ，IL6 的水平（P0.05）. 结论：海风藤酮可抑制炎症介质，明显减轻胰腺/肺组织病理损害.【关键词】 胰腺炎；血小板活化因子；海风藤酮；肿瘤坏死因子；白细胞介素 60 引言急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是严重危害人类健康的急腹症，病死率高、发病机制复杂，有多种因素及炎性因子参与救3治难度大. 细胞因子及炎性递质在 AP 的发
6、生发展中起重要作用 1-2. 海风藤酮（ kadsurenone）是中药海风藤的提取物，我们研究海风藤酮对急性胰腺炎合并肺损伤大鼠炎症介质 PAF，TNF，IL6的影响，为探讨该药在临床上应用治疗 AP 的可能性提供理论和实验依据.1 材料和方法1.1 材料雄性 SpraqueDawley（SD ）大鼠 104 只，体质量250 300 g，购自西安交通大学实验动物中心 . 实验动物实验前禁食 12 h，自由进水. 海风藤酮（共 150 mg） 购自北京大学药学院，牛磺胆酸钠购自 Sigma 公司，髓过氧化物酶（MPO ）测定试剂盒 购自南京建成生物公司，PAF 标准品购自 Sigma 公司，
7、大鼠 IL6 ELISA 试剂盒 购自 Sigma 公司，大鼠 TNF ELISA 试剂盒购自Sigma 公司 .1.2 方法采用随机数字把 104 只大鼠分为 3 组，分别为假手术对照组(n=24)，急性胰腺炎（AP）组(n=40)，海风藤酮治疗组(n=40)，每组又按术后 3，6 ，12，24 h 平均分为 4 个小组. 第 1组大鼠术前 12 h 禁饮食，氯胺酮 ip 麻醉（1.5 mL/kg） ，仰卧固定，剪毛后常规消毒、铺巾，腹正中开腹，轻微刺激胰胆管后，关腹；第 2 组采用张群华等 3的方法制备 AP 模型；第 3 组制模术后立4即经阴茎静脉注入海风藤酮，每 6 h，10 mg/k
8、g， 12 次. 由于海风藤酮均以 DMSO(25 g/L)为溶剂，故假手术组及 AP 模型组均于术后经阴茎静脉注射等量的 DMSO. 3 组大鼠分别在术后3，6 ，12 ，24 h，氯胺酮 ip 麻醉（1.5 mL/kg） ，仰卧固定，剪毛常规消毒、铺巾，开腹. 经下腔静脉抽血 48 mL，不加抗凝剂，凝血后离心（3000 r/min，18，10 min） ，取血清 1.53 mL (-80)保存，留待进行生物法检测血小板活化因子、ELISA 检测TNF 及 IL6 及全自动生化仪检测血清淀粉酶 . 同步取胰腺组织和肺组织，部分制成组织匀浆，测定髓过氧化物酶（MPO）的活性，部分用 Boui
9、n 液固定，石蜡包埋、切片，HE 染色，光镜下观察胰腺及肺的炎症病理变化.统计学处理： 采用 SPSS 12.0 for Windows 软件包进行统计分析，实验数据以 xs 表示；组间比较用非参数秩和检验， P 0.05 为差异有统计学意义.2 结果2.1 血清淀粉酶活性 AP 组血清淀粉酶显著升高，到 12 h 时达高峰，与假手术组相比较有统计学差异（P0.01） ；治疗组与AP 组各时相段比较可降低血清淀粉酶，差异有统计学意义（P 0.05） ，但仍高于假手术组各时相段（P0.05，表 1）.5表 1AP 大鼠血清淀粉酶浓度的变化（略）aP0.05, bP0.01 vs AP.2.2 胰
10、肺组织 MPO 活性采用单因素方差分析：假手术组各时相段胰腺及肺组织 MPO 活性相比较无统计学差异（P 0.05） ；注射 35 g/L 牛磺胆酸后，AP 组、治疗组胰腺及肺组织 MPO 活性显著升高，到 12 h 时达高峰，与假手术组相比较有统计学差异（P 0.01） ；给药后 3，6，12 及 24 h 时，海风藤酮治疗组与 AP组组间比较差异有统计学意义（P0.05 或 0.01）. 说明海风藤酮可显著降低胰腺及肺组织 MPO 活性（表 2）.表 2AP 大鼠胰腺及肺组织 MPO 活性的变化（略）aP0.05 vs AP.2.3 血清 PAF，TNF ，IL6AP 组各时段血清PAF，
11、TNF ，IL6 升高，其中 PAF 持续升高，TNF 在 6 h 时达高峰，而 IL6 在 12h 达高峰，与假手术组各个时相段比较有统计学差异（P0.01） ；用药后治疗组与 AP 组比较各个时相段可降低血清PAF，TNF ，IL6 的水平（ P0.05，表 3）.6表 3 血清中 PAF,TNF,IL6 的变化（略）aP0.05 vs AP.2.4 胰肺病理组织学假手术组大鼠胰腺/肺组织未见明显病理改变. AP 组 3 h 后胰腺水肿加重，于 12 h 达高峰，腺泡呈孤岛样分布，片状出血坏死，大量 PMN 浸润；6，12 h 肺以 PMN 增多为主，肺泡间隔增厚，可见少量红色蛋白渗出物，
12、并可见肺泡壁破裂，肺间质充血、水肿、明显增宽，肺泡和肺间质中有大量的中性粒细胞浸润. 用药后，可显著减轻胰腺/肺组织的病理损害，炎性细胞浸润减少，水肿、出血、坏死减轻，表现为点状坏死.3 讨论AP 发病机制十分复杂，早期胰腺细胞损伤导致局部的炎症反应，随着疾病进展，就会引起全身炎症反应综合征（STRS）严重时可出现多脏器功能不全（MODS）甚至多脏器功能衰竭（MOF） ，病死率常高达 40%4-5. 胰腺腺泡损伤后，释放多种受激活的胰酶及炎症细胞因子，有多种细胞的过度激活和相互作用，产生氧自由基和炎症介质引起胰腺的血管通透性增加，最后导致了胰腺炎的发生. 目前研究表明，重症急性胰腺炎相关肺损伤
13、也与胰酶异常激活和释放、炎性细胞过度激活、炎症介质的释放致个身 STRS 等有7关6. 我们证实注射牛磺胆酸后，AP 组各时段血清 PAF 显著持续升高，到 24 h 时达高峰，与假手术组对应时相段比较有统计学差异（P0.01） ，假手术组各个时相段血清 PAF 相比较无统计学差异（P 0.05）. 提示 PAF 和其他的炎性细胞因子（如 TNF,IL6）一起在 AP 中起着重要作用. 治疗组与 AP 组相应时相段比较有统计学差异（P0.01） ，说明海风藤酮能够抑制血清 PAF,TNF 及 IL6 的水平. 相关性也表明血清 PAF 变化与胰腺组织 MPO 活性、胰腺组织形态学改变呈正相关；
14、血清 PAF 变化与肺组织 MPO 活性、肺组织形态学改变呈正相关. PAF 拮抗剂海风藤酮治疗 AP 的主要作用机制可能有7-8： 与 PAF 竞争靶位，抑制 PAF 活性的发挥；抑制 AP 血中 PAF 含量的升高； 抑制巨噬细胞、淋巴细胞及内皮细胞产生 TNF,IL6,IL8 等炎性细胞因子和炎性递质； 抑制中性粒细胞活性，降低髓过氧化酶；减低血管通透性，提高微循环的血流速度；降低胰酶活性，减轻胰腺组织自我消化等作用机制.PAF 是通过多种效应、多个环节参与 AP 的发生发展，已日益受到关注，而且阻断 PAF 治 疗 AP 的研究也取得了可喜的成绩，本实验应用特异性 PAF 抑制剂海风藤
15、酮来治疗 AP，是第一次系统的在炎症介质水平上了解海风藤酮对 AP 的影响 . 目前尚未见临床报道，为阐明 AP 的发病机制和治疗 AP 提供了理论和实验依据.【参考文献】81 Komatsu K, Shimosegawa T, Uchi M, et al. Erythropoietic protoporphyria with severe liver dysfunction and acute pancreatitis J. J Gastroenterol, 2000, 35:391-395.2 Abu Zidan FM, Bonham MJ, Windsor JA. Severity of
16、 acute pancreatitis: a multivariate analysis of oxidative stress markers and modified Glasgow criteria J. Br J Surg, 2000, 87:1019-1023.3 张群华, 蔡瑞,吴树强,等. 急性坏死性胰腺炎大鼠的炎性介质变化和生长抑素的作用J. 中华医学杂志,1997,77:355-358.4 Bhatia M. Novel therapeutic targets for acute pancrcatitis and associatedmultiple organ dysfunction syndrome J. Curr Drug Tardcts Inflanm Allergy, 2002, 1(4):343.
