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1、1第七章 细菌学卫生检验种类及标准邵丽军2主要内容第一节体液、分泌物及排泄物细菌学检验第二节各种环境标本细菌学检验及卫生标准（自学）3临床感染性疾病的诊断和治疗应用良好的检测技术和方法，提供准确的结果或报告确定检查目的和方法正确规范的采集和运送标本临床检验流程第一节体液、分泌物及排泄物细菌学检验4细菌学鉴定方法1、形态结构检查2、细菌生长特性检查如菌落3、生化试验4、血清学试验5、药敏试验6、细菌毒素检测7、分子生物学检测8、噬菌体分型试验9、动物试验5临床标本常规细菌学检验程序标本选择标本采集与运送观察标本、前处理直接涂片快速检验分离培养增菌培养可疑菌落血清学鉴定药物敏感试验生化反应形态观察
2、结果报告6细菌学检验报告原则分级报告一级报告：直接涂片染色结果及培养结果二级报告：分离培养及药敏结果三级报告：细菌种属、药敏结果、结果评价和建议78无菌原则正确采样时间正确采样部位 足够样本量 多样性采集做好记录9u一、血液标本细菌学检验u二、脑脊液标本细菌学检验u三、穿刺液和引流液标本细菌学检验u四、尿液标本细菌学检验u五、脓液和分泌物标本细菌学检验u六、痰液标本细菌学检验u七、生殖道标本细菌学检验u八、粪便标本细菌学检验10一、血液标本细菌学检验种类种类常见病原菌常见病原菌G G+ +球菌球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化
3、脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G G+ +杆菌杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌G G- -球菌球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G G- -杆菌杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌血杆菌真菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌拟杆菌、产
4、气荚膜梭菌11（一）血液标本的采集与送检u1.采样时间：发热期、用药之前、病情发展u2.采样部位及频率：多部位、高频率l例1：亚急性心内膜炎：24h内在三个不同部位采集3次血标本，两次间隔不少于15分钟，如培养阴性，就再采3次血标本。l例2：急性脓毒血症：在10分钟内在不同部位采23次血标本。12u3.样本采集的量：成人血量510ml，婴儿1ml2ml，儿童3ml5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别作双相培养(37/28)。u4.样本的送检：尽快，室温u5.操作：直接采血注入含増菌肉汤的培养瓶或用不含防腐剂的肝素抗凝管至实验室接种，需同时做需氧和厌氧培养13血培养一级报告二级报告三级
5、报告“检出*菌”，药敏试验结果；7天仍无生长现象，报告为“7天培养无细菌生长”（结核可培养8周报告阴性）14（二）细菌学检验15（一）标本的采集与送检u1.采样：腰椎穿刺术无菌采集脑脊液3-5ml，床边接种或放入无菌试管中，立即送检（采样到送检不超过1h）；u2.注意保温，不可置冰箱保存，因为会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌；u3、脑脓肿吸出物尚须检测厌氧菌和寄生虫u培养基选择：普通血培养瓶、厌氧血培养瓶、血平皿、中国蓝平皿、流感嗜血杆菌平皿等。二、脑脊液标本细菌学检验16（二）细菌学检查u1涂片检查：革兰染色：查找一般细菌，尤其脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和链球菌多
6、见。抗酸染色：查找结核分枝杆菌。墨汁染色：查找新型隐球菌。u2细菌培养：脑脊髓液培养多数需34天，在此期间如有细菌生长，经鉴定报告“菌”，同时报告药敏试验结果。17床边接种离心涂片，同时增菌1.不染色镜检2.革兰、抗酸、墨汁染色单菌落涂片染色离心沉淀物或増菌培养物脑脊液报告单18三、穿刺液和引流液标本细菌学检验（一）标本的采集与送检u1、标本来源：胸腔积液、腹水、心包积液、关节液、胆汁、鞘膜液深部组织液等u2、标本量：心包积液、关节液为1-5ml，胸腔积液、腹水为5-10mlu3、收集送检：无菌收集并置于无菌抗凝试管送检，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌氧运送培养基内送检，无法立即送
7、检可室温保存。19（二）细菌学检查u1、标本处理：浆液离心沉淀物涂片；脓液直接涂片；含血细胞，加等量蒸馏水破坏红细胞后，离心沉淀物涂片u2、涂片检查：这类标本因原部位是无菌的，只要检出细菌即可诊断感染的类型，故直接涂片很重要。革兰染色：查找一般细菌。抗酸染色：查找结核分枝杆菌。u3、分离培养及鉴定：离心沉淀物分别接种增菌肉汤、血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板、厌氧血琼脂平板。如有细菌生长，需进一步鉴定和药敏试验后报告。20四、尿液标本细菌学检验（一）标本的采集与送检u1、采集方法：防止尿液被尿道口菌群污染，采用中段尿采集法、导尿法和膀胱穿刺法采集标本l无菌导尿管采集尿液，在排出15ml尿液后
8、收集，有潜在引入尿道菌的危险；留置导尿管采尿，先以75%酒精消毒导管口，用无菌注射器收集10ml；长期留置导尿管患者，应在更换新尿管时留取尿标本。21u2、采集时间：通常应采集早晨起床后第一次尿液，在抗菌药物应用之前采集尿液10-15ml u3、送检：及时送检，室温不超过2h；冷藏不超过8h；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检。22（二）细菌学检查u1、显微镜检查：离心沉淀物涂片。根据临床情况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显微镜直接观察（钩端螺旋体）。u2、分离培养及鉴定：必须做倾注培养法计数尿液菌，培养结果才有临床意义。离心沉淀物分别接种血琼脂
9、平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色、生化鉴定、药敏等。23u3、结果报告涂片镜检，报告形态特点和染色情况；尿液细菌计数，如为革兰阳性菌104CFUm1；如为革兰阴性菌105CFUm1，可诊断为泌尿系感染。10的尿路感染者可能在同份尿标本中分离到两种细菌，并都是病原菌。但当检出3种或以上不同微生物，认为标本被污染。分离到的细菌，经鉴定及药敏试验后，可报告“检出*菌，药敏结果是*”；48h无细菌生长，报告阴性。报告“2天培养无细菌生长”。24尿液检查尿液标本离心沉淀涂片可疑菌落血清学鉴定药物敏感试验生化反应形态观察尿液菌落计数接种平板分离培养报告结果25（一）标
10、本的采集与送检u拭子采集法、纱布条采集法、注射器抽吸法l开放式脓肿l封闭式脓肿l大面积烧伤l瘘管采样u样品不能及时送检可冷藏；厌氧培养要床边接种或厌氧运送。五、脓液和分泌物标本细菌学检验清洗后，棉拭子直接采样切开排脓时用无菌棉拭子采样或注射器抽吸可多部位棉拭子采集创面分泌物纱布条塞入瘘管或棉拭子采样26（二）细菌学检查u1、涂片检查：革兰染色：可检查一般细菌，特别注意真菌及放线菌存在。抗酸染色：找结核分枝杆菌(部分奴卡菌也可阳性)u2、分离培养及鉴定：分泌物或脓液分别接种血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色、生化鉴定、药敏等。u3、结果：一般培养2日，以
11、为诺卡菌培养7天，厌氧菌3-5天，报告结果。2728（一）标本的采集与送检u1、采样时间及类型：使用抗生素前采集。用清水反复漱口后取第2或3口的晨痰；就诊时深呼吸后咳出的即时痰；送痰前一日，晚间咳出的痰液。u2、采样方法l自然咳痰法l拭子采集法l小儿取痰法 l特殊取痰法呼吸道深部痰，可雾化使痰易排出压住舌根，棉拭子反复涂抹咽后壁或悬雍垂后侧压舌，棉拭子深入咽部，刺激咳出分泌物胃内采痰法、支气管镜等特殊方法六、痰液标本细菌学检验29u3、送检：样品不能及时送检室温不超过2h；结核或真菌痰液冷藏。u4、标本质量：标本量一般在3-5ml，标本性状属于干酪痰、褐色血痰或含少量新鲜血液的血痰、粘液痰者为
12、合格的标本30（二）痰液细菌学检查痰液标本脓性或带血部分涂片可疑菌落血清学鉴定药物敏感试验生化反应形态观察稀释后接种平板分离培养报告结果31（一）标本的采集与送检u1、采样方法l生殖道分泌物l穿刺液标本l怀疑梅毒患者 l前列腺液u2、送检l普通细菌、衣原体、支原体l淋病奈瑟球菌l厌氧菌清洗尿道口外阴，棉拭子深入尿道口2-3cm采集；阴道分泌物在阴窥镜下采集盆腔脓肿者及子宫分泌物需穿刺采集清洗生殖器，从溃疡底部挤出少许组织液按摩前列腺后采集七、生殖道标本细菌学检验无法及时送检可冷藏保存床边接种或保温后及时送检室温，厌氧送检或床边接种32（二）细菌学检验u1、显微镜检查u2、分离培养及鉴定u3、结
13、果报告33（一）标本的采集与送检u1、采样方法l1、常规培养不主张用肛拭子，自然排便后，挑取有脓液、粘液部位的粪便2-3g或液状粪便1-2ml；l2、直肠拭子法：不易获得粪便时或排便困难的患者及幼儿，可采用直肠拭子方法采集；u2、送检l不能及时送检放入卡-布运送培养基或pH7.0磷酸盐甘油运送或保存。疑似霍乱弧菌，碱性蛋白胨水运送保存。八、粪便标本细菌学检验34（二）细菌学检验u1、显微镜检查：因正常菌群多，一般不做，特殊菌可做。如霍乱弧菌制动试验和革兰染色镜检；结核分枝杆菌抗酸染色；葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌和酵母样菌革兰染色u2、 细菌培养：根据需要检查的细菌选择粪便培养条件，一般需培养23天如有阳性菌生长，需进一步进行生化鉴定和药敏试验后报告。 35重要知识点各类临床标本采集及送检临床标本常规细菌学检验程序及分级报告
