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1、第9章 常见植物的脱毒与快速繁殖技术,植物组织培养,本章主要内容(4学时),蔬菜的脱毒与快繁 果树的脱毒与快繁 花卉植物的脱毒与快繁 农作物的脱毒与快繁 药用植物的试管快繁 树木的脱毒与快繁,第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术,(1)掌握马铃薯的生物学习性，掌握马铃薯脱毒培养的过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法；掌握番茄的生物学特性及快速繁殖方法； (2)掌握苹果的脱 毒方法与快繁技术；掌握葡萄的脱毒与快技术；掌握草莓的脱 毒与快繁技术； (3)掌握兰花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牵牛、百合等花卉的生物学特性，组培快速繁殖方法及自然繁殖法； (4)掌握甘薯的生物学特性，脱毒与快繁的方法及技术；
2、(5)掌握芦荟、桔梗等药用植物的快繁技术； (6)掌握毛白杨、河北杨等绿化苗木的快繁技术。,第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术,本章教学目的与要求,第一节 蔬菜的脱毒与快繁,第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术,马铃薯,蕃茄,一、马铃薯的组织培养,第一节 蔬菜脱毒与快繁,微型薯,第一节 蔬菜脱毒与快繁,马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。,第一节 蔬菜脱毒与快繁,危害有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒
3、、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少50%80%。,马铃薯病毒的种类,第一节 蔬菜脱毒与快繁,1、形态特性 根 根系由出生根和匍匐根组成。 茎 分地上部分和地下部分。 叶 全缘，心脏形。 花 为聚伞花序。 果实 浆果。,（一）、马铃薯特性和生物学习性,第一节 蔬菜脱毒与快繁,马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻。 发芽适温为1218。 地上茎叶生长温度为1721。 块茎形成要求昼温1424，夜温1214。 结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。,2、 生物学习性,第一节 蔬菜脱毒与快繁,通过微茎尖组织培养技术能
4、从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。,（二）、马铃薯脱毒技术,第一节 蔬菜脱毒与快繁,全国现有马铃薯播种面积300多万公顷，每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。,我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷，是世界单产最高国这瑞士（48.80吨/公顷）的1/4。最主要的因素就是种薯质量差，品种布局不合理。,我国马铃薯栽培现状,第一节 蔬菜脱毒与快繁,微茎尖组织培养-诱导出苗-联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定-脱毒试管基础苗。 固体、液体培养基相结合-扩繁基础苗-在防虫网室栽植或封闭温室扦插-原原种（或称脱毒小薯）。原
5、原种-原种1代-原种2代-良种1代-良种2代。,1脱毒种薯生产程序,第一节 蔬菜脱毒与快繁,（1）茎尖消毒,一般在室内发芽，芽经热处理（38）2周。然后取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌条件下先用70的酒精浸组织15-20秒，再用2次氯酸钠溶液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。,2茎尖培养脱毒,第一节 蔬菜脱毒与快繁,把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，留1-2个叶原基，0.20.3毫米，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，p H值5.8。,取材和接种,第一节 蔬菜脱毒与快繁,温度：2125 光照度：2000-3000
6、 lx 光照时间：12h/d 2-3周长愈伤，4-5周长绿点，3-6月长成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。,培养条件：,第一节 蔬菜脱毒与快繁,培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒）鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次）采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。 取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发育成510cm高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖58倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。,（2） 继代和生根,第一节 蔬菜脱毒与快繁,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10，3%蔗糖； 20-25
7、，3000-4000LX，14-16hr光照； 每3周继代一次，单芽茎段约1厘米； 原则试管苗用2年3年。,马铃薯继代培养基：,第一节 蔬菜脱毒与快繁,马铃薯试管苗,第一节 蔬菜脱毒与快繁,炼苗室温度：白天2327，夜间不低于14。 炼苗具体方法：移植前7d左右，将长有35片叶、高23cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。,(3) 驯化,第一节 蔬菜脱毒与快繁,1、指示植物鉴定 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，病毒、病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋
8、科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。,（三）、马铃薯无病毒苗的鉴定材料,第一节 蔬菜脱毒与快繁,叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释倍作为接种物(混入目的金刚砂)。 用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面，以右手指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水洗净，放置在的防虫室中，一般天可发病。,.接种液制备及接种,第一节 蔬菜脱毒与快繁,（） 直接块茎繁殖 （） 扦插繁殖 （） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存,（四）、马铃薯无病毒株的繁殖,第一节蔬菜脱毒与快繁,二、番茄的组织培养,
9、（一）、形态特征和生物学习性,番茄的叶片为长羽状，在叶轴上生有裂片，顶生裂片，小裂片，间裂片，这些裂片是叶的深裂，缺刻的变化。两性花，聚伞花序，浆果。 蕃茄耐低温，喜光照，对水分需求量极大，喜肥，适于微酸性或中性土壤。,第一节蔬菜脱毒与快繁,（二）、番茄的组织培养,1、外植体：幼嫩叶片 。 2、消毒：用0.1%升汞浸泡4min，再用无菌水冲洗3-4次 。 3、愈伤组织培养条件：MS + BA2mg/L + IAA1mg/L ，温度25，每天光照10h，光照度2000lx 。 4、分化培养：分化培养基MS+BA4中。 5、生根培养：MS+IAA2 mg/L。 6、炼苗栽植：将培养有根试管苗的瓶口
10、打开。煅炼3d后取出，洗去根上带有的培养基，移栽到营养土中，浇透水，并罩上塑料薄膜，以保温保湿，4-5d后去掉薄膜，新叶长出时即定植田间。,第一节蔬菜脱毒与快繁,（三）、番茄的胚培养,1、外植体制备：授粉后30-40d收获果皮完整的果实，果实放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用无菌蒸馏水充分淋洗。果实放在无菌吸水纸上，除去种子上的胶状复被。 2、培养基：启动：MS+硫胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰乳100ml/L，pH6.0；继代： MS+ 2,4-D2mg/L；分化：MS+BA1.5mg/L；生根：MS+NAA2mg/L。 3、培养条件：愈伤组织启动和继代，
11、用暗培养，27。芽再生和生根在室温20-30.16h/d 的光照，2000lx。,第一节蔬菜脱毒与快繁,第二节 果树的脱毒与快繁,葡萄,苹果,第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术,草莓,一、苹果的脱毒与快繁,（一）、苹果的形态特性和生物学特性,苹果（Malus pumila）属落叶乔木，树木高大。果实为假果。 苹果喜凉；喜光；适合在微酸性到中性土壤中栽种。,第二节果树脱毒与快繁,（二）、脱毒技术,1、病毒种类：苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒等 。 2、微尖嫁接脱毒：砧木：去顶的离体培养幼苗，接穗：试管培养的无毒新稍；嫁接后培养生叶，移栽即可。 3、热处理脱毒：把植株置于38 下2
12、5-50天。 4、茎尖培养脱毒：把0.1-0.3mm的茎尖离体培养。 5、脱毒苗的鉴定：抗血清法，电子 显微镜法，ELISA法、指示植物法。,第二节果树脱毒与快繁,（三）、苹果茎尖脱毒快繁技术,1、材料与消毒：带芽或茎尖的茎段；常规消毒，用无菌水洗35次 ；切茎尖约0.10.5mm。 2、芽的诱导：MS或LS+BA2+300500CH或LH+3%蔗糖的培养基上，诱导芽的分化。 3、继代增殖培养：MS+BA0.51+CH300 培养基上增殖。 4、生根培养：1/2MS或 White，Nitsh附加IAA1、IBA0.2和GA33 等。,第二节果树脱毒与快繁,（四）苹果花粉培养,1、选材与预处理：
13、选取中心花蕾吐红，周围花蕾明显增大，但花序尚未分离的花蕾，置于冰箱中1-3预处理。 2、消毒：70%的酒精浸约0.5min，再在10%漂白粉上清夜中浸1520min。 3、胚状体诱导：接种到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 38%蔗糖培养基上，2530下培养。 4、生根：同茎尖脱毒中所用方法。,第二节果树脱毒与快繁,（五）胚培养,1、取材消毒：取授粉3050d内的幼果，用70%酒精擦拭。取出种子，剥出幼胚或成熟胚。 2、启动培养：接种在BA0.25+IAA0.5的1/2MS培养基上。培养条件为2530和15002000lx光照14h。 3、分化增殖：移植到加有BA0.5
14、1.0和CH300的1/2MS培养基上 ，在光下培养条件同上。 4、生根培养：同茎尖培养。,第二节果树脱毒与快繁,二、葡萄的脱毒与快繁,（一）、形态特征和生物学习性 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。节上具有卷须，可向上攀援。叶近圆型或卵型，35裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在57时即受冻。,第二节果树脱毒与快繁,（二）、葡萄的组织培养,1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取12的茎尖。消毒。分离出约2长的茎尖，接种到培养基上。 2、培养基：MS培养基（无机盐减半为好），再添加BA12，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，琼脂0.6%，而B5培养基愈伤
15、组织化严重，茎尖生长不好。 3、苗分化：BA0.5，同时添加GA30.2，黑暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。 4、根分化：将苗转入MS+IAA0.4+NAA0.05培养基中进行生根。,第二节果树脱毒与快繁,（三）、葡萄无病毒苗的培养,葡萄受到26种病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少，风味变劣。葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。,第二节果树脱毒与快繁,（三）、葡萄无病毒苗的培养,1、热处理脱毒： （1）葡萄无性系处理：材料置于38，CO2120010-6的人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒。 （2）将感染材料的修面芽插入健
16、康指示植物的蔓中，然后在38的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继续生长。 （3） 直接将葡萄蔓浸泡在50的 温水中1020min，可以治疗皮尔斯病，但不能治疗黄点病及卷叶病。,第二节果树脱毒与快繁,2、组织培养脱毒技术 （1）、茎尖接种后变绿、增大期的培养：在25，相对湿度80%，16h的长日照条件下水培生成的嫩茎取0.20.3mm 茎尖接种于 1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，琼脂6.0，pH5.8培养基上。 （2） 从畸形叶和茎叶伸长期：采用1/2MS，添加IAA0.2，BA0.1，KT0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L的培养基。 （3）地上部和地下部的伸长期：Galzy（1964）培养基，添加NAA0.1。,（三）、葡萄无病毒苗的培养,第二节果树脱毒与快繁,三、草莓的脱毒与快繁,（
