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1、1不同条件下人免疫球蛋白类制品 HCV 抗体检测结果的比较【摘要】 目的 主要探讨人免疫球蛋白类制品在不同条件下对 HCV抗体检测结果的影响。方法 使用不同的四个生产厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA ） ，用两种不同的稀释液将免疫球蛋白的蛋白浓度稀释至 1%。比较免疫球蛋白原液在酸性（pH4）条件下和中性条件下对检测结果的影响；人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白(pH4)加入稳定剂后对检测结果的影响；静注人免疫球蛋白在酸性条件（pH4 ）下和中性条件下对检测结果影响。结果 两种不同的稀释液对检测结果进行比较，结果完全一致；在酸性条件下，两种不同的稀释液，有一厂家检测结果 OD 值在灰区
2、内。结论 酸性（pH4）条件下的制品不同厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒检测结果有明显差异，使用不同的稀释液和制品中有无稳定剂对检测结果没有影响。 【关键词】 人免疫球蛋白 HCV 抗体 ELISA用酶联免疫吸附（ELISA ）方法对原料血浆实施 HBsAg、HCV抗体和 HIV 抗体的筛查有利于保障原料血浆的安全1 。目前对原料血浆的筛查采用单采血浆站使用一种诊断试剂进行初筛，血液制品生产企业使用不同厂家的另一种诊断试剂进行复查，即便经过了2两次严格的逐袋筛查，仍有因隐匿性丙肝感染而导致漏检的。目前公认，采用 WHO 推荐的低温乙醇法并经病毒灭活处理的人血白蛋白和免疫球蛋白是安全的血液制品2
3、 。即便如此，为进一步提高血液制品的安全性，今年国家食品药品监督管理局已要求血液制品生产企业积极摸索和建立人免疫球蛋白类制品进行 HCV 抗体和 HIV抗体的检测方法及标准，鉴于此因，笔者选择 10 个批次的经低 pH放孵病毒灭活的人免疫球蛋白，在同一蛋白浓度条件下（蛋白浓度为 1%） ，对不同 pH 值条件和按制品工艺要求加入不同稳定剂，以及两种不同蛋白稀释液对 HCV 抗体检测结果的影响进行了比较，现报告如下。1 材料与方法1.1 样品来源 样品取自本所血液制剂室低 pH 放孵病毒灭活后的 10 批人免疫球蛋白原液（编号 110） 。1.2 试剂与仪器1.2.1 试剂 丙型肝炎病毒抗体诊断
4、试剂盒（ELISA ）分别由厂家A，批号：C20061103、C20070101、C20070203；厂家 B，批号：20061113、20070107、20070203 。厂家 C，批号：20060801、20060802；厂家 D，批号：32006085806、2006095807、2006115808。1.2.2 仪器 酶标仪，型号：Multiskan Mk3（芬兰雷勃公司生产） ，洗板机，型号：Wellwash 4 Mk2（芬兰雷勃公司生产） ，检测按仪器和试剂盒要求操作。1.3 稀释方法 （1 ）样品 A 低 pH 放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，不含任何稳定剂，pH3.84.1；样
5、品 B：低 pH 放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为肌肉注射人免疫球蛋白，含氯化钠、甘氨酸、麦芽糖、硫柳汞，作为稳定剂，pH6.77.0 ；样品 C：低 pH 放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为静注人免疫球蛋白，含麦芽糖作为稳定剂，pH3.84.1 。分别使用生理盐水和相应的诊断试剂盒的稀释液将以上三类样品的蛋白浓度稀释为 1%，pH 值不做调整，为原制品 pH值，所得样品编号为A1、A2 ； B1、B2； C1、C2，1 为生理盐水稀释，2 为诊断试剂盒稀释液稀释，为酸性条件下样品；为中性条件下样品。 （2）将样品 A 的 pH 值调整为 6.77.0；将
6、样品 B 的 pH 值调整为 3.84.1 ；将样品 C 的pH 值调整为 6.77.0，按方法（1 ）稀释以上样品，所得样品编号为A1、A2；B1、B2；C1、C2。所得样品按各诊断试剂厂家说明书进行检测，灰区为 CO 值15%的4范围。2 结果应用不同稀释方法所获得的样品，用不同厂家的试剂盒进行检测，每个样品检测两孔，检测结果见表 1。表 1 10 批不同条件的样品四个不同厂家试剂 HCV 抗体检测结果3 讨论 以上结果表明，10 批人免疫球蛋白类制品，对免疫球蛋白原液、人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白制品进行检测使用生理盐水稀释3和使用试剂盒稀释液稀释，然后按检测试剂说明书进行检测，其结果
7、是完全一致的。经对免疫球蛋白原液（不含任何稳定剂） ，人免疫球蛋白（含稳定剂） ，静注人免疫球蛋白（含稳定剂） ，检测结果表明，不同的制品所含稳定剂与否对检测结果也没有影响；在低pH 条件下，免疫球蛋白原液（低 pH 放孵后） ，静注人免疫球蛋白(pH4) 经两种不同稀释液稀释，发现厂家 B 的检测试剂盒 10 个批次的检品 OD 值均在灰区内，另外三个试剂厂家的检测结果均为阴性。文献报道用 ELISA 法检测 HCV 抗体灰区血样经重复检测有12.6%（11/87）的假阴性率4 ，并且对落在灰区范围内的随机抽样样本进行的 PCR 检测，HCVRNA 的阳性率为 18%（3/11） 。表明灰区
8、内样本确实存在着病毒复制5 ，如果不设置灰区，就有5可能造成漏检，因此，为了提高制品安全性，灰区的设置有着重要的意义6 。但是，不同 HIV 抗体检测对丙型肝炎的检测结果有明显差异7，8 。ELISA 试剂生产厂家包被的抗原片段和生产工艺存在差异是影响试剂盒质量的主要因素9， 10 ，但是从另外三家诊断试剂盒的检测结果和 B 厂家对同一批号制品在低 pH 条件下的结果来看，样品的低 pH 值是影响厂家试剂检测结果并导致样本落在灰区的原因。由低温乙醇法分离工艺并经低 pH 放孵病毒灭活后制备的人免疫球蛋白类制品是安全的，但是在成品检测过程中，由于静注人免疫球蛋白（pH4）制品的酸性特点，有可能使
9、个别厂家生产的诊断试剂盒检测的样品的 OD 值落在灰区内，甚至造成误判的情况。为提高血液制品的安全性，国家食品药品管理局要求对血液制品生产用原料血浆实施“检疫期” ，经对供浆者血浆样本再次进行病毒筛查并检验合格，方可投入生产。除此之外，还应积极摸索和建立免疫球蛋白类制品检测 HIV 抗体、HCV 抗体的方法及标准，随着此项工作的不断深入，笔者认为，对影响 HCV 抗体、HIV 抗体检测结果各种因素，会逐步找到解决的方法。【参考文献】1 杨守纯，陶其敏.我国病毒性肝炎免疫学检测历史回顾与展望. 中华检验医学杂志，1999，22（1）：275-277.62 倪道明. 血液制剂安全性及其对策（ 19
10、91 年单采血浆会议资料）.3 罗时定，邓远运 ,刘素芳,等. 检测献血者及人血液制品中 HCV 抗体结果及分析.中国输血杂志，1994 ，7 （增刊）： 58-59.4 刘朋来，杜菊仙，沈新华.ELISA 检测是抗-HCV 灰带区血样的处理. 中国输血杂志，2003 ，16（1 ）：25.5 许斌，韩光宇，程梅. 血液 HBsAg、抗-HCV 复检中应采用不同试剂和设置低限灰区.临床检验杂志，1998，16（6）：340.6 佘毅敏，黄锦红，周晓真,等. 抗-HCV 检测设置灰区的探讨.中国输血杂志，2006，19（2）：136-137.7 孙爱玉，张琳伟，张新华，等.不同试剂检测献血者抗-
11、HCV 结果的分析.中国输血杂志，2003 ，16（2 ）：77.8 袁红，邱练芬，胡开华，等.11 厂家抗-HCV 酶标试剂盒的评价. 中国输血杂志，2003，16（2）：116-117.79 Lin R, Yatuhashi H, Yano M, et al. Hepatitis C as the cause of chronic non-A, non-B hepatitis; high sensitivity of simultaneous measurement of core and non-structural antibodies. J Gastroenterol Hepatol, 1992,7(5):459.10 季阳. 输血传播的疾病，见：杨成民，李家增，季阳. 基础输血学. 北京： 中国科学技术出版社，2001，400
