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1、1清肺化痰汤合红霉素对 COPD 痰热阻肺证大鼠模型的疗效及机理探讨作者：黄美杏 龚享文 陈斯宁 姚玉兰 张华玲【摘要 】 目的：探讨清肺化痰汤合红霉素对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）中白介素-8 （IL-8 ）表达及气道炎症的影响。方法：将 40 只 SPF 级 Wistar 大鼠随机分为 4 组，采用复合因素造模法建立 COPD 大鼠模型，以观察清肺化痰汤合红霉素对 COPD 大鼠血清、BALF 中 IL-8 表达及气道炎症的影响。结果：与空白组比较，模型组各大鼠小气道出现组织细胞损伤、管壁炎症细胞浸润、血管增生及肺泡的融合，血清及 BALF 的 IL-8 的
2、含量明显上升；与模型组比较，红霉素组在应用红霉素干预后大鼠小气道出现组织细胞损伤、管壁炎症细胞浸润、血管增生及肺泡的融合有所好转，血清及 BALF 的 IL-8 的含量明显下降，具有统计学意义；红霉素+清肺化痰汤组较红霉素组在同样的检测指标有明显下降。结论：清肺化痰汤合红霉素可以降低血及 BALF 中 IL-8 的表达，明显的抑制气道炎症的改变，提示清肺化痰汤具有治疗 COPD 气道炎症的作用。 【关键词】 清肺化痰汤；COPD；IL-8；气道炎症2Abstract Objective To discuss the effects of Qingfei Huatan decoction com
3、bined with erythromycinin COPD (chronic obstructive pulmonary disease) model rats, including IL-8 in serum、BALF and airway inflammation. Methods 40 SPF level Wistar rats were randomly divided into 4 groups, COPD model rats were induced by complex factors, which is in order to observe the effects of
4、Qingfei Huatan decoction combined with erythromycin on the expression of IL-8 in serum、BALF and airway inflammation. Results Compared with control group, model group appeared cell injury in small airway, inflammatory wall cells infiltration, angiogenesis and integration of alveoli, IL-8 levels in se
5、rum and BALF increased significantly; compared with those of model group, after the intervention, small airway tissue injury, wall infiltration of inflammatory cells, angiogenesis and integration of alveoli were all improved, IL-8 levels in serum and BALF decreased significantly in erythromycin grou
6、p; compared with those of erythromycin group, indices of erythromycin + Qingfei Huatan decoction group were decreased significantly. Conclusion Qingfei Huatan decoction combined erythromycin can reduce the expression of IL-8 in serum and BALF, significantly inhibit the change of airway inflammation,
7、 3suggesting Qingfei Huatan decoction can treat COPD airway inflammation.Key Words Qingfei Huatan decoction; COPD; IL-18; Airway inflammation1 材料与方法1.1 实验材料与仪器健康雄性 SPF 级 Wistar 大鼠，体重为（ 25020）g，广西医科大学动物实验中心提供；LPS（脂多糖）购自美国 Sigma 公司，用蒸馏水配成浓度为 200 g / 200 L 溶液。香烟：刘三姐烤烟型香烟，南宁卷烟厂生产，焦油含量为 15 mg，烟碱含量为 1.1 m
8、g；自制 0.5 m0.55 m1.5 m 的玻璃箱，一次性中心静脉穿刺引流管（驼人牌）购自河南驼人医疗器械公司，IL-8 放免试剂盒购自解放军总医院科技开发中心，BALF TNF - ELISA 试剂盒购自尚柏生物医学技术有限公司，严格按照说明书操作；检测仪器：SN-695B 型智能放免 测量仪，酶标仪电脑分析系统 ELX808（美国产） 。1.2 试验用药4清肺化痰汤：桑白皮、黄芩、鱼腥草、瓜蒌壳、瓜蒌仁、川贝、苏子、茯苓、半夏、杏仁、甘草，上述免煎中药均购自江阴天江药业有限公司，灌胃用，每天 1 次，共 14 d。红霉素：注射用乳糖酸红霉素 30 万 U，大连美罗大药厂生产（国药准字 H
9、21021227） 。1.3 实验方法1.3.1 动物分组SPF 级健康雄性 Wistar 大鼠 40 只（鼠龄 12 周） ，按随机数字表分为 4 组，每组 10 例，第 1 组作为空白组，第 2 组为模型组，第 3 组为红霉素组，第 4 组为红霉素 +清肺化痰汤组（红+清组） 。4 组大鼠均以相同的饲料及水喂养。1.3.2 造模方法采用复制林芫等建立 COPD 大鼠模型的方法1，运用烟雾吸入、LPS 灌肺、冷空气刺激复合因素大鼠 COPD 造模方法。在造模的第 1 天、第 14 天在大鼠麻醉后，于胸骨上 1 cm 处进行气5管切开，向大鼠气管内注入 LPS 100 U（1 mg/mL） ，
10、第 213 天、1525 天，每天在有机玻璃密闭箱持续吸入新鲜的香烟雾 2 h， 20 支/d，每天熏烟后立刻用低于环境温度（ 20 ）5冷空气刺激 1 h，造模 28 d 结束。痰热阻肺证模型的建立2：26 d 气管加滴 LPS 1 次。1.3.3 治疗方法空白对照组及模型组模型建立后灌胃相同剂量的生理盐水。红霉素组在模型确立后应用红霉素腹腔注射治疗，根据体表面积换算方法（具体用药药量为 10 mg/kg2，第 4 组为红霉素+清肺化痰汤组，在灌服红霉素的基础上加用清肺化痰汤清肺化痰汤用药剂量参考 1995 年版药典 ，用药量相当于临床等效剂量（根据人和动物按表面积折算的等效剂量比率表计算）
11、 ，具体用药量为 0.768 g/kg，每天 1 次，共 14 d。1.4 观测指标及方法1.4.1 大鼠症状行为学大鼠精神状态、活动性、黏膜颜色，皮毛颜色，食欲状况、体重6变化、咳嗽、气喘、喉中痰鸣、肺部触及语颤、呼吸费力等。1.4.2 病理解剖学1.4.2.1 大鼠气管、支气管、肺组织病理标本制备 动物处死后，迅速摘取大鼠的肺组织，右下肺、部分气管支气管经 10% 甲醛溶液固定。肺大体观察，右肺上叶组织 HE 染色行光镜观察，光镜下观察大鼠的小气道炎症、气道重塑、肺泡改变、血管炎症、血管平滑肌增殖情况、炎症细胞浸润的情况。1.4.2.2 小气道炎症改变 根据 Cosio 等设计的小气道病变
12、评估方法和标准观察小气道炎症及重构情况。气道病理改变评分表评价指标共 10 项，每项分为 03 级。分别积以 03 分，其中气道纤毛倒伏粘连缺失、上皮细胞变性坏死糜烂脱落、气道上皮杯状细胞增生、气道上皮鳞状化生、气管壁黏膜充血水肿、气道平滑肌细胞断裂/增生 6 项的病变程度分别为无、 1/2 周径；气道管壁单核巨噬细胞浸润、气道管壁中性粒细胞浸润、气道管壁嗜酸细胞浸润 3 项分别为无、 20 个/HP；气道管壁淋巴细胞浸润分别为无、未形成滤泡、有滤泡、滤泡明显。1.4.3 细胞因子标本收集及检测71.4.3.1 血清因子的收集与检测 用 10% 乌拉坦注射液（1 mL/100 g）腹腔麻醉动物
13、，仰卧位固定，破开腹腔，从腹主动脉中取血 3 mL，放入离心管内， 3 000 r/min 离心 20 min，收集上清液，保存在 - 20低温冰箱统一备测，放免法检测血清 IL-8 含量。1.4.3.2 BALF 的收集与检测 切开胸腔，钝性分离气管和食道，结扎右主支气管，在主支气管处剪一小口，用一次性中心静脉穿刺管，进入 0.51 cm 结扎固定，行左侧支气管肺泡灌洗，针管分别抽取 3 mL 生理盐水，每次缓慢注入，保留 30 s 后回抽，重复 3 次，每只大鼠收集 BALF 6 mL，2 000 r/min 离心 10 min，用酶联免疫法检测 BALF 中 IL-8 的含量。1.5 统
14、计学方法用 SPSS 13.0 统计软件进行统计学处理，计量资料以 xs 表示，组间比较用单因素方差分析。2 结 果2.1 症状行为学结果8空白组大鼠精神状态好，活动能力强，营养良好，被毛白皙有光泽，饮食正常，体重增长迅速，呼吸平稳，无喉中痰鸣、肺部未触及呼吸震颤、咳嗽、气促、口唇紫绀等现象，模型组大鼠精神差、活动性差、被毛灰黄，脱落稀疏，饮食明显减少，体重增长明显减慢，呼吸喘促，肺部触及呼吸震颤、咳嗽、气促、口唇紫绀等现象。红霉素组精神稍差，活动能力下降，大鼠毛发欠润泽，有被毛脱落，饮食较少，体重增长减慢，呼吸喘促，肺部无触及呼吸震颤、无呼吸费力、但有咳嗽、气促、口唇紫绀等症状。红+清组大鼠
15、精神欠佳，活动能力稍下降，毛发欠润泽，无毛发脱落，饮食较多，体重增长明显，无呼吸喘促，肺部无触及呼吸震颤、但仍有咳嗽、气促、口唇紫绀等症状。2.2 病理解剖学空白组见气管黏膜纤毛柱状上皮细胞完整，纤毛整齐，气管及各级支气管仅见散在的杯状细胞，未见腺体增生及明显炎症细胞浸润，气道结构未见异常；肺泡大小正常，结构完整，未见炎症细胞浸润；肺血管平滑肌均匀，无增生，周围无炎症细胞浸润（见图 1） 。模型组见支气管黏膜上皮纤毛倒伏，上皮部分脱落，部分支气管腔内可见炎性分泌物，杯状细胞增生，较多慢性炎症细胞浸润，肌层断裂，部分腺泡萎缩、破坏，管腔狭窄，肺泡破裂并融合在一起，肺小血管变形并有血管平滑肌增生，
16、管腔狭窄及炎症细胞浸润（见图 2） 。9红霉素组见支气管黏膜上皮纤毛倒伏，上皮部分脱落，部分支气管腔内可见炎性分泌物，杯状细胞增生，有慢性炎症细胞浸润，肌层断裂，部分腺泡萎缩、破坏，管腔狭窄，肺泡破裂并融合在一起，并见肺泡周围中性粒细胞浸润，肺小血管可见变形并有血管平滑肌增生，管腔狭窄及炎症细胞浸润等病理改变较模型组有所减轻（见图 3） 。红霉素组+清肺化痰汤见脱落的黏膜上皮及杯状细胞增生轻于红霉素组，周围肺泡壁增厚较轻，支气管腔内见少量分泌物。气道、肺泡炎症浸润及气道重塑和肺小血管病变好于红霉素组（见图 4） 。3 讨 论现代医学认为 COPD 是一种具有气流受限特征的疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展，与肺部对有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。它的发病根本在于各种致病因素作用于机体导致的气道，肺实质和肺血管的慢性炎症，各种炎症细胞通过释
