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1、河南科技大学 硕士学位论文 Ang-2、VEGF在急性白血病中的表达及意义 姓名：王萍 申请学位级别：硕士 专业：肿瘤学 指导教师：阮林海 20100501 摘 要 I 论文题目： 论文题目： 血管生成素-2、血管内皮生长因子在急性白血病中的表 达及意义 专 业： 专 业： 肿瘤学 研 究 生： 研 究 生： 王 萍 指导教师： 指导教师： 阮林海 教授 摘 要 摘 要 目的：目的：本研究通过检测急性白血病(AL)不同时期血清中血管生成素-2(Ang-2)、 血管内皮生长因子(VEGF)的含量，探讨Ang-2、VEGF与AL时期有无相关性，初 发未治AL患者血清中Ang-2、VEGF分别与外周
2、血白细胞计数(WBC)、骨髓原始 细胞、乳酸脱氢酶(LDH)、-2微球蛋白(BMG)、-L岩藻糖苷酶(AFU)的关系， 以及Ang-2、VEGF二者之间的关系，进而探讨血清Ang-2、VEGF与AL发生、发 展的关系，为AL的抗血管新生治疗提供理论依据。 方法：方法：应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定62例AL患者，包括24例AL初发未 治，18例完全缓解(CR)，7例未缓解(NR)，13例复发患者血清中Ang-2、VEGF的 含量，并与20例正常对照组比较。 结果：结果：1. 通过测定各时期 AL 血清中 Ang-2 的水平，发现 Ang-2 在初发未治 组、CR 组、NR 组、复发组、
3、正常对照组分别为 21.704.96 ng/ml、7.932.86 ng/ml 、21.044.48 ng/ml、22.744.07 ng/ml、6.132.16 ng/ml，通过 t 检验得 出，AL 患者初发未治组血清 Ang-2 含量明显高于正常对照组，差异有统计学意 义(P0.05)；NR 组、复发组血清 Ang-2 含量明显高于正常 对照组和 CR 组，差异均有统计学意义(P 0. 05 乳酸脱氢酶（U/L） 570.5(112-3672) 0.45 0. 05)，而与 LDH、BMG呈正相关（r分别为0.54、0.46，P值分别 0. 05 乳酸脱氢酶（U/L） 570.5(112
4、-3672) 0.54 0. 01 -2 微球蛋白(mg/L) 2.1（1.22-3.56） 0.46 0. 05 4.3 急性白血病初发未治疗患者血清急性白血病初发未治疗患者血清 Ang-2 与与 VEGF 相关性相关性 AL 初发未治疗患者血清Ang-2与 VEGF 相关性分析 采用直线相关分析 显示，AL 初发未治组患者血清Ang-2与 VEGF 表达呈正相关性(r = 0.50 , P 0.05)。 第 5 章 讨论 21 第5章 讨论 第5章 讨论 血管内皮生长因子和血管生成素是两个最重要调节血管新生的因子，前者是 最有力的血管生长因子，通过结合血管内皮细胞上的特异性受体，如受体 F
5、lt- 1，KDR/Flk-1 和 Flt4，促进内皮细胞增殖并增加血管通透性 60 。动物模型和 体外试验表明，Ang- 2 与 VEGF 构成血管稳定和血管内皮细胞重塑的调节系 统，通过维持两者的平衡，血管成熟与新生的复杂网络才能建立61 。 5.1 Ang-2 与急性白血病关系与急性白血病关系 Ang-2 是一种分泌性蛋白，主要由血管内皮细胞分泌产生，可能通过打破血 管的稳定信号，启动早期血管形成信号来促进血管生成。Hsin-An 62等研究发现 Ang-2 在急性白血病骨髓单个核细胞表面高表达。Schliemann 63研究发现初治的 AML 患者高血清高表达 Ang-2，生存期短预后
6、差，证实是急性髓系白血病独立 的预后因素。本研究通过 ELISA 法检测 62 例急性白血病患者血清 Ang-2 含量， 结果初发未治疗急性白血病患者血清 Ang-2 明显高于正常对照组，表明，白血 病的发生过程中为了获取充足的营养物质，可能会通过多种途径，如激活某些信 号转导系统，使 Ang-2 表达增高，从而建立更多的血管通路64。急性白血病完 全缓解后患者血清 Ang-2 水平下降，考虑化疗药物可能部分抑制了机体分泌 Ang-2 有关，化疗无效及复发患者血清 Ang-2 明显高于完全缓解患者65。这些说 明 Ang-2 参与了急性白血病的骨髓新生血管形成，提示 Ang-2 可能参与了急性
7、 白血病的发生、发展、转归。Ang-2 促进白血病血管新生的机制可能是，主要通 过竞争性抑制 Ang-1 与 Tie-2 结合，从而抑制管壁周围细胞聚集，使血管壁的可 塑性增加，并在 VEGF 的共同作用下，通过促进血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)等炎性因子的产生及下调细胞黏附分子血小板-内皮细胞 黏附分子 1(PECAM-1)和活性表皮黏附分子(VE-Adherin)的表达，从而形成不稳 定渗漏性血管66。 5.2 VEGF 与急性白血病关系与急性白血病关系 VEGF 在众多的血管新生正性调控因子中是作用最强和特异性最高的因子。 近年来国内外对
8、VEGF 与急性白血病关系的研究较多，VEGF 在急性白血病中高 表达且与骨髓新生血管存在密切关系67。VEGF 能通过旁分泌和自分泌两条途径 促使白血病细胞增殖造血组织血管新生：1.VEGF 能与血管内皮细胞的受体结 合，强烈促进内皮细胞活化、增殖和血管形成，增加血管通透性，为白血病细胞 河南科技大学硕士学位论文 22 的浸润、转移提供必要条件。2.白血病细胞自身分泌 VEGF，并表达 VEGFR(Flt- 1 或 KDR)，二者结合，支持自身生长、促进造血组织新血管生成。本研究通过 ELISA 法检测 62 例急性白血病患者血清 VEGF 含量，结果初发未治疗急性白血 病患者血清 VEGF
9、 明显高于正常对照组，考虑是由于白血病细胞的大量增殖、 代谢导致局部相对缺氧，诱导 VEGF 表达上调所致。增高的 VEGF 主要由白血 病细胞分泌，并通过促进造血组织血管生成等机制参与白血病的发病。急性白血 病完全缓解后患者血清 VEGF 水平下降，提示对于化疗有效的患者，化疗药物 除细胞毒作用外，还通过杀伤白血病细胞，减少促血管形成的细胞因子分泌，降 低了肿瘤介导的新生血管形成，间接具有抗血管新生的作用。而未缓解患者与复 发患者仍高于正常对照组，较初发未治患者无明显差别，提示 VEGF 可能参与 了白血病发生、发展与转归过程的调节，是影响预后的一个重要因素，因此通过 对 VEGF 的测定，
10、可间接的评价急性白血病的疗效、判断预后。 5.3 Ang-2、VEGF 与与 AL 相关因素相关因素 血清Ang-2、VEGF与血清LDH、BMG相关，与外周血白WBC计数、骨髓原 始细胞、AFU无明显相关性。原因可能为，Ang-2、VEGF除了由骨髓原始细胞 及血管内皮细胞分泌外，还由单核细胞、巨噬细胞等分泌有关。而AFU，是一种 催化含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子水解酶的溶酶体酸性水解酶， 其广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中，参与体内糖蛋白、糖脂和寡糖的代 谢。目前该酶多用于检测早期肝癌，推测AFU一定程度上可反应机体的肿瘤负 荷，但本实验证实AFU与白血病没有相关性。LDH
11、一种糖酵解酶，LDH的测定 一定程度上反映了患者体内的肿瘤负荷是临床实验室检查常用的检测指标，对于 AL患者诊断、疗效及预后的判断有一定的指导意义，本实验提示Ang-2、 VEGF 与LDH均存在正相关性，说明Ang-2、VEGF高表达的患者白血病细胞负荷高， 预后不良。BMG是一种低分子量蛋白质，存在于人体淋巴细胞和其它有核细胞 表面，构成细胞膜上完整的HLA分子的一部分。急性白血病患者，白血病细胞 恶性增殖，结合于细胞表面的BMG向血清中释放增多，导致血清中BMG浓度增 加。推测血清中BMG可作为AL患者病情及治疗情况的评估指标之一。 5.4 Ang-2 与与 VEGF 在在 AL 中的协
12、同作用中的协同作用 Ang-2 和 VEGF 为目前已知的 2 个作用于血管内皮细胞的血管新生促进因 子，在血管生成及发展中均起着重要的作用。VEGF 可显著上调 Ang-2 在宿主基 质细胞的表达68。通过使内皮细胞转录激活的 VEGF 受体路径 Ang-2 的拷贝数 第 5 章 讨论 23 在体内迅速增高。亦有研究69发现 Ang-2 对血管生成的影响与局部微环境中 VEGF 的存在与否密切相关。1.当 VEGF 存在时，Ang-2 可消除血管基底膜和管 周细胞对血管形成的限制，并增加血管内皮细胞对 VEGF 的敏感性，有利于血 管出芽、生长。此时，Ang-2 促血管生成，使组织内新生血管
13、增生显著。2.当 VEGF 不存在时，Ang-2 的表达主要使血管发生退化，血管数目减少，同时伴有 内皮细胞的凋亡70。这说明 Ang-2 本身并无刺激血管生成的作用，它的这种促 进血管新生的作用是通过与 VEGF 的协同作用实现的，并且二者的这种作用互 为加强。本研究结果证实，急性白血病血清 Ang-2、VEGF 含量均有高表达且呈 显著正相关(P0.05)，提示 Ang-2 和 VEGF 在急性白血病的发生过程中相互促 进，二者协同作用是血管形成的始动环节之一。 总之，白血病的发生是一个多阶段、多环节的过程，血管新生与其密切相 关。Ang-2、VEGF 是两最个重要的促血管生成因子，因此分
14、析 Ang-2、VEGF 在 AL 中的表达，有助于探讨 AL 发生的机制，发展的过程，从而为临床 AL 的 预防、诊断和治疗、判断预后提供新的思路和途径。近年来以促血管生长因子为 靶标进行抗肿瘤性血管生成的研究渐成热点，而且由于其高效、非耐药的特点备 受关注。本研究证实 Ang-2 与 VEGF 在 AL 新生血管形成过程中有协同作用，提 示以 Ang-2 与 VEGF 抗体为靶向治疗 AL 值得进一步研究。 第 6 章 结论 24 第6章 结论 第6章 结论 1血清 Ang-2、VEGF 含量在 AL 初发未治、复发及未缓解缓解组中增高， 而完全缓解后明显下降，说明血清 Ang-2、VEG
15、F 含量与 AL 的时期相关； 2血清 Ang-2 与血清 LDH、BMG 正相关，与外周血 WBC、骨髓原始细胞 百分比、AFU 无明显相关性；血清 VEGF 与血清 LDH、BMG 正相关，与外周 血 WBC、骨髓原始细胞百分比、AFU 无明显相关性，说明 Ang-2、VEGF 高表 达的患者白血病细胞负荷高，预后不良； 3Ang-2 与 VEGF 存在正相关性，验证了在 AL 中 VEGF 上调 Ang-2，二 者协同促进血管生成； 4Ang-2、VEGF 与 AL 血管新生的形成密切相关，通过 Ang-2、VEGF 为 靶点进行抗血管新生治疗，有望成为治疗 AL 的新手段。 参考文献 25 参考文献 参考文献 1 Folkman J, DAmore PA. Blood vessel formation: what is its molecular basis J? Cell,1996, 27; 87(7):1153-1155. 2 RisauW. Mechanisms of angiogenesis J.Nature,1997:386:671-674. 3 Perez-Atayde A R,Sallan S E,Tadrow U, et al. Spectrum of tumor angiogenesis in the bone marrow of c
