《VEGF在妊娠肝内胆汁淤积症中的作用以及丹参治疗机制的研究 》由会员分享，可在线阅读，更多相关《VEGF在妊娠肝内胆汁淤积症中的作用以及丹参治疗机制的研究 （13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1VEGF 在妊娠肝内胆汁淤积症中的作用以及丹参治疗机制的研究 【摘要】 目的 探讨 VEGF 在妊娠肝内胆汁淤积症中的作用以及丹参活血化瘀改善胎儿血供的可能机制。方法 采集妊娠肝内胆汁淤积症患者血清，Jaffe 法分离培养脐静脉内皮细胞，用 ICP 患者血清刺激培养的内皮细胞，模拟 ICP 的体内环境，行丹参干预，与正常妊娠血清组比较，不同含量作用不同的时间，MTT 法检测细胞活力，ELISA 法检测分泌型 VEGF 蛋白表达。结果 ICP 患者血清与HUVECs 共培养：（1）MTT 法发现随着血清含量的增加 A 值逐渐降低（020%） ，且低于相应浓度的正常妊娠血清组，有统计学差异；（2
2、）ELISA 法发现：同正常孕妇血清组相比，ICP 患者血清组HUVECs 表达分泌型 VEGF 蛋白降低，且随着血清含量的增加和培养时间的延长，VEGF 表达逐渐降低。不同浓度的丹参干预后随着含量的增加（18mg/ml） ，细胞活力和 VEGF 蛋白表达逐渐升高，以 8mg/ml 组作用最佳。结论 ICP 患者血清对 HUVECs 具有损伤作用，使细胞活力降低。其损伤作用可能与 VEGF 的分泌减少有关。丹参对内皮细胞具有保护作用并能增加 VEGF 蛋白的表达。丹参可能通过增加 VEGF 蛋白的表达具有活血化瘀作用，改善胎盘和胎儿的血供而改善围生儿预后。【关键词】 妊娠肝内胆汁淤积症；脐静脉
3、；血管内皮细胞；2血管内皮生长因子；丹参Study of the effects of vascular endothelial growth factor and the therapeutic mechanisms of Salvia Miltiorrhiza Bge in intrahepatic cholestasis of pregnancy【Abstract】 Objective To sudy the effects of vascular endothelial growth factor and the therapeutic mechanisms of Salvia Mil
4、tiorrhiza Bge in intrahepatic cholestasis of pregnancy(ICP). Methods Twelve patients with ICP and twelve normal pregnancy women take part in this study,their serum is collected before therapy when in hospital. Endothelial cells are isolated from human umbilical veins choosed among the 10 normal preg
5、nancy according to Jaffes method, serum of different concentration of ICP groups and normal pregnancy groups is cocultured with HUVECs for different time point respectively. MTT method is applied to measuring the vitality of HUVECs.The expression value of vascular endothelial growth factor(VEGF) is
6、detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) . Results Compared with normal pregnancy , the value of MTT in ICP serum groups,the A value is significantly lower,P0.05. The value of soluble 3VEGF in ICP serum group is lower than that in the nomal pregnancy serum group.With the serum concetrat
7、ion increases, the value of sVEGF decreases in the ICP groups . Compared with ICP group, the value of MTT and sVEGF in the Salvia Miltiorrhiza Bge therapeutic group increases with the concentration increase,8mg/ml of Salvia Miltiorrhiza Bge is the optical concentration. Conclusion Serum of ICP patie
8、nts impairs HUVECs in vitro and decreases the expression of VEGF. The mechanism of serum of ICP patients impairs HUVECs maybe by decreasing the expression of VEGF. Salvia Miltiorrhiza Bge could protect HUVECs against the injury of ICP serum and promotes the expression of VEGF. Salvia Miltiorrhiza Bg
9、e improves HUVECs by increasing the value of VEGF.【Key words】 intrahepatic cholestasis of pregnancy; umbilical vein; vascular endothelial cell(VEC);vascular endothelial growth factor; Salvia Miltiorrhiza Bge 妊娠肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of 4pregnancy，ICP）是一种妊娠特异性的疾病1 ，以孕妇出现全身或局部皮肤瘙痒、黄疸及胆酸增高为特征
10、。ICP 可引起严重的围生儿并发症，围生儿发病率和死亡率明显增加。关于 ICP 胎儿宫内缺氧的机制尚不清楚。胎盘-胎儿血供受到一系列生长因子的调节，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）是一种直接而特异作用于血管内皮细胞的高效促有丝分裂因子，在刺激新血管发生与生长及维持血管壁的完整性和通透性方面均有重要意义。VEGF 对于受精、着床、胎盘血管形成及胎儿生长发育起着重要的作用。表达异常则可能导致胎儿宫内氧供不良，对围生儿产生不良影响。具有行气活血作用的中药丹参，临床上被用于治疗 ICP 以改善围生儿预后。本文以 ICP 患者血清与正常
11、脐静脉内皮细胞共培养并用不同含量的丹参注射液进行干预，探讨VEGF 在妊娠肝内胆汁淤积症中的作用，以及丹参活血化瘀改善胎儿血供的可能机制。1 资料与方法1.1 研究对象 收集 2003 年 812 月在东南大学附属中大医院和南京市妇幼保健院妇产科住院的正常妊娠和 ICP 患者各 12 例，无菌抽取孕妇肘前静脉血。选取择期剖宫产的足月妊娠脐带 10 例。5纳入标准：正常妊娠组：整个孕期无合并症或并发症；ICP 组：ICP诊断标准遵照中华妇产科学 2 ，并排除合并妊高征，糖尿病、肾病、原发性高血压、贫血及其他内科合并症。孕龄诊断正确，否认有吸烟、激素治疗史。剖宫产指征：均未临产，系因骨盆、胎位、珍
12、贵儿及社会因素等而行择期剖宫产者。1.2 方法 参照 Jaffe 法行脐静脉内皮细胞原代培养，经倒置相差显微镜、Giemsa 染色和人第因子抗原鉴定为血管内皮细胞。以正常妊娠孕妇血清作为对照,当细胞融合 60%-80%时，加入不同浓度的 ICP 患者血清刺激 24h， MTT 法检测脐静脉内皮细胞的活力；不同含量的 ICP 患者血清分别刺激 12h、24h、36h ，按照ELISA 试剂盒操作步骤检测培养上清液中分泌型可溶性 VEGF 的变化。不同含量的丹参注射液进行干预，分别检测细胞活力和 VEGF蛋白的变化。1.3 试剂和仪器 RPMI Medium 1640 培养基：GIBCO BRL公
13、司产品；胎牛血清(100ml/瓶) ：杭州四季青生产；型胶原酶：HY biochemical corporation 公司产品；MTT 粉剂，购自SIGMA 公司；ELISA 试剂盒购自晶美生物工程北京有限公司。GBB16 型 CO2 培养箱，OLYMPUS CK2 型倒置显微镜，SPECTRA 6MAX250 型酶联免疫检测仪，96 孔培养板。1.4 统计学分析 数据均以 xs 表示，组间多个样本均数间比较采用方差分析，两两之间用 q 检验，两样本均数比较用成组 t检验。 （采用 SPSS 11.5 统计软件）2 结果 2.1 ICP 患者血清对脐静脉内皮细胞活力的影响 ICP 患者血清刺激
14、内皮细胞 24h 后，细胞吸光度（A ）值随着浓度的增加逐渐降低；并低于相应浓度的正常血清组（P0.05） 。具体数据如表1 所示。表 1 不同浓度的正常孕妇和 ICP 患者血清干预后 HUVECs的 A 值（略）2.2 ICP 患者血清对脐静脉内皮细胞分泌 VEGF 蛋白的影响 7不同浓度的 ICP 患者血清刺激不同的时间，HUVECs 分泌 VEGF 蛋白量具体数据见表 2。 ICP 患者血清各浓度组均低于相应浓度正常组，有统计学差异。随着血清含量的增加，VEGF 蛋白量降低，有统计学差异。此外随着 ICP 患者血清与 HUVECs 作用时间的延长，VEGF 蛋白的分泌量逐渐降低。表 2
15、不同浓度的 ICP 患者血清干预后 HUVECs 分泌 VEGF蛋白量（略）注：10%ICP 患者血清组， 24h、36h 和 12h 相比 P0.05；20%ICP 患者血清组，24h 、36h 和 12h 相比P0.052.3 丹参注射液对脐静脉内皮细胞活力的影响 在 20%ICP 患者血清干预的同时，分别加入不同含量丹参注射液共同培养 24h 后，相应组别的细胞吸光度（A）值见表 3。与 ICP 患者血清组相比，随着丹参含量的增加，其 A 值逐渐增加。表 3 不同浓度的丹参注射液干预后 HUVECs 的 A 值（略）8注：与 ICP 组比 1)P0.052.4 丹参注射液对脐静脉内皮细胞
16、分泌型 VEGF 蛋白的影响 20%ICP 患者血清和不同含量的丹参注射液共刺激 HUVECs 24h 后，ELISA 法检测培养上清液中 VEGF 蛋白量的变化，具体数据见表4。表 4 不同浓度的丹参注射液干预 24h 后 HUVECs 分泌的VEGF 量（略）注：与 ICP 组比 1)P0.053 讨论 妊娠肝内胆汁淤积症是一种妊娠特有的疾病，其对孕妇的损9伤相对较轻，妊娠终止后 12 天患者的瘙痒症状消失，胆汁酸、转氨酶等也迅速恢复正常。但其对围生儿的影响严重，围生儿的发病率和死亡率明显升高，如导致早产、胎儿宫内窘迫、死胎、死产等，成为高危妊娠极为棘手的疾病13 。ICP 胎儿宫内缺氧、围生儿预后不良的确切机制尚不明了。胎儿在母体内血、氧的供应来自于胎盘，胎盘血管的发育受到血管内皮生长因子等一系列生长因子的调节。研究发现4妊娠全过程中胎盘、胎儿均有较高的 VEGF 及其受体的表达，并具有时间和空间的特异性。Winther5
