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1、鸡 新 城 疫 灭 活 疫 苗 的 制 备制备油佐剂灭活苗1 材料1.1 毒种：鸡新城疫病毒弱毒 La sota 株。1.2 实验动物：9-10 日龄鸡胚若干。1.3 主要试剂：碘酊，1%硫柳汞溶液，7 号白油，司盘-80，硬脂酸铝，吐温-80，甲醛等。主要仪器：孵化箱、1ml 注射器、蛋架、打孔器、蜡烛、胶体。2.实验步骤2.1 种毒繁殖：将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释，尿囊内接种 10日龄 SPF 鸡胚，每胚 0.1mol.选种后 72-120 小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液，装于灭菌器内定量分装于安领瓶，冷冻保存。2.2 接种前准备；种毒稀释，照蛋，打孔。2.3 接种；取生
2、产用毒种，用灭火理盐水适当稀释（10-4 或 10-5） ，每胚尿囊内接种 0.1ml.接种。后密封针孔，置 36-37 继续孵育。2.4 孵育和观察；鸡胚接种后，每日照室 1 次，将 24 小时内死亡的鸡胚弃去，此后，每天照蛋 2 次，死亡的鸡胚随时取出，4 摄氏度保存，冷却 24 小时。2.5 收获：将冷却的鸡胚取出，用碘酐消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，捐去卵壳膜。剪破绒毛尿至膜及羊膜(谨防卵黄破裂)。吸取胚液。对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查、凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者，弃去不用。吸取胚液放于同一灭菌的容器内。 （凝集试验和无菌试验）2.6 灭活：可以过滤，再
3、加甲醛溶液，甲醛溶液的最终浓度为0.1。然后在 37灭活 16 小时，期间振摇 34 次，在 4保存，应不超过 1 个月。 （无菌检验和灭活检验）2.7 制苗2.7.1 油相制备：将 7 号白油与司盘- 80 ( Span - 80)按 94 6 比例混合再加总量 2%的硬脂酸铝溶液混匀后,121 高压灭菌 15 min 即为油相。2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液) 和吐温- 80 ( Tween - 80)以 96 4 的比例混合，充分搅拌，使吐温 -80 完全溶解为止，作为水相。2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液) 和吐温- 80 ( Tween - 80)以 96 4 的比例混合，充分搅拌，使吐温 -80 完全溶解为止，作为水相。2.7.4 检验：乳化后，取 35ml 以 3000rmin 离心 15 分钟，若有分层现象，应重复搅拌。同时徐徐加入水相 l 份。以 10000rmin搅拌 25 分钟，在终止混拌前加入 1硫柳汞溶液，使其最终浓度为 0.01。2.7.4 检验：乳化后，取 35ml 以 3000rmin 离心 15 分钟，若有分层现象，应重复搅拌 1 次。2.7.5 分装：定量分装，加盖密封，成品。3 疫苗质量的鉴定3.1 物理性状3.2 无菌检验、安全检验、效力检验等
