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1、2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05一一基础知识基础知识2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05一一基础知识基础知识 凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：1 1、凝胶：、凝胶：2 2、概念：、概念：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：1 1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛
2、）脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）一一基础知识基础知识2 2、概念：、概念：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051 1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）2 2、概念：、概念：根据被根据被分离物质的蛋白质相对分子分离物质的蛋白质相对分子质量的大小质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。的分子筛作用，来进行分离。 凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：一一基础知识基
3、础知识2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱法分离蛋白质的原理2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2
4、010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长相对分子质量较小相对分
5、子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长较慢较慢相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，
6、相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝
7、胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对
8、（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（
9、 ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，
10、相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 054 4、具体过程、具体过程较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快相对分子质量较小相对分子质量较小3 3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，
11、相对（当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），），移动速度（移动速度（ ），相对分子质量不同），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。的蛋白质因此得以分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 缓冲溶液：缓冲溶液：1 1、概念：、概念：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051 1、概念：、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量在一定的范围
12、内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PHPH发发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液：缓冲溶液：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052 2、作用：、作用：能够抵制（能够抵制（ ）对）对溶液的（溶液的（ ）的影响，维持）的影响，维持PH基本不变。基本不变。1 1、概念：、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PHPH发发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有生明显变
13、化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液：缓冲溶液：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05外界的酸或碱外界的酸或碱2 2、作用：、作用：能够抵制（能够抵制（ ）对）对溶液的（溶液的（ ）的影响，维持）的影响，维持PH基本不变。基本不变。1 1、概念：、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PHPH发发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液：缓冲溶液：20
14、10年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05外界的酸或碱外界的酸或碱PH值值2 2、作用：、作用：能够抵制（能够抵制（ ）对）对溶液的（溶液的（ ）的影响，维持）的影响，维持PH基本不变。基本不变。1 1、概念：、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PHPH发发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液：缓冲溶液：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制通常由（通常由（ ）
15、种缓冲剂）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（剂的（ ）就可以制）就可以制得（得（ ）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制通常由（通常由（ ）种缓冲剂）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（剂的（ ）就可以制）就可以制得（得（ ）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。122010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 0512使用比例使用比例3 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制通常由（通常由（ ）种缓冲剂）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲溶解于水中配制而成。调
16、节缓冲剂的（剂的（ ）就可以制）就可以制得（得（ ）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 0512使用比例使用比例在不同在不同PH范围内范围内3 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制通常由（通常由（ ）种缓冲剂）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（剂的（ ）就可以制）就可以制得（得（ ）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05说出人体血液中缓冲对。说出人体血液中缓冲对。思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05NaH2PO4 / Na2HPO4H2CO3 / NaHCO3说出人体血
17、液中缓冲对。说出人体血液中缓冲对。思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05电泳：电泳：1 1、概念：、概念：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051 1、概念：、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。移的过程。电泳：电泳：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种
18、分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分
19、子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、(
20、 )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使
21、带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )
22、的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子
23、( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极带电性质的差异带电性质的差异一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( )
24、移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极带电性质的差异带电性质的差异大小大小一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在
25、电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极带电性质的差异带电性质的差异大小大小一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具
26、有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。形状形状2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极带电性质的差异带电性质的差异大小大小迁移速度迁移
27、速度一定的一定的PH2 2、原理：、原理： 许多重要的生物大分子，如许多重要的生物大分子，如( )等都具有等都具有( ) 在在( )下，这些基团会带上下，这些基团会带上( ) 。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。形状形状2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 0
28、52010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05分类：分类：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05分类：分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05聚丙烯酰胺凝胶：聚丙烯酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺是由单体丙烯酰胺和交联剂和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂亚甲基双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少
29、以及分子率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。的大小等因素。分类：分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05为了消除静电荷对迁移率的影响可以为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复复合物，合物，SDS所所带
30、负电荷带负电荷的量大大超过了蛋的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于取决于( )。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05SDS为了消除静电荷对迁移率的影响可以为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋
31、白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复复合物，合物，SDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于取决于( )。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05SDS单条肽链的分子量单条肽链的分子量为了消除静电荷对迁移率的影响可以为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，的
32、作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复复合物，合物，SDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于取决于( )。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05SDS分子的大小分子的大小为了消除静电荷对迁移率的影响可以为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复
33、生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复复合物，合物，SDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于取决于( )。单条肽链的分子量单条肽链的分子量2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05测定（测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（通常用十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙聚
34、丙烯酰胺凝胶电泳烯酰胺凝胶电泳2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05测定（测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（通常用十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙聚丙烯酰胺凝胶电泳烯酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量蛋白质相对分子质量2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05电泳检测电泳检测PCR结果结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05电泳检测电泳检测PCR结果结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？什么？
35、二二实验操作实验操作2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行，便于进行DNA的提取；人的红的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。含量丰富，便于提取血红蛋白。用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？什么？二二实验操作实验操作2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：1. 样品处理样品处理样品处理样品处理粗分
36、离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定二二实验操作实验操作2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05血液有哪些成分？血液有哪些成分？2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05血血液液血血浆浆水分水分其他其他物质物质血浆蛋白、无机盐、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等磷脂、葡萄糖等血血细细胞胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞( (最多最多) )血红蛋白血红蛋白(90(90) )两个两个肽链肽链两个两个一肽链一肽链四个亚铁血红四个亚铁血红素基团素基团血液有哪些成分？血液有哪些成分？血红蛋白血红蛋白2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05201
37、0年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05每个肽链环绕每个肽链环绕( ),此基团可携带此基团可携带( )。血红蛋白因含有血红蛋白因含有( )而呈红色而呈红色2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05一个亚铁血红素基团一个亚铁血红素基团每个肽链环绕每个肽链环绕( ),此基团可携带此基团可携带( )。血红蛋白因含有血红蛋白因含有( )而呈红色而呈红色2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05一个亚铁血红素基团一个亚铁血红素基团每个肽链环绕每个肽链环绕( ),此基团可携带此基团可携带( )。血红蛋白因含有血红蛋白因含有( )而呈红色而呈红色一分子氧或一分子一分子氧或一分子CO22010年上学期
38、湖南长郡卫星远程学校制作 05一个亚铁血红素基团一个亚铁血红素基团血红素血红素每个肽链环绕每个肽链环绕( ),此基团可携带此基团可携带( )。血红蛋白因含有血红蛋白因含有( )而呈红色而呈红色一分子氧或一分子一分子氧或一分子CO22010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，
39、再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白低速
40、短时间低速短时间目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白低速短时间低速短时间黄色血浆黄色血浆目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使
41、白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白低速短时间低速短时间黄色血浆黄色血浆暗红色暗红色目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效
42、果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白低速短时间低速短时间黄色血浆黄色血浆暗红色暗红色五倍体积五倍体积目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下
43、层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05杂质蛋白杂质蛋白低速短时间低速短时间黄色血浆黄色血浆暗红色暗红色五倍体积五倍体积生理盐水生理盐水目的：目的：去除去除( )方法：方法：( )离心离心(速度越高和时速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管，然后用胶头吸管吸出上层透明的吸出上层透明的( )，将下层，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用的红细胞液体倒
44、入烧杯，再加入用( )的的( ) 洗涤。洗涤。(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 重复洗涤重复洗涤( )次，直至上清液中次，直至上清液中已没有已没有( )，表明洗涤干净。利于，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。数过少。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05三三 重复洗涤重复洗涤( )次，直至上清液中次，直至上清液中已没有已没有( )，表明洗涤干净。利于，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。数过少。2010年上学期湖南长郡卫
45、星远程学校制作 05三三黄色黄色 重复洗涤重复洗涤( )次，直至上清液中次，直至上清液中已没有已没有( )，表明洗涤干净。利于，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。数过少。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05初次离心后的结果初次离心后的结果2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05初次离心后的结果初次离心后的结果2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 加加( )到到( )体积，体积，再加再加40体积的体积的( )( 溶解细胞膜溶解细胞膜) ，置于置于( )上充分搅拌上充分搅拌10分钟分钟(加加速细胞破裂速细胞破裂)
46、，细胞破裂释放出血红蛋白。，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 加加( )到到( )体积，体积，再加再加40体积的体积的( )( 溶解细胞膜溶解细胞膜) ，置于置于( )上充分搅拌上充分搅拌10分钟分钟(加加速细胞破裂速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放蒸馏水蒸馏水2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 加加( )到到( )体积，体积，再加再加40体积的体积的( )( 溶解细胞膜溶解细胞膜) ，置于置于( )上充分搅拌上充分搅拌10分钟分钟(加
47、加速细胞破裂速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放原血液原血液蒸馏水蒸馏水2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 加加( )到到( )体积，体积，再加再加40体积的体积的( )( 溶解细胞膜溶解细胞膜) ，置于置于( )上充分搅拌上充分搅拌10分钟分钟(加加速细胞破裂速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放原血液原血液甲苯甲苯蒸馏水蒸馏水2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 加加( )到到( )体积，体积，再加再加40体积的体积的( )( 溶解细胞
48、膜溶解细胞膜) ，置于置于( )上充分搅拌上充分搅拌10分钟分钟(加加速细胞破裂速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放原血液原血液甲苯甲苯磁力搅拌器磁力搅拌器蒸馏水蒸馏水2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05将搅拌好混合液转移到离心管内，将搅拌好混合液转移到离心管内，以以2000r/min的速度离心的速度离心10min，试管，试管中的溶液分为中的溶液分为4层：层：(3)(3)分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05有机溶剂有机溶剂 无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层脂类物质脂类物质 白
49、色脂溶性物质沉淀层白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液血红蛋白溶液 红色透明液体红色透明液体红细胞破碎物沉淀红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物暗红色沉淀物分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透
50、析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05透析袋透析袋1取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质
51、的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05透析袋透析袋磷酸缓冲液磷酸缓冲液1取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用
52、于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05透析袋透析袋磷酸缓冲液磷酸缓冲液7.01取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上
53、学期湖南长郡卫星远程学校制作 05除去样品中分子量较小的杂质除去样品中分子量较小的杂质透析袋透析袋磷酸缓冲液磷酸缓冲液7.01取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05除去样品中分子量较小的杂质除去样品中分子量较小的杂
54、质透析袋透析袋磷酸缓冲液磷酸缓冲液7.0缓冲液缓冲液1取取( )ml的血红蛋白溶液装入的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量的物质的量浓度为浓度为20mmol/L的的( )中，中，pH为为( )，透析，透析12小时，目的是小时，目的是( )或用于更换样品中的或用于更换样品中的( )。透析袋。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)(4)透析透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05利用透析袋透析利用透析袋透析2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052. 凝胶色谱制作凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱的制
55、作）凝胶色谱柱的制作 取长取长40厘米，内径厘米，内径1.6厘米的厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。玻璃管，两端需用砂纸磨平。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05底塞的制作：底塞的制作：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，再用覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。目尼龙纱包好。顶塞的制作：顶塞的制作：组装：组装：安装其他附属结构。安装其他附属结构。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05底塞中插入的玻璃管的上部不得底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺超出橡皮塞
56、的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。质分离不彻底。注注 意意2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理计算凝胶量计算凝胶量配置凝胶悬浮液配置凝胶悬浮液装填装填洗涤平衡洗涤平衡2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶凝胶装
57、填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。白质的洗脱次序，降低分离效果。 注注 意意2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05缓冲液液面不要低于凝胶表面，否缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。现象，否则重新填装。 注注 意意2
58、010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05装配好的凝胶柱装配好的凝胶柱2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05在提取血红蛋白实验中用的缓冲在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05在提取血红蛋白实验中用的缓冲在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的缓冲液模拟细胞内的PHPH环境，保证血红环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的
59、科学研究。色）和材料的科学研究。思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05你能从凝胶色谱的分离原理分析为你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。分离的效果。你能从凝胶色谱的分离原理分析为你能从凝胶色谱的分离
60、原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱50cm高高2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱缓冲液缓冲液缓慢下降缓慢下降50cm高高2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05加透析样品加透析样品2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05注意正确的加样操作：注意正确的加样操作：不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面贴壁加样贴壁加样使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动注注 意意2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053
61、）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱缓冲液缓冲液缓慢下降缓慢下降50cm高高样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：洗脱：洗脱：收集：收集：加透析样品加透析样品2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05收集得到的纯化后的蛋白收集得到的纯化后的蛋白2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051. 你是否完成了对血液样品的处理？你你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三三实验结果分析与评价实验结果分析与评价2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05观察你处理的血液样品离心后是否分观察你处理的血液样品离心后是否分层？如果分层不明显，可能
62、是洗涤次数少、层？如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。响后续血红蛋白的提取纯度。1. 你是否完成了对血液样品的处理？你你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三三实验结果分析与评价实验结果分析与评价2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产你装填的凝胶色谱
63、柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？判断的？2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？判断的？由于凝胶是一种半透明的介质，因此可由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖200
64、02000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。要重新装柱。 2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053. 你能观察到蛋白质的分离过程中，你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？动情况，并据此判断分离效果？2010年上学期湖南长郡卫星
65、远程学校制作 05如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。谱柱的装填有关。3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？动情况，并据此判断分离效果？20
66、10年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051.在分离血红蛋白的整个过程在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？什么？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05让血红蛋白处在稳定的让血红蛋白处在稳定的pHpH范围范围内，维持结构和功能。内，维持结构和功能。1.在分离血红蛋白的整个过程在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？什么？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052.与其他真核细胞相比，红细胞有什与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离么特点
67、？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？有什么意义？思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052.与其他真核细胞相比，红细胞有什与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？有什么意义？血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考思考2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05
68、3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？血红蛋白提取和分离的程序可分为四大血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即: :样品的处理；再经过透析去除分子量较小的样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色
69、谱杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即: :样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。进行纯度鉴定。2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是中，关于蛋白质的叙述，正确的是A.相对分子质量较小的蛋白质行程相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质大于相对分子质量较大的蛋白质B.相对分子质量较小的蛋白质行程相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质小于相
70、对分子质量较大的蛋白质C.相对分子质量较小的蛋白质行程相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质等于相对分子质量较大的蛋白质D.二者根本无法比较二者根本无法比较2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 051. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是中，关于蛋白质的叙述，正确的是A.相对分子质量较小的蛋白质行程相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质大于相对分子质量较大的蛋白质B.相对分子质量较小的蛋白质行程相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质小于相对分子质量较大的蛋白质C.相对分子质量较小的蛋白
71、质行程相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质等于相对分子质量较大的蛋白质D.二者根本无法比较二者根本无法比较2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052. 使用使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于于A. 电荷的多少电荷的多少B. 分子的大小分子的大小C. 肽链的多少肽链的多少D. 分子形状的差异分子形状的差异2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 052. 使用使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于于A. 电荷
72、的多少电荷的多少B. 分子的大小分子的大小C. 肽链的多少肽链的多少D. 分子形状的差异分子形状的差异2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053. 在采血容器中加入柠檬酸钠的在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是目的是A. 调节调节pHB. 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C. 防止微生物生长防止微生物生长D. 防止血液凝固防止血液凝固2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 053. 在采血容器中加入柠檬酸钠的在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是目的是A. 调节调节pHB. 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C. 防止微生物生长防止微生物生长D. 防止血液凝固防止血液凝固2010年
73、上学期湖南长郡卫星远程学校制作 054. 一分子血红蛋白最多可携带的一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和分子数和CO2分子数分别是分子数分别是A. 4、2B. 4、4 C. 2、1D. 1、12010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 054. 一分子血红蛋白最多可携带的一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和分子数和CO2分子数分别是分子数分别是A. 4、2B. 4、4 C. 2、1D. 1、12010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 055. 记住样品处理中的血红蛋白溶液记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序离心后分层顺序自上而下自上而下是是：2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 055. 记住样品处理中的血红蛋白溶液记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序离心后分层顺序自上而下自上而下是：是：有机溶剂有机溶剂脂脂类物质类物质血红蛋白血红蛋白溶液溶液红红细胞破碎物沉淀细胞破碎物沉淀
