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1、淋巴细胞的分别、计数淋巴细胞的分别、计数中山医学院免疫学教研室2021-04 实验目的和要求实验目的和要求l 掌握 外周血单个核细胞分别的方法l 掌握 细胞计数的方法 实验原理实验原理 外周血中细胞种类 细胞密度 红细胞和多形核白细胞 1.092 淋巴细胞和单核细胞PBMC 1.075-1.092 血小板 1.030-1.035 葡聚糖泛影葡胺密度梯度离心法： 根据外周血中各种血细胞比重不同使不同密度的 细胞呈梯度分布，从而分别出PBMC。 实验资料实验资料1. 肝素抗凝血肝素抗凝血2. Hanks液液3. 淋巴淋巴细胞分胞分别液液F-H)4. 程度离心机，加程度离心机，加样枪5. 显微微镜，
2、吸管，吸管6. 细胞胞计数板，台盼数板，台盼蓝计数液数液 实验方案实验方案抽取外周血抽取外周血分别单个核细胞淋巴细胞分别单个核细胞淋巴细胞和单核细胞和单核细胞PBMC 细胞计数 实验步骤实验步骤肝素抗凝静脉血1.5ml加加1.5ml Hanks1.5ml Hanks液稀液稀释置于2ml淋巴细胞分别液上( (交界液面：一定不要打乱交界液面：一定不要打乱) )稀释后的稀释后的抗凝血抗凝血淋巴细胞淋巴细胞分别液分别液留意：稀释的肝素抗凝血，沿管壁悄留意：稀释的肝素抗凝血，沿管壁悄然叠加于分别液上，使两者构成一个然叠加于分别液上，使两者构成一个明晰地界面。明晰地界面。用Hanks液洗、离心(1000r
3、pm，5min)反复2次血浆血浆分层液分层液红细胞红细胞粒细胞粒细胞离心2000rpm，25min淋巴细胞与单淋巴细胞与单核细胞层核细胞层留意：细胞经离心分层留意：细胞经离心分层后，缓慢小心汲取，勿后，缓慢小心汲取，勿突破构成的细胞层。突破构成的细胞层。 用Hanks液重悬细胞取10ul细胞悬液与90ul白细胞计数液或台盼兰计数液混合 取10ul于细胞计数板上 细胞计数细胞计数板细胞计数 原那么：原那么： 数上不数下，数左不数右数上不数下，数左不数右长长1mm宽宽1mm 结果计算结果计算22个大方格内细胞总数单个核细胞浓度细胞数/ml)10410= =(稀释倍数活细胞百分率= =活细胞数细胞总
4、数100%细胞活力检测：死细胞被染成蓝色，活细胞不着色 细胞数量： 方法评价方法评价u 纯度在90%以上u 淋巴细胞约占90-95%u 细胞收获率可达80-90%u 活细胞百分率在95%以上密度梯度离心法分别外周血单个核细胞： 细胞计数的仪器血细胞分析仪，临床常用血细胞分析仪，临床常用装有自动显微镜察看系统装有自动显微镜察看系统自动细胞计数仪自动细胞计数仪 本卷须知本卷须知l请请将将带带血的血的试试管，吸管搜集放置于管，吸管搜集放置于实验实验室后的室后的红红色消毒盆中。色消毒盆中。l值值日生担任搜集加日生担任搜集加样枪样枪，计计数板，洗耳球，台盼数板，洗耳球，台盼蓝计蓝计数液，数液，HanksHanks液。清液。清扫实验扫实验室室卫卫生。生。
