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1、淋病实验 室诊断 河北省疾病预防控制中心性病中心实验室 主要内容 淋球菌及致病性 淋病实验室诊断 淋病实验室诊断策略 小结 一、病原菌与致病性 奈瑟氏淋球菌是淋病的病原菌，主要引 起泌尿生殖系统化脓性炎症。淋病的潜 伏期平均3-5天,淋球菌主要侵犯上皮细 胞,尤其是柱状上皮细胞。 男性：引起尿道炎，可合并前列腺炎、精囊炎、 附 睾炎。 女性：引起宫颈炎、尿道炎，可合并子宫内膜炎、 输卵管炎或输卵管卵巢脓肿、盆腔炎、肝周炎、 前庭大腺炎等。 男女：都可引起淋菌性肛门直肠炎、淋菌性咽炎、 淋菌性结膜炎，都可合并播散性淋球菌感染。有 5%-20%的男性和60%的女性病人呈无症状经过。 一. 病原菌（
2、萘瑟氏淋球菌） 1.形态 (1).形态呈肾形或蚕豆形，常成对排列，邻 近面扁平或略凹陷。无芽孢、无鞭毛。 (2).大小为0.6-0.8m。 (3).革兰氏染色阴性，呈粉红色。美蓝染色 呈蓝色。 急性炎症期病人，细菌多在患者分泌物的白 细胞胞浆中。慢性炎症期病人，细菌多在白细胞 外。 2、生物学特性 (1).淋球菌适宜在潮湿、温度为35- 36、含5-7%二氧化碳的条件下生长。生 长最适PH为7.2。 (2).淋球菌对外界理化因素抵抗力均差 ，在完全干燥环境中只存活1-2小时，室温 存活1-2天，50时存活5分钟。附着于衣 裤能存活18-24小时。 (3).淋球菌为需氧菌，对培养的要求较高 ，普
3、通培养基不易生长， 在含有动物蛋白 的培养基上生长良好。 (4).能分解葡萄糖、产酸不产气。 (5).生长过程中产生氧化酶。还产生自溶 酶。 淋病的传播途径有以下二种： 1)直接性接触感染：成人淋病几乎全部通 过性接触感染。 2)间接接触感染：新生儿可通过母亲 产道分泌物间接感染。 二、淋病的实验室诊断方法 分泌物涂片镜检； 分离培养淋球菌； 检测淋球菌核酸：PCR 1、标本的采集 取材部位依据 年龄 性别 性接触方式 临床表现 取材拭子种类 藻酸钙拭子 普通棉拭子 涤纶拭子 标本的采集-取材部位(1) 男性 异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本； 同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标
4、本. 女性 采集宫颈标 本，必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺 和尿道旁腺取材. 标本的采集-取材部位(2) 幼女 幼女和/或处女膜未破的感染者标本：采集阴道分泌物 新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物 标本的运送 淋球菌的抵抗力弱，对热敏感，不耐干燥。 取材后标本若不能立即接种于选择培养基上， 需采用运送系统。置于非营养性运送培养基中 的标本应在12小时内送到实验室，接种于选择 培养基，分离阳性率可达90%以上。超过12小时 则分离阳性率下降。 2、显微镜检查 1.染色涂片的制备： 涂片方法 在干净玻片上预加一小滴生理盐水。 * 用白金耳蘸取样时，应将白金耳半悬状态使分 泌物洗脱于盐水； * 用
5、棉拭子取样时，应将棉拭子在盐水处轻轻“ 滚动”，而不是涂抹。 * 自然干燥后, 涂漠面朝上快速通过火焰三次固 定。 显微镜检查 注意事项： * 涂片手法要轻，避免细胞破裂。薄厚得当，以 基本无细胞重叠为宜； * 火焰固定以涂片在腕背皮肤接触时仅感微热为 宜； * 避免用加热法使湿片干燥，避免固定时过度加 热,以免扭曲细胞形态。 显微镜检查 染色方法: 革兰染液 美兰染液 姬姆萨染液 荧光抗体 革兰染色为一传统 方法，因简便、快捷及价廉、仍然 为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类，即染成 紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。 直接显微镜检查 革兰染色: 涂片：将拭子在载玻片上轻轻滚动涂
6、片。 固定：待涂片在室温中空气自然干燥， 涂片经火焰固定 革兰染色： 第一液（结晶紫）染3060秒，流水冲洗数秒； 第二液（碘液）染60秒，水洗； 第三液（95%乙醇）脱色3060秒，水洗； 第四液（复红）复染30秒，水洗。 革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌 直接显微镜检查 的临床意义 男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 宫颈标 本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊 断直肠和咽部，以及女性宫颈 淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞 外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。 3、淋球菌培
7、养鉴定 培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病、直肠、咽部的确诊应做淋球菌培养 培养的敏感性81100%。 培养的优点有： 特异性极高（100%）； 可发现无症状淋球菌感染患者； 可用于进一步作药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。 3、淋球菌培养鉴定 1、培养基 淋球菌对营养要求较复杂,培养基中应含有动物蛋 白及细菌生长所需的各种因子。目前常用的选择培 养基有Thayer-Martin(T-M)培养基、血液琼脂或巧 克力琼脂培养基。为抑制杂菌，在培养基中可加入 少量抗菌物质如多粘菌素(25g/ml)和万古霉素 (3.3g/ml)等。 目前淋球菌的成品培养基均有商品出售。 淋球菌培养 接种标本
8、取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置 于室温或孵箱中预温。将取材的拭子转动涂布于平 皿的上1/4范围，然后用接种环分区划线，以保证 获得较纯的单个菌落。 接种标本-四区划分接种 接种标本-四区划分接种 淋球菌培养 培养条件 ： 35 36，含5%10% CO2，湿 润（70%湿度）的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。 使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。 在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。 培养时间：2448小时 淋球菌培养-培养条件 淋球菌培养-观察结果 培养24小时后检查 平皿，此时没有菌生长的 平皿应继续 培养至48小时，仍无菌生长才可 丢弃
9、，作出淋球菌培养阴性的报告。 对选择 性培养基上分离的直径在0.51mm， 无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。 淋球菌培养-观察结果 培养 24 小时后的淋球菌菌落 淋球菌培养-观察结果 淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定 初步鉴定淋球菌的主要依据 菌落特征 氧化酶试验 革兰染色 淋球菌氧化酶阳性 淋球菌培养-淋球菌的确证试验 来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株，一 般可诊断为淋球菌，准确性达98%。 对于菌落形态不典型的分离株，来自咽部、眼睛、 或其他泌尿生殖道外部位的分离株，来自低危人 群（如儿童）的分离株，以及涉及医疗法律案例 的分离株，应作确证试验 。 淋球菌培养-淋球菌的确证试验
10、 糖发酵试验 DNA检测 全自动细菌检定仪 糖发酵试验 糖发酵试验检测 奈瑟球菌分解特定糖类(葡 萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖)产酸的能力。 根据淋球菌仅分解葡萄糖，脑膜炎球菌分解 葡萄糖和麦芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、 麦芽糖、蔗糖或不分解这些糖类，可将淋球 菌与可能在淋球菌选择 性培养基上分离出的 其他奈瑟球菌加以鉴别 。 细菌葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖 淋球菌+- 脑膜炎球菌+- 乳酰胺奈瑟菌+- 灰色奈瑟球菌- 布兰汉 卡他球菌 - 糖发酵试验 -奈瑟球菌属的糖发酵特征 菌落形态淋球菌样 革兰染色革兰阴性双球菌 氧化酶试验阳性 快速糖发酵试验G+L-M-S- 淋球菌的鉴定特征 淋球菌种保存 脱脂牛奶 -25 2个月 -70 1年 液氮 长期 冻干 长期 革兰氏阴性 细胞内双球菌 男性确诊 女性（其它样本） 未见革兰氏阴性 细胞内双球菌 分泌物培养 初步诊断：菌落形态、阴性双球菌 氧化酶阳性， 确证诊 断：糖发酵 三、淋病实验室诊断策略 分泌物 分泌物涂片 革兰氏染色 淋球菌培养小结 适合所有临床标本淋球菌的检测 推荐用于对女性病人的诊断 推荐用于判愈试验 敏感性和特异性高 可获得活菌用于药敏试验 缺点：耗时长，需一定的实验室条 件，标本中 要求为活菌
