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1、 水产微生物学实验教学大纲 一、课程的性质与任务 水产微生物免疫学实验是水产微生物免疫学课程的重要组成部分，它是在讲授课程理论部分的同时进行的实践性教学。主要任务是使学生得到微生物学实验技木的基本操作和基本技能的训练，熟悉水产动物常见病原微生物检验的基本步骤和方法，进一步加深对理论课讲授内容的理解，培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力，养成勤俭节约、实事求是、勇于创新的良好作风，为后续课程学习和今后胜任相关专业工作奠定厚实的微生物学基础。二、教学目的与基本要求 （一）教学目的 1.熟悉微生物实验各类器材的准备工作，建立牢固的无菌概念，掌握一般实验的消毒、灭菌和无菌操作的技术。 2.掌握
2、培养基制备、各类标本片制备及其常用染色的方法。 3.能进行微生物的分离、接种、培养和镜检的方法。 4.熟悉细菌生理生化性状的一般检测方法。 5.能对水产动物常见病原微生物进行基本分类鉴定。 （二）基本要求 1.能熟练掌握教师示范的各种规范性操作技术。 2.能按实验指导书提供的方法进行验证性实验。 3.根据教师提供的或自我发现的某些微生物现象等能进行简单的实验设计或技术创新。三、实验考核方式及方法 一般每次实验都应对学生进行下述考核：（1）实验态度是否端正；（2）操作是否规范；（3）实验方法是否正确；（4）实验报告是否符合要求。最后根据各次考核成绩获得的平均成绩作为实验成绩，最后以30%比例计入
3、课程总成绩。如实验平均成绩达不到60分（及格）者应单独组织进行实验综合考核，仍不及格者，不得参加理论课考试，整个课程应重修。四、实验项目一览表 水产微生物实验项目一览表序号 实验项目名称 实验类型 实验要求 适应专业 学时1 油镜使用及细菌形态观察 验证 必做 水产养殖 42 微生物实验常用器材的准备 验证 必做 水产养殖 33 培养基制备 验证 必做 水产养殖 44 微生物的接种、分离和纯化 验证 必做 水产养殖 34 细菌涂片的制备和常用染色法 验证 必做 水产养殖 45 真菌的形态观察 验证 必做 水产养殖 47 细菌生理生化部分特性检查 验证 选做 水产养殖 48 理化因素对微生物的影
4、响 综合 选做 水产养殖 49 水产动物常见病原菌检查 综合 必做 水产养殖 410 水产动物常见病原病毒检查 设计 必做 水产养殖 4五、实验项目的具体内容 实验一 显微镜油镜使用及细菌形态构造观察 （一）目的要求 1.正确掌握油镜使用和护理的方法。 2.认识细菌的基本形态和某些特殊构造。 （二）实验内容或原理1.了解油镜的原理和使用方法。 2.观察细菌的基本形态、芽胞、荚膜、鞭毛。 （三）需用的仪器或试剂等 1.仪器及配套试剂、材料：显微镜、擦镜纸（剪成小片置培养皿中）、吸水滤纸本、二甲苯、香柏油。 2.细菌标本片：革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、含细菌的芽胞、鞭毛及荚膜的标本片，均用标本盒装
5、。 （四）实验步骤 1.安置显微镜、调节光源。 2.认识油镜并转到中央。 3.装标本片、滴香油、升聚光器。 4.调节观察观察物象、描绘图象。 5.镜头去油、显微镜各部位还原。 （五）教学手段 1.运用挂图解释油镜原理。 2.教师先演示操作，然后下位检查、指导学生操作。 （六）考核要求 1.检查学生识别油镜、使用油镜的方法是否正确。 2.检查用油镜观察各种细菌教学标本后绘图和描述的内容是否正确。 （七）实验报告要求 有观察对象的绘图和文字描述，实验结束后交实验报告，每个学生的实验报告应订成册，不收单页报告。 实验二 微生物实验常用玻璃器皿的洗涤、包装和消毒灭菌（一）目的要求 1.掌握微生物实验常
6、用玻璃器皿的洗涤、包装方法。 2.学会棉塞制备，移液管包装方法。（二）实验内容或原理1.新旧载玻片、平皿、试管、移液管的清洗。 2.棉塞制备。 3.各种玻璃器皿的包装。 4.干烤灭菌和高压蒸气灭菌方法（三）需用的仪器或试剂等 1.仪器类：高压蒸气灭菌器、干燥箱、超净工作台等。 2.器皿类：平皿、试管、吸管、三角瓶、烧杯、载玻片等。 3.杂物：报纸、牛皮纸、包扎绳、蜡笔等。（四）实验步骤1.器皿洗涤。2.器皿干燥、干燥器皿包装、灭菌。（五）教学手段板书教学内容及方法，运用移液管包装等挂图。先进行包装方法演示，讲授，然后分组试验。（六）考核要求1.检查学生洗涤、包装玻璃器皿的方法和效果。2.检查学
7、生棉塞制备和移液管包装的质量。3.检查学生实验态度。（七）实验报告要求主要记录实验工作内容、结果与体会。 实验三 培养基制备（一）目的要求 1.掌握细菌、真菌、放线菌常用培养基的配制步骤和方法。 2.熟悉平板、斜面培养基的制备方法。 3. .掌握高压蒸气灭菌法。(二）实验内容或原理 1.普通肉汤、普通营养琼脂、鱼肉营养培养基和察氏培养基的制备。 2.高压蒸汽灭菌。（三）需用的仪器或试剂等 1.器材：高压灭菌锅、粗天平、分析天平、电炉、酸度计、超净台或无菌室等。 2.药品类：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠（溶液）、鱼肉、NaNO3、KCl、Mg SO4、FeSO4、蔗糖、琼脂、麦芽糖、蒸馏水等
8、。 3.器皿类：滤斗、烧杯、铝锅、三角瓶、量简、试管、玻棒、平皿等。 4.杂物类：牛皮纸、蜡笔、包装绳、菜刀、精密pH试低等。（四）实验步骤 1.准备溶器。2.称量药物。3.溶解药物。4.分装培养基、写标签。5.高压灭菌。6.培养基倾注平板、摆斜面。（五）教学手段 运用挂图。（六）考核要求 1.考核培养基制备质量。 2.检查实验态度。（七）实验报告要求 主要记录实验工作内容、结果与体会。 实验四 微生物的接种、分离和纯化（一）目的要求 掌握微生物分离和纯化的原理及各种接种方法，建立牢固的无菌操作概念。(二）实验内容或原理1.平板划线接种。2.斜面接种、液体接种、穿刺接种。3.培养方法。（三）需
9、用的仪器或试剂等 1.培养基：平板、斜面、液体、半固体培养基。 2.菌种或含菌材料：革兰氏阳性菌（葡萄球菌或炭疽杆菌等）、革兰氏阴性菌（大肠杆菌或气单胞菌）或鱼肠内容物等。 3.接种用器材：接种环、接种针、酒精灯、火柴、蜡笔（记号笔）等。 4.培养箱。（四）实验步骤 1.了解接种环结构及灭菌方法。 1.从鱼肠取样在平板上划线接种。2.从纯菌种取样行斜面接种、液体接种、穿刺接种。3.将已接种培养基置恒温箱培养。（五）教学手段 1.运用接种方法示意图。 2.讲授、演教、指导操作。（六）考核要求 1.观察学生的各项操作是否规范。 2.考核实习态度。 3.对照学号或姓名逐个检查培养结果并区分等级。（七
10、）实验报告要求 记录实验内容、结果，对结果进行技术分析。 实验五 细菌涂片的制备和常用染色法（一）目的要求 1.掌握不同含菌材料的涂片技术。 2.掌握革兰氏染色法和美兰或瑞特氏染色法。(二）实验内容或原理1.病鱼或其他水产动物组织材料涂片。 2.肉汤培养物和固体培养物的涂片。 3.革兰氏染色。 4.美兰或瑞特氏染色。（三）需用的仪器或试剂等 1.菌种：前次实验的各种培养物，鱼或其它水产动物（最好均含菌）。 2.试剂：革兰氏染液、美兰染液、瑞氏染液、甲醇、无菌水、蒸馏水（下嘴瓶装并带乳胶管止水夹）等。 3.显微镜、擦镜纸（剪成小片置培养皿中）、吸水滤纸本、二甲苯、香柏油、酒精灯、接种环、干净载玻
11、片（有酒精小广口瓶装）、小纱布块、火柴等。（四）实验步骤 先示教，再学生做各种材料（固体、液体、非液体）涂片，干燥、固定，镜检，写试验报告。（五）教学手段 1.运用接种教学挂图。 2.示范操作。 3.独立操作。（六）考核要求 检查操作态度和技术掌握程度，观察各种涂片镜检结果和实验报告水平。（七）实验报告要求 记录实验内容、操作要领，描绘细菌图形并配有说明文字。 实验六 酵母菌、霉菌的形态观察（一）目的要求 1.熟悉酵母菌和霉菌的菌落和形态特征。 2.掌握观察酵母菌和霉菌形态一般检查方法。(二）实验内容或原理 1.观察酵母菌和霉菌的菌落特征。 2.制作观察酵母菌和霉菌的各种标本片。 3.观察酵母
12、菌和霉菌的形态结构。（三）需用的仪器或试剂等 1.菌种：青霉或毛霉平板培养物，酵母菌斜面培养物。 2.试剂：0.1%美兰液、石碳酸乳酸棉兰液。 3.载玻片、盖玻片、接种环、解剖针、酒精灯等。 4.显微镜、显微镜灯。（四）实验步骤 1.观察和描述酵母菌和霉菌的菌落性状。2.制备酵母菌的美兰水浸片、镜检酵母形态和区分死、活细胞。 3.制备霉菌的石碳酸乳酸棉兰液水浸片，观察霉菌的细胞形态、菌丝分支、分隔、繁殖菌丝结构和孢子形态。（五）教学手段 运用真菌形态挂图。（六）考核要求 检查操作是否正确、涂片是否达到要求，实验报告是否准确。（七）实验报告要求 记录实验内容、操作要领，描绘真菌图形并配有说明文字。 实验七 细菌生化特性检查 （一）目的要求 1.了解细菌鉴定中常用生化反应及其原理。 2.掌握常用生化特性检查方法。(二）实验内容或原理 1.生化反应培养基制备。 2.细菌生化特性检查，如糖发酵、氧化酶、过氧化氢酶、M.R、V.P、柠檬酸盐、硝酸盐还原、硫化氢产生等试验。（三）需用的仪器或试剂等 1.药品：葡萄糖、麦芽糖等糖类（5种左右）、蛋白胨、溴甲酚紫或溴麝香草酚蓝、氯化钠、柠檬酸盐、NH4H2PO4、K2HPO4、MgSO4、KNO3、柠檬酸铁铵、琼脂、95%酒精、过氧化氢、盐酸四甲基对苯二胺
