蛛网膜细胞与血性脑脊液共同培养的研究

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1、摘要. 幼 5 s 9 s 论文题目: 蛛网膜细胞与血性脑脊液共同培养 专业: 研 究 生: 指导教师: 的研究 外科学 吴小康 信照亮 李宗芳 签名: 签名: 签名: 摘要 背景: 蛛网 膜下腔出 血( s u b a r a c h n o i d h e m o r r h a g e , S A H ) 是最常见的脑 血管意外之一，脑血管痉挛是其最严重的并发症，成为致死和致残的主 要 原因。 新 近研究 表明 ， 脑 血管 痉 挛 ( c e r e b r a l v a s o s p a s m , C V S ) 尤 其是 迟发性脑缺血 ( d e l a y e d c e

2、r e b r a l i s c h e m i a , D O) 的 发生可能与S A H后蛛 网 膜下腔内白 细胞 ( w h it e b l o o d c e l l , WB C )的 激活相关。 在这种病理状 态下， 蛛网膜细胞的 变化和其在S A H后D O的发生中所起的作用还未见 报道。 已 有一些研究表明， 培养的蛛网膜细胞能吞噬异物， 表达H L A - D R 抗原，具有免疫球蛋白G和补体等受体: 还可分泌许多重要的细胞因子 如成纤维细胞生长因子 ( f i b ro b l a s t g ro w th f a c t o r , F G F ) 和转移生长因子

3、- p ( g r o w th f a c t o r - b e t a s , T G F - (i ) 等. 因 此， 蛛网 膜细胞可能是一种功能 活 跃的细胞。 目 的: 研究蛛网膜细胞是否会发挥抗原提呈和激活WB C的功能， 从 而可能在S A H并发症的发生中起作用。 方法: 取蛛网 膜组织进行体外培养。 用免疫荧光染色法观察体外 培养蛛网 膜细胞C y t o k e r a t i n 8 第6 d 胞浆内出现强荧光颗粒，第8 d 荧光颗粒的数量和强度都达到最高. 流式细胞仪检测发现，第 I h - 5 d H L A - D R表达的阳性细胞一直保持在2 .5 % 左右的水

4、平，第6 d 为9 .2 % 第7 d 呈 爆发性增长， 达到6 1 .2 %e oT E M发现， 经血性脑脊液 刺激后， 蛛网 膜细胞的 溶酶体和次 级溶 酶体大量增加， 粗面内 质网 亦增多， 囊池扩大， 在细胞边缘可以 发现大 量吞饮小泡。 经血性脑脊液激活后的 蛛网 膜细胞与 P B M C共同 培养后， s I L - 2 r 的 含 量第1 - 3 d 没 有明 显 的 变 化， 始终 保持 在1 .3 0 n g / n il 左右的 水 平， 第 4 d 开 始 上升， 第7 d 达到高 峰， 上升 到7 .5 3 n g /m l ,随 后又 逐渐下降。 结论: 成功建立了

5、 蛛网膜细胞体外培养模型。 体外培养的正常 蛛网 膜细胞 可以 表 达C y t o k e r a t in 8 细胞培养; H L A - D R ; G F A P ; C y t o k e r a t i n 8 s I L - 2 r ; 免疫荧光 法; 流式细胞仪; 透射电 子显微镜; E L I S A 应用基础 人b s t r a c t Ti t l e : S t u d y o f C u l t u r i n g A r a c h n o i d C e l l s i n V i t r o w i t h He ma t i c CS F Ma j o r

6、: Na me : Tu t o r : S u r g i c a l Me d i c i n e Wu X i a o k a n g X i n Z h a o l i a n g L i Z o n g f a n g S i g n a t u r e S i g n a t u r e S i g n a t u r e Ab s t r a c t B a c k g r o u n d : S u b a r a c h n o i d h e m o r r h a g e ( S A H ) i s o n e o f t h e m o s t f a m i l i

7、a r c e re b r o v a s c u la r a c c i d e n t s . C e re b r a l v a s o s p a s m ( C V S ) i s t h e m o s t s e r i o u s c o m p li c a t i o n a n d t h e p r im a ry l e t h i f e r o u s a n d d i s a b l i n g c a u s e a ft e r S A H . A c c o r d in g t o r e c e n t re s e a r c h e s ,

8、 t h e a c t iv a t i o n o f w h i t e b l o o d c e ll ( WB C ) i n s u b a r a c h n o id s p a c e a ft e r S A H p r o b a b l y c o n t r ib u t e s t o t h e o c c u r re n c e o f C V S , e s p e c i a ll y d e l a y e d c e r e b r a l i s c h e m i a ( D C I ) . I n t h e p a th o l o g i

9、c s t a t e , a r a c h n o i d c e l l s t r a n s f o r m a t i o n a n d f u n c t i o n i n t h e o c c u r r e n c e o f D O o r C V S h a v e n o t b e e n r e p o r t e d - S o m e re s e a r c h e s h a v e s u g g e s te d th a t a r a c h n o id c e l l s i n v it r o h a v e t h e a b i l

10、 i t y o f p h a g o c y t o s i n g f o re i g n s u b s t e n c e a n d e x p r e s s i n g H L A - D R a n d h a v e i m m u n o g l o b u l i n G a n d c o m p l e m e n t r e c e p t o r s . T h e s e c e ll s a l s o c a n s e c r e t e m a n y c y t o k i n e s , s u c h a s f i b r o b l a s

11、 t g r o w th f a c t o r 任 G F ) a n d t r a n s f o r m i n g g r o w th f a c t o r - b e t a s ( T G F - 13 ) ， S o t h e y s h o u l d b e c o n s i d e r e d a s t h e c e l l s w it h m a n y a c t i v e f u n c t i o n s . O b j e c t iv e : T o a s s e s s t h e a b i l i t y o f a r a c h

12、n o i d c e ll s t o p re s e n t a n t i g e n a n d a c t i v a t e WB C , s o a s t o r e v e a l t h e f u n c t i o n o f a r a c h n o i d c e l l s i n t h e c o m p l i c a t i o n a ft e r S A H . Me t h o d s : C e r e b r a l a r a c h n o i d o b t a i n e d fr o m p a t i e n t s u n d

13、e r g o i n g c e re b r a l s u r g e ry w a s g r o w n i n v i t r o . T h e a r a c h n o i d c e l l s w e r e c h a r a c t e r i z e d a n d e x a m in e d b y i m m u n o fl u o r e s c e n c e f o r t h e e x p r e s s io n o f C y t o k e r a t i n 8 C e l l c u l t u r e ; H L A - D R ; C

14、 y t o k e r a t i n 8 I L - 2 r ; G F A P ; I m m u n o fl u o r e s c e n c e ; F A C S ; E L I S A ; T r a n s m i s s i o n e l e c t r o n m i c r o s c o p e A p p l i e d r e s e a r c h 英文缩略词表 英文缩略词表 英文缩写 AB C A P C ARC BMP C NS CVS DC DO 全称 a r a c h n o i d b a r r i e r c e l l a n t i g

15、e n - p r e s e n t i n g c e l l a r a c h n o i d r e t i c u l a r c e l l b o n e m o r p h o l o g i c p r o t e i n c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m c e re b r a l v a s o s p a s m d e n d r i t i c c e l l d e l a y e d c e re b r a l i s c h e m i a e n d o t h e l i u m - d e p e n

16、d e n t r e s p o n s i v e n e s s f a c t o r e n z y m e l i n k er i m m u n o s o r b e n t a s s a y E n d o t h e l i n fl u o re s c e n c e - a s s i s t e d c e ll s o r t i n g fl o w c y t o m e t ry f o l l i c u l a r d e n d r i t i c c e l l f ib r o b l a s t g r o w e r f a c t o r g l i a l f i b r i l l a ry a c i d i c p ro t e i n h u m a n l e u c o c y t e a n t i g e n i n t r a c r a n i a l a r a c h n o i d c y e s t s i n t e r d i g it a t i n g c e l