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1、1VEGF 在肺癌患者血清和病变组织中的表达及其与疾病预后的关系作者：张祎捷,李现东, 陈娜,韩继昌 李四红【摘要 】 目的：研究肺癌患者病变组织及血清中血管内皮生长因子（VEGF) 的表达及其与肺癌生物学特性之间的关系. 方法：酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化（ SP 法）分别检测不同考察因素的肺癌患者和肺炎性瘤样病变患者血清中及肺癌患者癌组织、癌旁组织和肺炎性瘤样病变患者中病变组织中 VEGF 的表达. 结果：血清VEGF 的表达肺癌患者为（33065） ng/L，明显高于肺炎性瘤变患者的（14335） ng/L (P0.05)；癌组织、癌旁组织及肺炎性瘤样病变组织中 VEGF 的表
2、达率为 74.8%，46.3%和 18.1%，癌组织中表达率明显高于其余两者 (P0.05)，而与癌组织类型、分化程度和淋巴结转移差异具有统计学意义(P0.05). 结论：VEGF 在肺癌组织及肺癌患者血清中异常表达，与肺癌患者病变组织的病理类型、分化程度和淋巴结转移呈明显相关性，与肺癌患者的预后有关，VEGF 表达变化可能成为一些类型肺癌新的诊断标志及基因治疗的新靶点. 2【关键词】 肺肿瘤；血清；血管内皮生长因子；预后0 引言血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF） ，是重要的血管生成正性调节因子，能特异性地促进细胞分裂、增殖及迁
3、移，在肿瘤的发生、发展、侵袭过程中起着至关重要的作用，近年来的许多研究证实：VEGF 与肺癌的新生血管和淋巴管的生长以及肿瘤的生物学行为密切相关. 我们通过免疫组化和酶联免疫吸附法比较不同临床特征的肺癌患者与非肿瘤性肺部病变患者的肺组织及血清中 VEGF 的不同表达，探讨肺癌患者肺组织及血清中 VEGF 的表达与患者年龄、性别、吸烟史以及肺癌组织类型、淋巴结转移、分化程度、临床分期等相关因素的关系，旨在揭示其与疾病预后和复发的相关性.1 对象和方法1.1 对象选择我院 200501/200612 经病理学检查证实肺癌患者的石蜡标本 65（男 40，女 25）例，年龄 3675 平均 (559)
4、岁. （同时取患者外周静脉血）按 1997 年 UICC 修订标准进行TNM 分期：期 20 例，期 17 例，期 17 例，期 11 例. 按病理形态学分为：鳞状细胞癌 38 例，腺细胞癌 27 例. 按分化程度3分为：高、中分化 31 例，低分化及未分化癌 34 例. 所有患者术前均未接受过化疗或放疗治疗. 肺炎性病变组选取同期在我院手术切除并经病理确诊肺炎性假瘤及肺结核患者标本 31（男 19，女 12）例，年龄 4072 平均（547）岁. 作为对照组. 经构成比比较（2 检验） ，肺癌组与肺炎性病变组患者的性别及年龄构成比均一致（P0.05）. 兔抗人 VEGF mAb 即用型 SP
5、 试剂盒（福州迈新公司） ；血清检测 ELISA 试剂盒（美国 G.B 公司）.1.2 方法1.2.1 标本采集所有患者于治疗前空腹抽取静脉血 2 mL（不含抗凝剂） ，静置后，取血清用于 VEGF 的检测.1.2.2 免疫组化染色将待检测标本统一切成 4 m 厚石蜡切片，提取组织细胞，按试剂盒说明进行免疫组织化学（SP 法）染色. 步骤如下：石蜡切片（载玻片经 APES 胶处理）60烤片 4 h. 切片按常规脱蜡至水. 3 g/L 过氧化氢去除内源性过氧化物酶，10 min，水洗. 40 g/L 胃蛋白酶 3032消化 10 min，水洗. 0.01 mmol/L柠檬酸缓冲液内加热至 90后
6、，计时 10 min，室温下自然冷却. 0.05 mmol/L Tris 缓冲液 2 min3 次，滴加正常鼠血清 20 min，滴加兔抗 AR mAb（浓度为 150）4过夜；0.05 mmol/L Tris缓冲液 2 min3 次，滴加生物素化羊抗鼠 IgG（浓度为 1200）4室温下 30 min；0.05 mmol/L Tris 缓冲液 2 min3 次，滴加Streptperoxidase（浓度为 1200）室温下 40 min，DAB 显色，镜下控制. 苏木素复染细胞核、脱水、透明、封片并照相.阳性染色为肿瘤细胞浆内出现棕色颗粒. 组织 VEGF 表达结果判定标准：染色强度：0=未
7、染色，1= 弱染色，2= 中等染色，3=强染色. 细胞染色百分率：0 为 0%阳性细胞，1 为50%阳性细胞. 采用染色强度+细胞染色百分率为记分方法，标准：0 分为(-) ，12 分为(+) ，34 分为() ，56 分为(). 表达程度的划分界限： (-), (+)为阴性表达，(), ()为阳性表达.1.2.3ELISA 检测按试剂盒步骤进行. 将抗人 VEGF mAb 包被于酶标板上，然后加样使标准品或样品中的 VEGF 与 mAb 结合，随后加入生物素化的抗人 VEGF，在酶标板上形成免疫复合物，最后加入辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合并加入酶底物邻苯二胺（
8、OPD）进行显色. 采用 Labsystem 全自动酶标仪测A450 nm 值. 根据标准品不同浓度及所读取 A450 nm 值，取双对数得直线回归方程并符合说明书要求，依直线回归方程求出样品VEGF 浓度. 结果直接用浓度值（ ng/L）高低表示. 上述两个检测内容的所有标本均同时做三个复样检测，取其算术平均值作为一次的结果，重复操作 3 次.5统计学处理：结果采用 SPSS 11.5 统计软件进行统计分析. 两样本比较采用 2 检验，计量资料以 xs 表示，用组内两样本之间的t 检验或近似 t 检验. P0.05 为差异具有统计学意义.A: VEGF 在肺癌组织中的表达; B: VEGF
9、在癌旁组织中的表达; C: VEGF 在肺炎性瘤样病变患者肺组织中的表达.图 1 免疫组化检测2 结果2.1VEGF 在肺癌组织及细胞中的表达肺癌组织和细胞中 VEGF 表达阳性率为（75.62.4）%（表达呈强阳性） ，明显高于癌旁组织和细胞（43.22.1 ）% （表达阳性者呈中度阳性）( P0.05)，也明显高于炎性瘤样病变组织和细胞（15.71.8）%（表达阳性者为弱阳性）( P0.05)，而在癌旁组织和细胞中 VEGF 表达量明显高于炎性瘤样病变组织和细胞差异具有统计学意义( P0.05，图 1).2.2 血清中 VEGF 表达血清 VEGF 的表达在肺癌患者组为（33065） ng
10、/L；炎性病变患者组为（14335 ） ng/L，肺癌组表达量明显高于炎性病变组表达量，组建差异具有统计学意义6（P0.05）.2.3VEGF 在不同疾病相关因素肺癌患者癌组织内和血清中的表达VEGF 表达与患者年龄（以 60 岁为界线） 、性别、吸烟史、肿瘤分期均无明显关系；与肿瘤组织类型、淋巴结转移及分化程度有关；腺癌患者癌组织内表达量显著高于鳞癌患者（P0.05） ；有淋巴结转移者癌组织内表达量显著高于无淋巴结转移者（P0.05） ；低、未分化型患者癌组织内表达量显著高于中、高分化型患者（P0.05，表 1，2）.表 1VEGF 在不同疾病相关因素肺癌患者癌组织中的表达表 2VEGF 在
11、不同疾病相关因素肺癌患者血清中的表达3 讨论VEGF 促肿瘤生长的作用主要是通过促进肿瘤的血管新生来实现的. 它对肿瘤血管内皮细胞的增殖和迁移等发挥着重要作用1. 有研究2-3发现 VEGF 在肺癌组织及血清中的表达水平显著高于肺炎性瘤样病变患者. 而且 VEGF 表达量与许多疾病相关因素密切相关，结果提示 VEGF 在肺癌患者早期诊断、预后判断和临床治疗中发挥重要作用.本研究结果发现，肺癌患者的癌组织中和血清中 VEGF 的表达水平显著高于癌旁组织和肺炎性瘤样病变患者，与国内外研究4-5报道的结论基本一致. 这表明其可能早期就参与肺癌细胞的增殖，7与肺癌的发生、发展，从而预示着其作为肺癌早期
12、诊断的分子标志物之一的可能性以及 VEGF 为靶点的疗法具有较好的靶向特异性. 本研究同时还发现腺癌患者、低（未）分化癌患者、有淋巴结和远处转移患者体内 VEGF 的表达水平分别显著高于鳞癌患者、中（高）分化患者、无淋巴结和远处转移患者，VEGF 的表达水平与患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小及临床分期均无明显相关性. 这一结果也与文献结构报道的相一致6-8. 表明检测 VEGF 的表达对恶性程度、病情轻重的预测无明显价值. Yuan 等6研究发现肺腺癌和鳞癌的 VEGF 表达明显升高，而肺腺癌的表达又较肺鳞癌为高. 梁瑞韵等9及孙杰等10的研究认为 VEGF 的表达与组织类型无明显相关性.
13、出现上述结果的主要原因可能是肺癌患者的组织类型和临床分期以及本身的生物学复杂性有一定关系. 而 VEGF只是其中的因素之一，而且它的作用受到其他许多因素的调节和影响. VEGF 作为一个影响肺癌进展的重要的细胞因子，至少从目前的研究来说，尚不能单独地反映疾病的预后. 但本研究的结果表明VEGF 在肺癌中的表达可以促进肿瘤的发生及恶性转化，增加肿瘤淋巴管侵袭和局部淋巴结转移的可能性，因此它可以较好地评判肿瘤的恶性程度、反映肿瘤的侵袭力及转移能力，可以成为反映淋巴结转移和癌灶转移的重要指标之一，有助于对肿瘤预后的判断.【参考文献】 1 金阳, 陶晓南 , 苏远, 等. 非小细胞肺癌患者血清血管内皮
14、8生长因子水平变化与临床的关系J.临床内科杂志,2006,23（9）: 602-604.2 Sheng H, Ace M, Dcihara H, et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in primary lung carcinomaJ. Acta Med Okayama, 2000, 54（3）：119-126.3 Brekken RA, Thorpe PE. Vascula endothelial growth factor and vascular targetin of soli
15、d tumorJ. Anticancer Res, 2001, 21（6B ）: 4221-4229.4 Toomey D, Smyth G, Condron C, et al. Immune function, telomerase, and angiogenesis in patients with primary, perable nonsmallcell lung carcinoma: Tumor size and lymph node status remain the most important prognostic features J.Cancer, 2001, 92: 2648-2657.5 陈元香, 李远重. 非小细胞肺癌患者肺组织环氧合酶2 表达的变化及其临床意义J.实用肿瘤学杂志, 2005, 19: 16-18.6 Yuan A,Yu CJ, Chen WJ, et al.Correlation of total VEGF mRNA and protein expression with histologic type, 9tumor angiogenesis, patient survival and timing of relapse in nonsmall cell lung cancer.In
