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1、持久性有机污染物论坛2 0 0 8 暨第三届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 全氟辛烷磺酸( P F O S ) 对C 5 7 B L 6 小鼠脾脏T 细胞亚群 C D 4 + C D 8 + 的影响 董光辉P ，郑丽2 ，金和3 ，何钦成1 ( 1 中国医科大学公共卫生学院，沈阳，l l O O O l ；2 中国医科大学基础医学院免疫教研室，沈阳，1 1 0 0 0 l ； 3 大连理工大学环境与生命学院工业生态与环境工程教育部重点实验室，大连，1 1 6 0 2 4 ；掌联系人， B m a i l ：曲d o n g m a i l c 1 1 1 u e d u ) 1 引言 全
2、氟辛烷磺酸( P e r f l u o r o o c t 柚es u l 矗) n a t e ，P F O s ) 是近年来引起科学家们关注的一种新型持久 性有机化合物，该有机物被广泛用于机械润滑剂、涂料、农药和医药品、表面活性剂、纺织品和皮 革制品表面防污剂、泡沫灭火剂等数百种工业和日用品生产领域。由于其在自然界中的难降解性和 生物体内的高蓄积性，P F o S 已经在牛态系统中得刽广泛的传播，并且正在通过食物链途径的生物 浓缩和生物放大，进行生物种群问的转移，最终高浓度地蓄积在食物链高位生物包括食肉动物和人 体内。 人群流行病学调查显示，P F O S 可降低新生儿体重，并使职业人群
3、患膀胱癌和前列腺癌的危险性 增高。大量的毒理学研究表明，P F O S 可对机体的神经系统、生殖系统和内分泌系统产生损伤，并 具有胚胎发育毒性和遗传毒性。但目前对于P F 0 s 材料引起的免疫毒性研究资料还很少。本研究从 P F O s 对小鼠脾脏T 淋巴细胞亚群的影响方面，探讨P F o S 对免疫系统效应，进而为P F o s 的安全 性评价提供科学依据。 2 材料与方法 2 1 实验动物及染毒 雄性C 5 7 B L 佑小鼠2 4 只，体重1 8 2 0 9 ，由中国医学科学院实验动物研究所提供( 许可证编号： s c X K 京2 0 0 4 - 0 0 0 1 ) 。实验室内适应性
4、喂养7 天后按体重随机分为4 组，每组6 只。动物室温度 1 8 2 3 ，相对湿度4 5 一5 5 。实验组P F O S 染毒剂量分别为5 、l O 、2 0 m g k g 1 ( b w ) ，对照组给予 2 T w e e n - 8 0 。连续灌胃染毒1 2 天后。 2 2 脾细胞采集 染毒后第1 3 天，颈椎脱位处死小鼠，7 5 酒精浸泡，取出各组小鼠胸腺、肾脏、肝脏、脾脏， 称量重量。常规制备脾细胞悬液，用l O m l 含2 热灭活F C S 的P B s 培养液制成细胞悬液，3 5 0 9 离心 l O 叫n 。经O 1 7 m o l - L 1N H 4 C l 裂解红
5、细胞5 m i n ，3 5 0 9 离心，弃上清、P B S 洗涤两遍，以台盼蓝染色 检查脾细胞活性，确定活细胞数超过9 0 。用含2 热灭活F C S 的P B s 将脾细胞终浓度调至 l 1 0 7 m L 。 2 3 染色 取0 1 m l 脾细胞悬液，加入锄t i C D 3 - 兀1 ( 5 5 3 0 6 1 ) ，a n t i - C D l 4 P E ( 5 5 7 3 0 8 ) ，锄t i C D 8 P E R C P ( 5 5 3 0 3 6 ) 0 2 u g 4 0 C 避光孵浴3 0 m i I l 。加2 m lP B S ，混匀，离心5 分钟( 2 0
6、 0 0 r p m m i n 叫) ，弃上清。将 剩余液体转入流式管。上机检测。 2 4 流式细胞仪分析 利用流式细胞仪( F A C S C a l i b 呲，美国B & D 公司) ，激发波长为4 8 8 n m ，利用F A C SC E L L Q U E S T 软件获取细胞，每个样品分析1 0 ，O o o 个细胞，使用前向散射角( F S C ) 及侧向散射角( S S C ) 确定 淋巴细胞群，以阴性对照为参考，将对照管所示的非特异荧光的9 9 以上作为本底扣除，以二维点 或直方图阵图显示，记录C D 4 + T 细胞、C D 8 + T 细胞的百分比。 持久性有机污染物
7、论坛2 0 0 8 暨第三届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 3 结果与讨论 3 1P F o S 染毒对雄性C 5 7 B L 炻小鼠体重和器官指数的影响 P F O S 染毒前各组小鼠体重均衡( F = 0 6 3 ，p = o 7 0 ) 。1 2 经口染毒后，各剂量组小鼠体重均显著的 低于对照组，其中P F o S l 0m g k 百1 和2 0 m g k g 1 剂量组小鼠体重早明显的下降趋势。随着染毒剂量的 增高，脾脏和胸腺指数呈下降趋势，而肝脏指数呈增高趋势( 表1 ) 。 表1 雄性C 5 7 B L ，6 小鼠暴露P F O S 不同剂量下体重和器官指数水平 注：器官
8、指数= 【器官重量( g ) 体重( g ) 】x l o o 。与对照组比较：p 5 0 5 3 2P F o s 染毒对雄性C 5 7 B L ，6 小鼠脾细胞总数和T 淋巴细胞亚群的影响 P F O S 经口灌肖染毒1 2 天后，随着染毒剂量的增高，脾细胞总数呈- 卜降趋势，其中2 0 m g k 百1 d 1 剂量组小鼠脾细胞总数【( 4 8 0 士1 0 6 ) 1 0 7 】显著的低于对照组小鼠水平【( 8 4 5 士1 2 3 ) 1 0 7 】。P F O S2 0 m g k 百1 d 1 剂量组小鼠C D 4 + T 淋巴细胞绝对数和阳性比均显著的低于对照组，P F O S
9、l Om g k 9 1 d 1 和2 0m g k 百。d 1 剂量组小鼠C D 8 + T 淋巴细胞绝对数和阳性比均显著的低于对照组( 表2 ) 。 表2 雄性C 5 7 B 啪小鼠经u 灌胃染毒1 2 天后对脾C D 4 + 、C D 8 十细胞亚群的影响 注：各细胞亚群的绝对数= 门内阳性细胞的百分比脾细胞总数；与对照组比较：J 口S 0 5 4 结论 免疫系统是生物异源物质毒性效应的主要靶系统之一。许多异生物如多环芳烃、有机磷及重金 属等对生物体的免疫调节过程及机理已经进行了大量的深入研究。作为一种新型的环境有机污染 物，关于P F O S 的免疫毒性效应研究报道较少。本研究结果显示
10、，P F O S 可使小鼠的体重、脾脏指 数和胸腺指数降低，且随着P F O S 染毒剂量的增高，小鼠脾细胞数量及T 淋巴细胞亚群C D 4 + 和 C D 8 + 阳性数和阳性比呈下降趋势，表明P F O S 可能对机体可产生免疫抑制效应。 T 淋巴细胞亚群数量和比率的动态平衡是一个复杂的过程，其调节机制并不十分清楚，而C D 4 和C D 8 淋巴细胞的失调是许多疾病的主要表现特征。Y 锄g 等学者发现与P F O S 理化性质相似的全氟 辛酸( P e r f l u o r o o c t a n o i c 孔i 也P F O A ) 以2 0m g k g d 1 剂量连续染毒7
11、天后，可以导致脾脏和胸腺中 C D 4 + 和C D 8 + T 淋巴细胞的绝对数量和百分比显著的下降。全氟化杀虫剂氟虫胺在生物体内的主要 代谢产物之一为P F o S ，当对雌性小鼠以3 0m g k g 一d - l 剂量的氟虫胺经口灌胃连续染毒1 4 天后， C D 4 + 琳巴细胞下降3 8 。最近的研究结果显示，当雌性小鼠在孕期暴露于P F O S 时，可使子代小 鼠N K 细胞的杀伤功能和I g M 的分泌水平显著下降。以上这些研究主要是对P F O S 免疫毒性效应的初 步评价，而关于P F O S 毒性效应的机理还有待于进一步研究。 致谢：本工作受国家自然科学基金( N o 2 0 7 0 7 0 4 1 ) 资助。 1 8 6
