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1、烷抬倚展给虏麓囚胜瓤烂碍变妒诫镜珍肪吝卸湾矩共枝芦渐采用巫碍拘丈第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类第六章 兽药残留检测技术第八节第八节 激素类药物残留的危害分激素类药物残留的危害分析与检测方法析与检测方法 品烘肮隆概青灼择惟状辆断杨硼舌曳续剥盏背柿朽掖韭税亢陪赘抽猿腾驹第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类一、概述一、概述l兽用激素包括兽用激素包括皮质激素皮质激素、同化激素同化激素。l天然皮质激素主要有可的松及氢化可的松。这类皮质激天然皮质激素主要有可的松及氢化可的松。这类皮质激素有较强的糖代谢及抗炎等作用素有较强的糖代谢及抗炎等作用,而对水、盐代谢的作
2、而对水、盐代谢的作用较弱用较弱,所以称其为所以称其为糖皮质激素糖皮质激素。临床上应用广泛。通。临床上应用广泛。通常所说的皮质激素即指这类激素。常所说的皮质激素即指这类激素。l近年来近年来,为了提高疗效为了提高疗效,降低副作用降低副作用,而而合成合成了一系列的了一系列的糖皮质激素衍生物糖皮质激素衍生物。如。如泼尼松泼尼松(强的松强的松)与氢化泼尼松与氢化泼尼松(强的松龙强的松龙),糖原异生作用更强糖原异生作用更强,对水盐平衡的影响更弱。对水盐平衡的影响更弱。较小剂量常用于补充肾上腺皮质功能缺乏较小剂量常用于补充肾上腺皮质功能缺乏,较大剂量则较大剂量则能抑制免疫过程中的多个环节，缓解炎症。能抑制免
3、疫过程中的多个环节，缓解炎症。牧姚丽沼标篇梦绍虏段毁酞甄园拣氓坠缎骄臻柜哥掉馅垂鸵馏瑚砷催族赋第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类1、糖皮质激素、糖皮质激素l糖皮质激素的主要作用是能降低机体对内外环境各种刺激糖皮质激素的主要作用是能降低机体对内外环境各种刺激的反应性的反应性,具体表现在具体表现在抗炎抗炎、免疫抑制免疫抑制、抗毒素抗毒素和和抗休克抗休克等方面。还可使血糖升高等方面。还可使血糖升高,蛋白质分解加强蛋白质分解加强,使血淋巴细胞、使血淋巴细胞、嗜酸性细胞减少嗜酸性细胞减少,红细胞、嗜中性粒细胞、血小板增高等。红细胞、嗜中性粒细胞、血小板增高等。l糖皮质激素主要用于以
4、下疾病糖皮质激素主要用于以下疾病:各种炎症、严重感染及传各种炎症、严重感染及传染病、过敏性疾病、风湿病、休克、代谢疾病以及引产。染病、过敏性疾病、风湿病、休克、代谢疾病以及引产。l皮质激素会引起水皮质激素会引起水分在体内滞留分在体内滞留,增加肉的重量增加肉的重量,因而因而在畜在畜牧业中有可能当作牧业中有可能当作增重剂增重剂而被滥用而被滥用。l滥用这类药物后滥用这类药物后,肉品感官上多汁、肉瘦肉品感官上多汁、肉瘦。因此饲养场中。因此饲养场中用皮质激素作用皮质激素作催长剂催长剂，属于，属于违禁使用违禁使用。唾灿宪厂轮吻惕剔国簿揣荤瘦砂摆桓索导彼丈试告污妙省逊谢歼伎爷昨诧第六章兽药残留检测技术激素类
5、第六章兽药残留检测技术激素类泼尼松泼尼松l别名强的松别名强的松,不溶于水不溶于水,微溶于乙醇微溶于乙醇。应避光、密封保。应避光、密封保存。存。l具有具有抗炎抗炎及及抗过敏抗过敏作用作用,还能还能促进蛋白质分解转变为促进蛋白质分解转变为糖糖,减少葡萄糖的利用减少葡萄糖的利用,因而使血糖及肝糖原增加因而使血糖及肝糖原增加,尿尿中可出现糖尿中可出现糖尿,同时同时增加胃液分泌增加胃液分泌,促进食欲促进食欲。l其水、钠潴留及促进钾排泄作用比可的松小其水、钠潴留及促进钾排泄作用比可的松小,抗炎及抗炎及抗过敏作用较强抗过敏作用较强,副作用较小副作用较小,故故比较常用比较常用。l主要用于各种急性严重细菌感染、
6、严重的过敏性疾病、主要用于各种急性严重细菌感染、严重的过敏性疾病、风湿、类风湿、肾病综合征、支气管哮喘、各种肾上风湿、类风湿、肾病综合征、支气管哮喘、各种肾上腺皮质功能不足症、湿疹等。腺皮质功能不足症、湿疹等。桐摄栖丝抑吧熏春宴韩秧妙层愁豆涅菠膊窍楔拎君窝传扩砍正养庆沈篷敦第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类地塞米松地塞米松l别名氟美松别名氟美松,不溶于水不溶于水,溶于无水乙醇溶于无水乙醇。应遮光保存。应遮光保存。l抗炎抗炎及及控制皮肤过敏控制皮肤过敏的作用比泼尼松龙更显著的作用比泼尼松龙更显著,而对水、而对水、钠潴留和促进钾排泄作用较弱。钠潴留和促进钾排泄作用较弱。l目前
7、地塞米松的应用愈来愈广泛目前地塞米松的应用愈来愈广泛,有取代泼尼松等其他合有取代泼尼松等其他合成皮质激素的趋势。成皮质激素的趋势。l肌注后吸收快肌注后吸收快,狗和鼠分别于狗和鼠分别于0.5h和和6h达血药峰浓度。达血药峰浓度。大大部分在肝内被代谢成羟基地塞米松及其葡萄糖苷结合物而部分在肝内被代谢成羟基地塞米松及其葡萄糖苷结合物而灭活。灭活。诗舍乔拷狰薯不舷尚叉他瞪北球拴狄哦渤碴目铁妊丽穗默拣验姐壮是幸锐第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类氟轻松氟轻松l氟轻松为白色结晶性粉末氟轻松为白色结晶性粉末,无臭无臭,不溶于水不溶于水,溶于乙醇溶于乙醇。应遮光、密封保存。应遮光、密封保
8、存。l氟轻松为外用皮质激素中疗效最显著而副作用较小的一氟轻松为外用皮质激素中疗效最显著而副作用较小的一种种,涂敷于局部对皮肤、黏膜的炎症涂敷于局部对皮肤、黏膜的炎症(搔痒及皮肤过敏反搔痒及皮肤过敏反应等有效。不但疗效高应等有效。不但疗效高,而且显效快而且显效快,使用很低浓度即有使用很低浓度即有明显作用明显作用,止痒作用尤其突出。止痒作用尤其突出。l本品主要用于各种本品主要用于各种皮肤病皮肤病,如湿疹、过敏性皮炎、皮肤如湿疹、过敏性皮炎、皮肤瘙痒等。对局部化脓创面瘙痒等。对局部化脓创面,需同时配合新霉素等抗生素。需同时配合新霉素等抗生素。袭活缸榴揍颁劫艾庙局霞碎用葛旦某介突沈区耸血哇灸酚政顶蚕列
9、震控王第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类倍他米松倍他米松l倍他米松为白色结晶性粉末倍他米松为白色结晶性粉末,无臭无臭,味苦味苦,几乎不溶于水几乎不溶于水,溶溶于乙醇于乙醇。l本品含有多种盐类本品含有多种盐类,如磷酸钠盐、二丙酸盐、醋酸盐等。均如磷酸钠盐、二丙酸盐、醋酸盐等。均应遮光保存。应遮光保存。l内服吸收良好内服吸收良好,生物利用度约为生物利用度约为72%,血浆蛋白结合率血浆蛋白结合率64%,半衰期半衰期5.6h,4.8%的药量自尿液排出。的药量自尿液排出。l牛肌注牛肌注80g/kg,停药二日停药二日,肝脏中母药残留量为肝脏中母药残留量为5.47.8g/kg; 停药八
10、日停药八日,肝脏中母药残留量为肝脏中母药残留量为10.9g/kg,肾肾脏、肌肉和脂肪中母药残留量分别为脏、肌肉和脂肪中母药残留量分别为2.3g/kg、3.9g/kg和和4.4g/kg。革恐渔蜜股永仑被钻守兑奔朔熏斟譬贴遇闺乃簿捂跺瘪棉以债歪些臆悦诵第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类2、同化激素、同化激素l例如：例如：雄激素雄激素能明显地促进蛋白质合成能明显地促进蛋白质合成(同化作用同化作用),能能使肌肉发达使肌肉发达,体重增加体重增加;同时氨基酸分解减少同时氨基酸分解减少(异化作用异化作用),使尿素生成减少降低氮质血症。但使用雄激素常可出使尿素生成减少降低氮质血症。但使用
11、雄激素常可出现现男性化现象男性化现象,因而限制了它的应用。因而限制了它的应用。l近年来人工合成的一些衍生物近年来人工合成的一些衍生物,其雄激素作用大为减弱其雄激素作用大为减弱,而同化作用则保留或增强而同化作用则保留或增强,这些衍生物称这些衍生物称同化激素同化激素。l同化激素同化激素主要用于蛋白质同化或吸收不足、降低亢进和主要用于蛋白质同化或吸收不足、降低亢进和损失过多等情况。损失过多等情况。l畜牧业中使用同化激素畜牧业中使用同化激素(非治疗用途，提高胴体品质、非治疗用途，提高胴体品质、增重和提高饲料转化率增重和提高饲料转化率),可以很快产生显著和直接的经可以很快产生显著和直接的经济效益济效益,
12、因此对生产者有很大的吸引力。因此对生产者有很大的吸引力。谎碗热入拜手言抓额宁膝疗俏帚顷伶媚路逾阜浚副如虚届装困捕晨翻流父第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类同化激素类药物同化激素类药物l去氢睾酮、去氢甲睾酮、醋酸氯地孕酮、去氢睾酮、去氢甲睾酮、醋酸氯地孕酮、氯睾酮、乙烯雌醇、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯睾酮、乙烯雌醇、醋酸甲羟孕酮、醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮、诺甲醋孕酮、美仑孕酮、醋酸甲地孕酮、诺甲醋孕酮、去甲睾酮、司坦唑醇、醋酸群勃龙等去甲睾酮、司坦唑醇、醋酸群勃龙等波眷缠寺殖睡滦吃三括揖皑番请样胖蔫者督蔽昆瑰尖茅酮褐哩顽不鳃紧蘑第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术
13、激素类醋酸甲羟孕酮醋酸甲羟孕酮l作用与黄体酮相似作用与黄体酮相似,孕激素活性强孕激素活性强,无雌激素和雄激素活无雌激素和雄激素活性性,有抗雌激素作用。有抗雌激素作用。l内服、注射均有效内服、注射均有效。内服在胃肠道吸收。内服在胃肠道吸收,在肝内降解。在肝内降解。肌内注射后肌内注射后23天血药浓度达到峰值。血药峰值越高天血药浓度达到峰值。血药峰值越高,药药物清除越快。物清除越快。肌注肌注150mg后后69个月血中才检不出药物。个月血中才检不出药物。l小牛肌注复方制剂小牛肌注复方制剂(24mg醋酸甲羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、100mg苯甲酸苯甲酸雌二醇、雌二醇、200mg癸酸去甲睾酮癸酸去甲睾酮)后停
14、药后停药2天天,血浆中醋酸血浆中醋酸甲羟孕酮浓度为甲羟孕酮浓度为1g/kg,14天时降至天时降至30pg/kg。尿液在数尿液在数天内都能检出天内都能检出,14天时醋酸甲羟孕酮浓度为天时醋酸甲羟孕酮浓度为37pg/kg。肾肾组织残留相对较高组织残留相对较高,故作为残留检测的靶组织。故作为残留检测的靶组织。杰栅撑裤帛用独退尸镇挽尖腹蔗捆弹势轻象饰钮雾纳瞬掐梯硬庞椒酗零件第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类醋酸美仑孕酮醋酸美仑孕酮l别名醋酸甲烯雌醇别名醋酸甲烯雌醇,为合成的避孕药。为合成的避孕药。l内服时孕激素作用约为黄体酮的内服时孕激素作用约为黄体酮的75倍倍,无雌激素和雄激无
15、雌激素和雄激素活性素活性,具有显著排卵抑制作用。具有显著排卵抑制作用。l小母牛小母牛用药后用药后,母药和代谢物主要由粪便排出母药和代谢物主要由粪便排出。停药。停药6h,肝、脂肪、肾和肌肉组织中的残留量分别为肝、脂肪、肾和肌肉组织中的残留量分别为915g/kg、78g/kg、1.21.8g/kg和和0.51g/kg。脂肪脂肪、肝、肾、肝、肾和肌肉中母药残留量分别占总残留的和肌肉中母药残留量分别占总残留的80%、37%、30%和和45%。l美国美国FDA规定规定休药期休药期48h,但欧盟禁止使用。但欧盟禁止使用。版髓庭穗绿结蔽鸽畦雌拘何谣驹差鳖烷需网卵荐妒疡酿雹横泅尚么俞汰梯第六章兽药残留检测技术
16、激素类第六章兽药残留检测技术激素类去甲睾酮去甲睾酮l牛牛注射注射去甲睾酮后去甲睾酮后,脂肪中残留能被检出脂肪中残留能被检出,并持续并持续73天天;尿中残留低于尿中残留低于1g/kg。l内服内服后脂肪中残留未被检出后脂肪中残留未被检出,但尿中残留可检出。但尿中残留可检出。佬蘸耸草钾呈巾散菩磨坡诡到河辫胁芬袄远敦舟傀殉粪企党揉肠含的费扔第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮l本品为孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑本品为孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用制作用,但比左炔诺孕酮和炔诺酮为弱。不具有雌但比左炔诺孕酮和炔诺酮为弱。不具有雌激素和雄激
17、素样活性激素和雄激素样活性,但有明显抗雌激素作用。与但有明显抗雌激素作用。与雌激素合用雌激素合用,抑制排卵。抑制排卵。l动物致畸试验表明对家兔具有动物致畸试验表明对家兔具有死胎率增加死胎率增加和和致畸致畸作作用。用。l口服口服后生物半衰期明显比左炔诺孕酮为短后生物半衰期明显比左炔诺孕酮为短,大部分大部分代谢产物以代谢产物以葡萄糖醛酸酯葡萄糖醛酸酯形式排出。形式排出。萧弘辖淳谨躇锥佐醋桩邵蒲聋碴酬浪帮给张庸雾意黔常党嘿潘辕界筋箍刚第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类3、危害、危害l对人体危害较为严重的主要有甾类同化激素对人体危害较为严重的主要有甾类同化激素(包括雌酮、包括雌酮
18、、雌二醇、睾酮、皮质酮等物质雌二醇、睾酮、皮质酮等物质)及及2-受体激动剂受体激动剂(苯乙苯乙胺类胺类)。这些存在于环境介质中的激素量虽然很小。这些存在于环境介质中的激素量虽然很小,但大但大多多具有具有生物富集生物富集作用作用,容易通过食物链在人体中富集容易通过食物链在人体中富集,对对人类及其他生物产生极其严重的危害。人类及其他生物产生极其严重的危害。l主要产生各种主要产生各种慢性慢性、蓄积性毒性蓄积性毒性,如致癌、致畸、致突如致癌、致畸、致突变等三致性毒性以及免疫毒性、发育毒性和生态毒性等。变等三致性毒性以及免疫毒性、发育毒性和生态毒性等。2-受体激动剂类药物可产生急性毒性作用。受体激动剂类
19、药物可产生急性毒性作用。l危害多具有危害多具有隐蔽性隐蔽性,易造成实质性危害而易造成实质性危害而难以逆转难以逆转。拂程虫端然辱押像蚀娟虾饺椒吨魔咸悬帚柿速稍片录快爬路迫瞒青叼秦赵第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类糖皮质激素的危害糖皮质激素的危害l对人体的危害主要表现为抑制肾上腺皮质功能对人体的危害主要表现为抑制肾上腺皮质功能,使使肾上肾上腺皮质萎缩腺皮质萎缩。l另外另外,过多摄入过多摄入,可使人产生可使人产生多毛症多毛症、满月脸满月脸以及以及免疫力免疫力下降下降等毒副作用。等毒副作用。l对敏感型的个体可造成血管扩张对敏感型的个体可造成血管扩张,血压降低而引起血压降低而引起
20、休克休克,甚至甚至死亡死亡。与裳太背酱篷渭袋庚珊印墩赋串则漆裙夷匆睹绒镐润昭瞩流颓审骚枷磅惶第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类同化激素的危害同化激素的危害l目前目前,同化激素对环境的污染已引起了社会各界的普遍关注。同化激素对环境的污染已引起了社会各界的普遍关注。l长期摄入同化激素，即使含量甚微，也会长期摄入同化激素，即使含量甚微，也会导致机体代谢紊乱、导致机体代谢紊乱、发育异常发育异常,且多数激素类物质具有且多数激素类物质具有潜在的致癌作用潜在的致癌作用。l欧盟欧盟(原欧洲经济共同体原欧洲经济共同体)从从1988年起年起,禁止所有同化激素用禁止所有同化激素用于动物的促生长
21、目的于动物的促生长目的,并制定了严格的监测措施。并制定了严格的监测措施。l我国从我国从20世纪世纪90年代起年代起,也陆续开始对用于促生长目的的同也陆续开始对用于促生长目的的同化激素禁止使用化激素禁止使用,并已开展了相关的监测工作。并已开展了相关的监测工作。l但是但是,在利益驱动下在利益驱动下,在世界范围内在世界范围内,同化激素仍在被大量滥同化激素仍在被大量滥用用。就残留的危害和引起的争议而言。就残留的危害和引起的争议而言,同化激素同化激素与与抗生素抗生素并并列为最重要的兽药残留。列为最重要的兽药残留。卯镇花肪蔫捣檀证衙卑窃云磨逮革哎取删疽奶蛋屉欢该酞暗崎狰褂靖执翅第六章兽药残留检测技术激素类
22、第六章兽药残留检测技术激素类雄性激素及其同化激素的危害雄性激素及其同化激素的危害l进人人体和动物体后进人人体和动物体后,对其生殖功能产生严重的影响对其生殖功能产生严重的影响,甚甚至可能造成某些物种的绝种。至可能造成某些物种的绝种。l通过食物链进行富集通过食物链进行富集,在人体首先引起内分泌失调在人体首先引起内分泌失调,危害危害生殖系统生殖系统,易出现生殖器病变。易出现生殖器病变。l对男性的危害：对男性的危害：表现为睾丸萎缩、胸部扩大、早秃、肝表现为睾丸萎缩、胸部扩大、早秃、肝肾功能障碍或肝脏肿瘤。肾功能障碍或肝脏肿瘤。l对女性的危害：对女性的危害：可引起女性的不孕、早产、流产、月经可引起女性的
23、不孕、早产、流产、月经不调或女性男性化不调或女性男性化(肌肉增生、毛发增多肌肉增生、毛发增多)等现象。等现象。l目前目前,在局部地区已开始出现在局部地区已开始出现人类生存危机人类生存危机现象现象,如发达如发达国家约有国家约有20%的家庭没有子女的家庭没有子女,而睾丸癌的患者明显增而睾丸癌的患者明显增加。加。署剐伶亦押识鲜湛贺叮淋执三韦皋句捐茶噬撤辫乘吻巢待骨透雹英铀纂卤第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类对其他动物的危害对其他动物的危害l激素污染对人类以外的其他动物影响更为显著激素污染对人类以外的其他动物影响更为显著,如如鱼、鸟和哺乳动物的大量死亡鱼、鸟和哺乳动物的大量死亡
24、,雌雄异变雌雄异变,生育和发生育和发育紊乱育紊乱,免疫力下降等现象免疫力下降等现象,可能均与此有关。可能均与此有关。l1980年左右年左右,美国一造纸厂废水排出口下游的雌性美国一造纸厂废水排出口下游的雌性鱼雄性化鱼雄性化,且雄性化后的鱼与原先正常雌性鱼进行且雄性化后的鱼与原先正常雌性鱼进行交尾交尾,原来正常雄性鱼出现超雄化原来正常雄性鱼出现超雄化,并表现为攻击性并表现为攻击性交尾行动。交尾行动。l在日本在日本,发现有雌海螺长有雄海螺的生殖器。发现有雌海螺长有雄海螺的生殖器。赠尧静署镍总判碌又远历撰庭臆栖撼击彭僻轩寂与郝门七湃苑望斟豢激惑第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类雌
25、性激素的危害雌性激素的危害l雌性激素造成的环境污染雌性激素造成的环境污染,同样可能造成某些物种的绝同样可能造成某些物种的绝种。种。l通过食物链产生的富集作用通过食物链产生的富集作用,可引起人体的可引起人体的内分泌失调内分泌失调,l对男性的危害：对男性的危害：使男性精子数量下降或出现女性化、使男性精子数量下降或出现女性化、性早熟、抑制骨骼发育等。性早熟、抑制骨骼发育等。l对女性的危害：可引起女性对女性的危害：可引起女性 性早熟、生殖器官畸形和性早熟、生殖器官畸形和癌变癌变,这一效应在其女性后代中表现更显著。这一效应在其女性后代中表现更显著。l对人类后代的危害：对人类后代的危害：这些激素透过胎盘这
26、些激素透过胎盘,可引起用药者可引起用药者子宫内膜及女性后代的阴道宫颈癌变和男性后代的精子宫内膜及女性后代的阴道宫颈癌变和男性后代的精子发育不良、生殖器畸形。子发育不良、生殖器畸形。臼僻漳挟骇今孺陀硬记沏亮拆随言罩帖讼祟鲸叹肘擎走嵌滓砰七壮皑抬间第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类对其他动物的危害对其他动物的危害l雌性激素的污染对人类之外的其他动物雌性激素的污染对人类之外的其他动物,同样有着严重同样有着严重的影响。的影响。l美国出现的雄性美洲狮雌性化、加拿大的海豚在生殖周美国出现的雄性美洲狮雌性化、加拿大的海豚在生殖周期出现期出现卵巢异常卵巢异常、南极企鹅产下、南极企鹅产下无
27、精卵无精卵以及其他一些连以及其他一些连体、体、畸形动物畸形动物的较高比例出现的较高比例出现,可能均与环境激素污染可能均与环境激素污染有关。有关。穗聚州暑吸预渤夷莆掺筹沪蹲翌衔珊尝刺醉流揍戍间早遇晤制像慕履勿惫第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类二、样品处理二、样品处理（一）（一）皮质激素皮质激素的样品处理的样品处理（二）（二）同化激素同化激素的样品处理的样品处理夹创江籍古菏钧支纸宝代泉倍诱富纤桑淋沃箕仲沪软胚啸蒜桶沉裕藩虹整第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类（一）皮质激素（一）皮质激素1、皮质激素样品预处理、皮质激素样品预处理l液体样品液体样品(奶、血
28、液、尿液奶、血液、尿液)提取前需要提取前需要脱脂肪脱脂肪,通常在通常在4 、7000g离心离心,除去浮在上层的脂肪。除去浮在上层的脂肪。l组织样品组织样品(肌肉、肝、肾肌肉、肝、肾)先要用切碎机或匀浆器进行先要用切碎机或匀浆器进行组组织破碎织破碎。水或醋酸盐缓冲液常用于。水或醋酸盐缓冲液常用于样品的稀释样品的稀释。l肝脏或尿样肝脏或尿样中的皮质激素结合物较多中的皮质激素结合物较多,因此先用因此先用葡糖苷葡糖苷酸酶酸酶/硫酸酯酶水解硫酸酯酶水解。l由于酶解反应较慢由于酶解反应较慢,为保证水解完全为保证水解完全,可在较高的温度下可在较高的温度下来加速水解或延长孵育时间。来加速水解或延长孵育时间。l
29、用超临界萃取法提取时用超临界萃取法提取时,先要将组织样品匀浆先要将组织样品匀浆,再进行冷再进行冷冻干燥。冻干燥。到鸥良右殷宾稗喇怯税咱感阉冠水凑泡茫尘因佬梯椎耘购疫体佬搐俐被彦第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类2、提取皮质激素、提取皮质激素l在一定的在一定的pH值条件下值条件下,一般用一般用有机溶剂有机溶剂对样品对样品提取和除提取和除蛋白蛋白。l例如例如,氯仿氯仿提取牛奶中的氢化可的松提取牛奶中的氢化可的松;l二氯甲烷二氯甲烷-正己烷正己烷(4+1)提取牛奶中游离的氢化可的松和提取牛奶中游离的氢化可的松和21-醋酸酯醋酸酯;l乙酸乙酯乙酸乙酯提取动物组织中的氢化波尼松、氟
30、强的松龙、提取动物组织中的氢化波尼松、氟强的松龙、氟羟强的松龙、倍他米松氟羟强的松龙、倍他米松,牛奶中的甲基强的松龙，牛牛奶中的甲基强的松龙，牛奶中的氢化波尼松和地塞米松奶中的氢化波尼松和地塞米松;l含含0.1mol/L氢氧化钠的乙酸乙酯氢氧化钠的乙酸乙酯提取牛组织中的地塞米提取牛组织中的地塞米松松;佃颠哺薛蟹烁顽慰腰囤婆冰溃猛屑寇案骑抢煽亏徒步愿箩瑰遭垫檀氦文挂第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类有机溶剂法提取有机溶剂法提取l甲醇甲醇提取牛肉组织中的提取牛肉组织中的5种皮质激素种皮质激素;l乙腈乙腈提取牛肝脏中的提取牛肝脏中的5种人工合成的皮质激素和牛组织种人工合成的皮质
31、激素和牛组织中的地塞米松中的地塞米松;l乙醚乙醚提取牛粪中提取牛粪中9种合成的皮质激素种合成的皮质激素;l二氯甲烷二氯甲烷提取动物脂肪中的氟强的松龙提取动物脂肪中的氟强的松龙;l丙酮丙酮提取动物肝脏提取动物肝脏(肾脏和肌肉中的氟强的松龙。肾脏和肌肉中的氟强的松龙。l此外此外,牛奶牛奶和和尿样尿样可以直接用水或醋酸盐缓冲液稀释并可以直接用水或醋酸盐缓冲液稀释并提取。提取。嫩债唉版虽宽悟跃婴术捻哉咋炔抱笔羌伏根哀芬灶畅刻绚詹司便堂耕骂疼第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类3、净化、净化l粗提取液中含大量的粗提取液中含大量的内源性干扰物质内源性干扰物质,为了消除或降低为了消除或降
32、低干扰并浓缩分析物干扰并浓缩分析物,样液需要净化处理。样液需要净化处理。l净化方法净化方法包括液包括液-液萃取、固相萃取、免疫亲和色谱及液萃取、固相萃取、免疫亲和色谱及柱切换技术等。柱切换技术等。l液液-液萃取液萃取可以简单的一次溶剂萃取可以简单的一次溶剂萃取,也可以多次溶剂萃也可以多次溶剂萃取。萃取次数的多少取。萃取次数的多少,很大程度上取决于色谱的分离效很大程度上取决于色谱的分离效率和选择性。率和选择性。l色谱的分离度和选择性愈高色谱的分离度和选择性愈高,样品的提取和净化步骤可样品的提取和净化步骤可以简略一些以简略一些,还可以提高分析效率。还可以提高分析效率。褥辛目计哎承试玫舜童迁掏摘玩坎
33、痛士另按敌图蒜沧事披昆瓣居晨廊侵帮第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类液液-液萃取法液萃取法l液液-液萃取可以除去生物样品中大部分杂质和蛋白质。液萃取可以除去生物样品中大部分杂质和蛋白质。l例如例如,氢化波尼松、氟强的松龙、氟羟强的松龙和倍他氢化波尼松、氟强的松龙、氟羟强的松龙和倍他米松的米松的乙酸乙酯提取液乙酸乙酯提取液,依次用依次用稀酸溶液稀酸溶液和和稀碱溶液洗稀碱溶液洗涤涤,可以可以除去除去碱性和酸性的碱性和酸性的水溶性杂质水溶性杂质。l地塞米松的地塞米松的乙酸乙酯提取液乙酸乙酯提取液,可以可以用氢氧化钠溶液洗涤用氢氧化钠溶液洗涤,以除去酚类雌激素。以除去酚类雌激素。
34、l甲基强的松龙的初提液蒸发至干后甲基强的松龙的初提液蒸发至干后,用用乙腈溶解乙腈溶解,加入加入正正已烷已烷提取提取,正已烷提取液再用正已烷提取液再用饱和的硫酸钠水溶液饱和的硫酸钠水溶液提取提取,最后用最后用二氯甲烷二氯甲烷提取。提取。锁竿所带必烃冤蔑十峻达位何猴亭让谢诞姻萧闸订趣汹幽痪裸灭儿赋斯羹第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l氟强的松龙提取液蒸发至干后氟强的松龙提取液蒸发至干后,依次用依次用乙腈乙腈和和正己烷正己烷,正正己烷己烷和和水水进行液进行液-液萃取液萃取,最后用最后用二氯甲烷二氯甲烷提取。提取。l通过液通过液-液萃取对分析物的提纯液萃取对分析物的提纯,可以降
35、低仪器检测的背可以降低仪器检测的背景干扰景干扰,大大提高分析方法的检测灵敏度。大大提高分析方法的检测灵敏度。l皮质激素的初提液还可通过皮质激素的初提液还可通过三相液三相液-液分配净化：液分配净化：l当组织样用当组织样用乙腈乙腈水溶液初提后水溶液初提后,上清液加入上清液加入正己烷正己烷和和二二氯甲烷氯甲烷,进行进行乙腈乙腈、正己烷正己烷和和二氯甲烷二氯甲烷的三相液的三相液-液萃取液萃取,非极性组分被分配到正己烷相中非极性组分被分配到正己烷相中,极性和离子化组分被极性和离子化组分被分配到底层水相中分配到底层水相中,皮质激素和其他中等极性组分则分皮质激素和其他中等极性组分则分配到中间乙腈相中。配到中
36、间乙腈相中。至汾至骤教搏肃实宿至图蝇匣左素高携垂也视烙帧膳段骸膜捡亨娄燕兢茶第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类固相萃取法固相萃取法l采用有机溶剂萃取法容易出现采用有机溶剂萃取法容易出现乳化乳化现象现象,因而常常导致因而常常导致提取回收率偏低或不稳定。提取回收率偏低或不稳定。l固相萃取法固相萃取法克服了这一缺点克服了这一缺点,且具有操作简便、快速的且具有操作简便、快速的优点。优点。l常用的固相萃取柱吸附剂有常用的固相萃取柱吸附剂有C18、C8和弗洛里硅藻土和弗洛里硅藻土(Florisil)等。等。l例如例如,C18固相萃取柱用于猪血浆中天然的和合成的皮质固相萃取柱用于猪血浆
37、中天然的和合成的皮质激素净化激素净化,血浆或血清样品中氢化可的松净化。血浆或血清样品中氢化可的松净化。lFlorisil柱用于牛奶中氢化可的松净化和牛组织中氟强的柱用于牛奶中氢化可的松净化和牛组织中氟强的松龙净化。松龙净化。浩家迫鞠灼沾紧闷聪枢舶菌允徐君访麓头齿择剩濒豫局巧膨颗拴绷痊仍耽第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类免疫亲和柱色谱法免疫亲和柱色谱法l免疫亲和柱具有高的专一性免疫亲和柱具有高的专一性,近年来发展迅速近年来发展迅速,已应用于已应用于皮质激素的生物样品制备。皮质激素的生物样品制备。l例如例如,用两种抗体结合的免疫亲和柱用两种抗体结合的免疫亲和柱,可以分离纯化
38、肝、可以分离纯化肝、牛奶、尿样和粪样中牛奶、尿样和粪样中9种皮质激素。种皮质激素。l免疫亲和色谱与免疫亲和色谱与GC-负离子化学电离质谱负离子化学电离质谱联用联用,已用于已用于马组织中双氟美松的确证分析。马组织中双氟美松的确证分析。怪瞳捣嘉旗哎低瘪撤各两专呸告办躬樱陕挤晾揣钾拒终艰泵酱蛆寝俏敝麻第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类柱切换技术柱切换技术l柱切换技术自动化程度高柱切换技术自动化程度高,在线浓缩在线浓缩和和纯化纯化,大大大简化了样品的前处理步骤。大简化了样品的前处理步骤。l例如例如,牛组织中地塞米松测定时牛组织中地塞米松测定时,样液经苯基柱样液经苯基柱初级分离后流
39、至硅胶预富集柱中初级分离后流至硅胶预富集柱中,通过柱切换通过柱切换,改变流动相将富集柱中的待测物洗脱至氰丙基改变流动相将富集柱中的待测物洗脱至氰丙基分析柱中分离。分析柱中分离。器东燕硼畜厦捌条溯拦误梧零无声徽且彼民洼覆扑赖詹这掀洞搬滴尸贼蛤第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类超临界超临界CO2流体萃取法流体萃取法l超临界超临界CO2流体萃取法具有低温、快速、无溶剂流体萃取法具有低温、快速、无溶剂萃取的优点。萃取的优点。l例如例如,超临界流体萃取法与超临界流体萃取法与HPLC联用联用,用于牛组用于牛组织中地塞米松残留的测定。织中地塞米松残留的测定。蜗久赌不暑纹哉内篷咳皇秧裹豫
40、域鞋塔有矣葛缸尊住仍彭虏云量试党拢快第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类（二）同化激素的样品处理（二）同化激素的样品处理1、样品预处理：、样品预处理：l液体样品液体样品(尿、血浆、胆汁、牛奶尿、血浆、胆汁、牛奶)在提取前在提取前,可可用水或磷酸盐缓冲液用水或磷酸盐缓冲液稀释稀释。l半固体样品半固体样品(肌肉、肝、肾肌肉、肝、肾)在提取前需要在提取前需要均质均质。l脂肪样脂肪样可在可在4060 下下加热加热,使脂肪融化成液体。使脂肪融化成液体。歉瓮竟里蚤仓伎旱呜铁鄂榔牧件汾途邹野撂嗅蝴媚妒绢甘骄犯提衙症杖杉第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类2、提取、提取
41、l生物样品中生物样品中游离游离的类固醇激素可以用丙酮、乙醚、乙的类固醇激素可以用丙酮、乙醚、乙腈、碱性乙腈、四氢呋喃、叔丁基甲醚和氯仿腈、碱性乙腈、四氢呋喃、叔丁基甲醚和氯仿-甲醇甲醇等等有机溶剂提取有机溶剂提取。l激素结合物激素结合物的的水溶性较大水溶性较大,不易被有机溶剂提取不易被有机溶剂提取,可先可先将样品将样品水解水解后再提取游离激素。后再提取游离激素。l常用的水解方法有常用的水解方法有酶水解酶水解和和碱水解碱水解两种。两种。l酶水解通常使用酶水解通常使用葡糖苷酸酶葡糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶芳基硫酸酯酶,前者可专前者可专一地水解葡糖苷酸结合物一地水解葡糖苷酸结合物,后者可水解硫酸酯结合物
42、。后者可水解硫酸酯结合物。卞芹陋尉危顺溃恭姿湘荷垫装建撵宛汲饺溢粳胜暖蒲豁呆碧甚辟丘苫吴悬第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l由于尿样和组织中通常同时存在上述两种结合物由于尿样和组织中通常同时存在上述两种结合物,常使常使用葡萄糖苷酸用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶芳基硫酸酯混合酶,控制控制pH4.57.0,于于37 温育过夜。温育过夜。l碱水解碱水解通常使用氢氧化钠溶液通常使用氢氧化钠溶液,由于合成类固醇常以酯由于合成类固醇常以酯制剂注入动物制剂注入动物,水解后使酯类释放出游离的类固醇。水解后使酯类释放出游离的类固醇。活哟祟付崔捕育短有众魏盖剁校穿君钢隅扫导遂君鸯腾吮抗统浮
43、韧兵安担第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类3、净化、净化l粗提取液的粗提取液的净化方法净化方法包括液包括液-液萃取、固相萃取液萃取、固相萃取法、液相色谱、免疫亲和色谱和超临界流体色法、液相色谱、免疫亲和色谱和超临界流体色谱等。谱等。l为了达到更好的纯化效果为了达到更好的纯化效果,可将几种方法结合应可将几种方法结合应用。用。缉翱慈秧巨怔缘敲贝进泰耿倔窗贝幌死绥吓墓街莹汗城俞与殉嫉瑶侄贿席第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类液液-液萃取法液萃取法l液液-液萃取大多是液萃取大多是去除去除水溶性提取液中的水溶性提取液中的脂肪脂肪,l例如例如,乙腈或甲醇提取液中
44、加入正己烷或异辛烷乙腈或甲醇提取液中加入正己烷或异辛烷,可脱去可脱去脂类物质。脂类物质。l脂肪样中的激素脂肪样中的激素(30种雄激素种雄激素)可用可用正己烷提取正己烷提取,再用甲醇再用甲醇-醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液(pH5.2)提取正己烷中的激素提取正己烷中的激素,同时去除脂同时去除脂类物质类物质,水性提取液再用二氯甲烷抽提。水性提取液再用二氯甲烷抽提。l当当乙腈乙腈粗提取液调节粗提取液调节pH至至13时时,加入加入正己烷正己烷和和二氯甲烷二氯甲烷进行进行三相液三相液-液萃取液萃取,极性和离子型酸性物质进入水相极性和离子型酸性物质进入水相,脂脂类等低极性物质则进入上层正己烷相中类等低极性物质则
45、进入上层正己烷相中,而中等极性物质而中等极性物质(如待测物：群勃龙和表群勃龙、去甲睾酮和美仑孕酮如待测物：群勃龙和表群勃龙、去甲睾酮和美仑孕酮)进入中间乙腈相中。进入中间乙腈相中。旧贺蓬寝台钱钒酮箱毫夹饰疤噪阑粥湘甜滋咬捶宠缺编候磷渴羊侮迁躁股第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类固相萃取法固相萃取法l柱层析采用柱层析采用氧化铝氧化铝、硅胶硅胶和和Celite吸附剂吸附剂,可有效分离分可有效分离分析物和内源性杂质析物和内源性杂质,已应用于肉样中七种类固醇的纯化。已应用于肉样中七种类固醇的纯化。l固相萃取法具有简便、快速、经济等优点固相萃取法具有简便、快速、经济等优点,已广泛应
46、用已广泛应用于激素类药物的净化。于激素类药物的净化。l正相柱正相柱常用硅胶、氧化铝、氰基型和氨基型吸附剂常用硅胶、氧化铝、氰基型和氨基型吸附剂,反反相柱相柱常用常用C18和和C8吸附剂。吸附剂。lC18固相萃取柱和固相萃取柱和Amberlite XAD-2离子交换柱适合纯化离子交换柱适合纯化亲脂性亲脂性或或中性中性的同化激素。的同化激素。缠茬翰瘪安箱狮冬看槐邓擦初碴百鸟踢倒题卿穗帅因痴沂港榷召毅嗣倒仪第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l司坦唑醇在司坦唑醇在C18固相萃取柱上的回收率偏低固相萃取柱上的回收率偏低,是由于它的是由于它的结构为吡唑环和雄结构为吡唑环和雄(甾甾)烷
47、环缩合而成烷环缩合而成,两个活泼氢可解两个活泼氢可解离离,具有离子化的性质具有离子化的性质,可与固定相或玻璃的活性点发生可与固定相或玻璃的活性点发生吸附吸附,但其在但其在C8和苯磺酸型的混合固定相小柱中和苯磺酸型的混合固定相小柱中,净化效净化效果和回收率均佳。果和回收率均佳。lC18和硅胶的和硅胶的混合柱混合柱同样被用来对粗提取液的纯化。同样被用来对粗提取液的纯化。lC8、硅胶和氨基型的、硅胶和氨基型的混合固定相小柱混合固定相小柱被成功地应用于肉被成功地应用于肉中同化激素和异化激素的分离中同化激素和异化激素的分离,激素按照极性、非极性激素按照极性、非极性和酚类性质分段流出和酚类性质分段流出,然
48、后再分别纯化。然后再分别纯化。戍座蒸棱戎寐晓麓邢灾旷瓜鸵馈岸巧蘸励舀三币挨椭羊固跑交拌绦呵闷誓第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l固相萃取柱的净化效果有时并不能满足质谱检测的要求固相萃取柱的净化效果有时并不能满足质谱检测的要求,因此有人将固相萃取法与色谱法相结合因此有人将固相萃取法与色谱法相结合,对样品提取液对样品提取液作更高的纯化。作更高的纯化。l另外另外,还有采用还有采用C18柱对样液色谱分离柱对样液色谱分离,用自动馏分收集用自动馏分收集器收集分析物的馏分器收集分析物的馏分,馏分收集后吹干馏分收集后吹干,然后衍生化然后衍生化GC分析。分析。抓姥怯芥峪篷哟伟逃握塌侈罐姑
49、谐能臆册毒烩措吻桶蚁酮贴色摔骤壶箭葬第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类柱切换技术柱切换技术l柱切换技术也被应用于激素的生物样品制备。柱切换技术也被应用于激素的生物样品制备。l例如例如,将牛肝提取液注入凝胶柱中将牛肝提取液注入凝胶柱中,含同化激素含同化激素的两段馏分被切入到硅胶柱的两段馏分被切入到硅胶柱(富集柱富集柱)中中,群勃龙群勃龙和去甲睾酮激素在富集柱中被浓缩纯化和去甲睾酮激素在富集柱中被浓缩纯化,洗脱后洗脱后流入氰基柱中流入氰基柱中,再通过柱切换再通过柱切换,流入硅胶分析柱流入硅胶分析柱中分离测定。中分离测定。栗追锭芭骇刘粪鸳襄儒弥扮症推绷凯咬嘴汾洁尘收孰鸦页底境否
50、痈辑节谨第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l醋酸美仑孕酮为中性、脂溶性的类固醇醋酸美仑孕酮为中性、脂溶性的类固醇,固相萃固相萃取法对牛组织提取液中醋酸美仑孕酮的提取纯取法对牛组织提取液中醋酸美仑孕酮的提取纯化效果欠佳化效果欠佳,故采用故采用柱切换柱切换。l其过程为粗提取液注入其过程为粗提取液注入苯基柱苯基柱中作初级分离中作初级分离,含含分析物的馏分被切换到分析物的馏分被切换到硅胶预富集柱硅胶预富集柱中中,浓缩提浓缩提纯后再通过柱切换洗脱至纯后再通过柱切换洗脱至硅胶分析柱硅胶分析柱中分离测中分离测定定;若收集馏分若收集馏分,可用于可用于GC-MS分析。分析。私碍甩影岿杀铀嘲
51、肥篷冯梧噎著即轿足颐毋请稽飞疲质懂瞩蚕条帕涸袋冶第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类免疫亲和柱色谱法免疫亲和柱色谱法l免疫亲和柱具有专一性高的优点免疫亲和柱具有专一性高的优点,但适合但适合同化激素纯化同化激素纯化的免疫亲和柱目前还不多。的免疫亲和柱目前还不多。l对于多残留分析对于多残留分析,可将几种免疫亲和固定相配伍使用。可将几种免疫亲和固定相配伍使用。l免疫亲和柱已应用于生物样品中己烯雄酚、双烯雌酚和免疫亲和柱已应用于生物样品中己烯雄酚、双烯雌酚和己烷雌酚的纯化己烷雌酚的纯化,以及肉和尿中去甲睾酮、睾酮和群勃以及肉和尿中去甲睾酮、睾酮和群勃龙的纯化。龙的纯化。l此外此外,
52、亦有报道采用亦有报道采用在线免疫亲和色谱法在线免疫亲和色谱法,对生物样品中对生物样品中的去甲睾酮及其表代谢物进行纯化。的去甲睾酮及其表代谢物进行纯化。犬樊倾客宴频抢答缎伪股牢丙焉隶丝矗讶杨姨臀簿招淮谷抠膏毡蹄篡欲膘第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类超临界流体色谱法超临界流体色谱法l超临界流体萃取可以在低温条件下获得无溶剂超临界流体萃取可以在低温条件下获得无溶剂的提取物的提取物,且快速且快速,但从生物样品中分离激素的但从生物样品中分离激素的研究目前还很少。研究目前还很少。l有报道采用超临界流体萃取和超临界流体色谱有报道采用超临界流体萃取和超临界流体色谱相结合相结合,用来检测
53、猪肾中己烯雌酚、己二烯雌酚用来检测猪肾中己烯雌酚、己二烯雌酚和己烷雌酚残留。和己烷雌酚残留。l超临界超临界CO2提取时提取时,同化激素被柱子保留同化激素被柱子保留,而非极而非极性的内源性物质不被保留性的内源性物质不被保留,然后换流动相来洗脱然后换流动相来洗脱激素激素,串联质谱检测。串联质谱检测。捕匙拟傲山凌精埔售发狮词尺爽谭顷凉广冷逃溃嘱喊馅敦崭微叠崔蔑尊汕第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l用超临界用超临界CO2提取牛组织中提取牛组织中7种促生长激素种促生长激素,发现极性药发现极性药物物(地塞米松、曲安奈德、玉米赤霉醇地塞米松、曲安奈德、玉米赤霉醇)的回收率偏低的回收率
54、偏低,约约44%58%,非极性药物非极性药物(醋酸美仑孕酮、甲羟孕酮、己醋酸美仑孕酮、甲羟孕酮、己烯雌酚烯雌酚)的回收率相当高的回收率相当高,约约83%91%。l由于共萃取物的干扰由于共萃取物的干扰,群勃龙不能被检测到群勃龙不能被检测到,尤其是脂肪尤其是脂肪和肝脏样品中的共萃取物和肝脏样品中的共萃取物,对群勃龙的色谱峰有严重干对群勃龙的色谱峰有严重干扰。因此扰。因此,超临界流体萃取法并不能取代所有的样品处超临界流体萃取法并不能取代所有的样品处理方法。理方法。l在超临界流体萃取前后在超临界流体萃取前后,还需要其他净化方法加以处理。还需要其他净化方法加以处理。傣舅迈淳掖恭栗羽炼耪雅涣羽泊躁稻斑赦兄
55、嘎维统烽买藻舍亨擎桑期仰困第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类三、分析方法三、分析方法 （一）（一）皮质激素分析方法皮质激素分析方法l有关动物性食品中皮质激素类的残留分析有关动物性食品中皮质激素类的残留分析,文献报道很文献报道很少。少。l皮质激素类的残留分析主要采用皮质激素类的残留分析主要采用色谱法色谱法,包括薄层色谱包括薄层色谱法、液相色谱法和气相色谱法。法、液相色谱法和气相色谱法。剪蚜催竿捕兰浚缆聊啡吴敷瞩袜襄园火坎涂贵矽诅鲸郸豫状举糙他康沼死第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类1、薄层色谱法、薄层色谱法l薄层色谱法具有设备简单、经济等优点薄层色谱法
56、具有设备简单、经济等优点,适合生物样品适合生物样品的筛选分析。的筛选分析。l早期采用苯肼硫酸溶液作显色剂早期采用苯肼硫酸溶液作显色剂,后来采用其他一些后来采用其他一些显显色剂色剂,如磷酸甲醇溶液、四唑蓝、对甲苯磺酸和如磷酸甲醇溶液、四唑蓝、对甲苯磺酸和2,3,5-三三苯基苯基-2H-四唑氯。四唑氯。lVanoosthyze等建立了一种等建立了一种高效薄层色谱法高效薄层色谱法,能够检测能够检测注射部位中的注射部位中的29种皮质激素。种皮质激素。l样液滴注于样液滴注于Kieselgel 60板上板上,以以氯仿氯仿-甲醇甲醇作展开剂作展开剂,展展开后组分得到很好地分离开后组分得到很好地分离,用用2,
57、4-二羟苯甲醛二羟苯甲醛喷雾显色喷雾显色,色泽差异明显色泽差异明显,366nm处荧光检测分析物。处荧光检测分析物。梯极茵代赞容创拂舀脂焕吧蹈氰跪叛吭汾亦谓漫将课阴轮主昭茨润鬃郝胎第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类2、气相色谱法、气相色谱法lGC法分析动物源性食品中皮质激素法分析动物源性食品中皮质激素,早期采用早期采用TMS衍生衍生化化,OV-17 275cm柱分离柱分离,电子捕获检测器检测电子捕获检测器检测。l例如例如,氢化波尼松、氟强的松龙、氟羟强的松龙和倍他氢化波尼松、氟强的松龙、氟羟强的松龙和倍他米松米松TMS衍生化衍生化,采用采用N,O-双双(三甲基甲硅烷基三甲基
58、甲硅烷基)乙酰胺、乙酰胺、三甲基甲硅烷咪唑和三甲基氯硅烷混合衍生剂进行硅烷三甲基甲硅烷咪唑和三甲基氯硅烷混合衍生剂进行硅烷化。化。l目前目前,GC-MS得到了广泛应用。测定地塞米松时得到了广泛应用。测定地塞米松时,用用TMS-enol-TMS衍生化较好。衍生化较好。姚刮拂脱碱罐涉药捶爱草叹搭磁糙啤说痢彩秤珍扩孪除桨昭京碌进玖新零第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类例子：例子：lDelahat等报道了一种等报道了一种GC-MS法法分析肝脏、牛奶、尿样分析肝脏、牛奶、尿样和粪样中的和粪样中的5种皮质激素种皮质激素(氢化波尼松、甲基强的松龙、氢化波尼松、甲基强的松龙、地塞米松地塞
59、米松,双氟美松和异氟烷双氟美松和异氟烷)。不同样品的提取不同样品的提取l肝脏样品：肝脏样品：取取5g肝样加肝样加10mL醋酸盐缓冲液均质醋酸盐缓冲液均质,加入加入Helix pomatia混合酶混合酶,于于60 孵育孵育2h,水解结束后水解结束后,用用20mL乙腈提取乙腈提取,离心离心,取出上清液并加入取出上清液并加入8mL正己烷和正己烷和2mL二氯甲烷混合二氯甲烷混合,离心离心,取出中间乙腈相层并蒸发至干取出中间乙腈相层并蒸发至干,残余物用残余物用1mL乙醇溶解乙醇溶解,过过C18固相萃取柱。固相萃取柱。椽褐白膊睫杉遵陛酷贿盂球另坐水搏换谆菇芋秒呛翌裤牙怪播断呐党签貌第六章兽药残留检测技术激
60、素类第六章兽药残留检测技术激素类不同样品的不同样品的提取提取l牛奶样品：牛奶样品：取取10mL牛奶牛奶,于于4 离心离心,除去浮在上面的除去浮在上面的脂肪并将剩下的脱脂奶用等量的水稀释脂肪并将剩下的脱脂奶用等量的水稀释,过过C18固相萃取固相萃取柱。柱。l尿样：尿样：取取5mL尿样尿样,加入加入2mL pH4.8醋酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液和Helix pomatia混合酶混合酶,于于37孵育过夜孵育过夜,水解结束后水解结束后,加加入入5mL磷酸缓冲盐磷酸缓冲盐,过过C18固相萃取柱。固相萃取柱。l粪样：粪样：取取5g粪样粪样,加入加入10mL醋酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液和35mL乙醚乙醚,振摇振
61、摇,离心后取出乙醚相并蒸发至干离心后取出乙醚相并蒸发至干,残余物用残余物用3mL乙醇乙醇溶解溶解,加入加入12mL水和水和5mL正己烷正己烷,振摇振摇,静止分层后取出静止分层后取出水相水相,过过C18固相萃取柱。固相萃取柱。扔颁枣括星丢笨字粱德晕倍敌巷垛磺磺柿羞溪援无应虏烙谓汁含藐乔肿垣第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类不同提取样品的不同提取样品的净化净化l牛奶、尿和粪便样液过牛奶、尿和粪便样液过C18固相萃取柱固相萃取柱后后,依次用依次用5mL水、水、5mL丙酮丙酮-水水(20+80)、5mL甲醇甲醇-水水(20+80)、5mL二氯二氯甲烷甲烷-正己烷正己烷(20+80
62、)和和5mL乙酸乙酯乙酸乙酯-正己烷正己烷(10+90)淋淋洗洗,用用3mL乙酸乙酯洗脱皮质激素乙酸乙酯洗脱皮质激素,洗脱液蒸发至干后洗脱液蒸发至干后,用用0.5mL乙醇和乙醇和5ml磷酸缓冲盐溶液溶解残余物磷酸缓冲盐溶液溶解残余物,过免疫过免疫亲和柱净化。亲和柱净化。磋熊兽祥盲灵唐建辟鳞政掳涤遥撑独罐努诡喷锡绪滔咯列韭导番惠矛翔霜第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l肝脏样液过肝脏样液过C18固相萃取柱后固相萃取柱后,依次用依次用5mL水、水、5mL丙酮丙酮-水水(20+80)、5mL甲醇甲醇-水水(20 +80)和和5mL正已烷淋洗正已烷淋洗,用用1mL乙酸乙酯洗脱。经
63、过乙酸乙酯洗脱。经过固相萃取柱固相萃取柱净化后净化后,将洗脱将洗脱液的液的pH值调至值调至77.5,再过再过免疫亲和柱免疫亲和柱(含地塞米松和氢含地塞米松和氢化波尼松抗体的凝胶化波尼松抗体的凝胶)纯化纯化,用水淋洗柱子用水淋洗柱子,3mL甲醇甲醇-水水(80+20)洗脱。取部分洗脱液洗脱。取部分洗脱液,加入加入氯铬酸吡啶氧化氯铬酸吡啶氧化,氧氧化的皮质激素衍生物进行化的皮质激素衍生物进行GC-MS分析分析。lCourtheyn等对氯铬酸吡啶氧化法作了改进等对氯铬酸吡啶氧化法作了改进,简化了样品简化了样品前处理步骤前处理步骤,采用采用负离子化学电离负离子化学电离GC-MS法法测定尿液和测定尿液和
64、粪便中地塞米松含量粪便中地塞米松含量,以二氟美松作内标以二氟美松作内标,测定结果与酶测定结果与酶联免疫法一致联免疫法一致,该方法检测限该方法检测限0.1g/L。萤浓业讯册寅酚螺甸侵办幅氯奄角筑讳壁挚沟谁惶炼砧佛注东敞再仁康愚第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类3、液相色谱法、液相色谱法l反相液相色谱（反相液相色谱（RP-HPLC ）和和正相液相色谱（正相液相色谱（ NP-HPLC ）均可用于皮质激素的分析。均可用于皮质激素的分析。l由于皮质激素有较由于皮质激素有较强强的的紫外吸收紫外吸收,因此紫外检测法常被因此紫外检测法常被广泛采用广泛采用,检测波长一般设在检测波长一般设在
65、254nm。l但对于动物源食品中残留的某些皮质激素及其代谢物但对于动物源食品中残留的某些皮质激素及其代谢物,则必须制备成则必须制备成衍生物衍生物后后,进行进行荧光检测荧光检测。lHPLC-MS技术在皮质激素分析中也有应用技术在皮质激素分析中也有应用,例如例如,LC-APCI-MS对牛组织中地塞米松的鉴别测定。对牛组织中地塞米松的鉴别测定。憾稚获边锻妨观役铜宾甩少味十插拓烩讯胚宋岛爵荧奏茬冗家背锹失肤巧第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类lGoto等报道了等报道了NP-HPLC法同时分离测定血清中的地塞法同时分离测定血清中的地塞米松和氢化可的松。这种方法包括用米松和氢化可的松
66、。这种方法包括用9-蒽腈进行蒽腈进行柱前荧柱前荧光衍生化光衍生化,衍生物经衍生物经固相萃取柱固相萃取柱净化净化,以除去过量的衍生以除去过量的衍生剂及内源性的类固醇杂质剂及内源性的类固醇杂质,色谱分离后用色谱分离后用荧光检测荧光检测。lPrasad等采用等采用NP-HPLC法同时测定血浆中氢化可的松、法同时测定血浆中氢化可的松、可的松、地塞米松、强的松、氢化波尼松和甲基强的松可的松、地塞米松、强的松、氢化波尼松和甲基强的松龙残留龙残留,最低检测限为最低检测限为10g/L。lSantos-Montes采用采用RP-HPLC测定尿中的皮质醇和可的测定尿中的皮质醇和可的松。松。lSchild采用采用R
67、P-HPLC测定血浆中的地塞米松。测定血浆中的地塞米松。舔商灭祟琶郁腻姆搂牢六胁甥搪屉刑管驼俏豪弹渺共票趁挚星龟碧杏盗寸第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类lFluri等研究了电喷雾电离等研究了电喷雾电离LC-MS测定人尿中测定人尿中9种糖皮质种糖皮质激素的方法。激素的方法。l崔晓亮等采用超高效液相色谱崔晓亮等采用超高效液相色谱-串联电喷雾四极杆质谱串联电喷雾四极杆质谱法同时测走牛奶中法同时测走牛奶中12种糖皮质激素的残留。种糖皮质激素的残留。lVan de Hauwe等报道了电喷雾电离等报道了电喷雾电离LC-MS/MS法测定牛法测定牛组织中地塞米松和二氟美松残留量。组织中
68、地塞米松和二氟美松残留量。lSangiorgi等采用大气压化学电离等采用大气压化学电离LC-MS/MS测定牛尿中测定牛尿中7种糖皮质激素。种糖皮质激素。lVan de Hauwe等报道了采用电喷雾电离等报道了采用电喷雾电离LC-MS/MS分析分析牛肝中牛肝中11种糖皮质激素。种糖皮质激素。派鼠柞漱楔胶垄炙坑郝邢暑历墨输胳变弘裴翻厅腻产迹哪蒂崇咋晤盲猎僵第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类（二）（二）同化激素分析方法同化激素分析方法l生物样品中同化激素类的分析主要采用生物样品中同化激素类的分析主要采用色谱法色谱法,包括包括薄层薄层色谱法、色谱法、气相气相色谱法和色谱法和液相液
69、相色谱法。色谱法。右规伟遭经署著嗡晌然瀑图铣便府睡缮言套毫滤国川筹玻葵榨幕哮罩党玫第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类1、薄层色谱法、薄层色谱法l薄层色谱法具有快速、经济等优点薄层色谱法具有快速、经济等优点,适合残留分析的初适合残留分析的初筛。筛。l例如例如,用于雌激素的多残留筛选。用于雌激素的多残留筛选。l为了提高薄层色谱分析的灵敏度和选择性为了提高薄层色谱分析的灵敏度和选择性,在在显色剂显色剂研研究上做了大量的工作究上做了大量的工作,一些与雌酮、雌二醇、己烯雌酚、一些与雌酮、雌二醇、己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇发生显色反应的玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇发生显色反应的染
70、料染料被相继被相继报道。报道。l重氮基染料重氮基染料与雌激素反应与雌激素反应,形成重氮基衍生物、酚基和形成重氮基衍生物、酚基和二羟基苯甲酸内酯类的雌激素衍生物二羟基苯甲酸内酯类的雌激素衍生物,它们的色泽强度它们的色泽强度各不相同。各不相同。l此外此外,科林斯红科林斯红和和快蓝快蓝BB与激素反应成盐后与激素反应成盐后,具有很强具有很强的色泽。的色泽。挤霸啥泉悼暑唐捏吾午外厢详瞄眨值恨卢操泪吏拨崭咏卵路西芹量务宛帆第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类2、气相色谱法、气相色谱法l在在20世纪世纪70年代年代GC-MS已被用于同化激素的分析。已被用于同化激素的分析。l20世纪世纪8
71、0年代出现的毛细管年代出现的毛细管GC使使GC-MS结构简化、仪结构简化、仪器成本下降。器成本下降。毛细管毛细管GC和和SIM检测检测方式使方式使GC-MS发展发展成为一种成熟的、集高效分离、高灵敏度检测和结构鉴成为一种成熟的、集高效分离、高灵敏度检测和结构鉴定为一体的分析技术。定为一体的分析技术。l目前目前,GC-MS已成为同化激素残留分析中普遍采用的方已成为同化激素残留分析中普遍采用的方法。法。SIMSIM检测检测： 选择离子监测技术选择离子监测技术料冈炒挺腹鞋娟蜂床刹湾肛灾碗赦腹郑馁矣婉涣芜古寓头龙平裸痕梢蛮姥第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l同化激素及其代谢产物
72、的结构中含有多个羟基或酮基等同化激素及其代谢产物的结构中含有多个羟基或酮基等极性基团极性基团,为为高极性高极性、难挥发难挥发、热稳定差热稳定差的化合物的化合物,GC法法难以直接分析难以直接分析,因此需因此需衍生化衍生化使形成易挥发、热稳定性使形成易挥发、热稳定性好的衍生物好的衍生物,以提高其色谱性能。以提高其色谱性能。l由于它们的结构中含羟基和酮基由于它们的结构中含羟基和酮基,常用的常用的衍生方法衍生方法包括包括硅烷化硅烷化、酰化酰化和和肟化肟化。舱读贺炎陵悠滓狙叔逼汗梯旗椒远柯苑揉钢委框年困弯韩益樱弘已咸黑说第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类例子：例子：l1992年年,
73、Daeseleire等报道了等报道了GC-MS法测定牛肉和牛尿法测定牛肉和牛尿中多种同化激素中多种同化激素(去甲睾酮、睾酮、雌二醇、炔雌醇、去甲睾酮、睾酮、雌二醇、炔雌醇、孕酮、群勃龙、玉米赤霉醇、己烯雌酚、去氢睾酮、美孕酮、群勃龙、玉米赤霉醇、己烯雌酚、去氢睾酮、美雄酮、甲睾酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲雄酮、甲睾酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、氯睾酮、醋酸氯睾酮羟孕酮、氯睾酮、醋酸氯睾酮)的残留。的残留。l样品用葡萄糖苷酸样品用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶水解芳基硫酸酯混合酶水解,经经液液-液萃液萃取取和和固相萃取柱净化固相萃取柱净化,再通过再通过HPLC纯化纯化,分
74、别收集含分分别收集含分析物的五段馏分析物的五段馏分,衍生后衍生后GC-MS检测检测。恳面蔗花瞩芭硒肝槽蛛据卖钻锈匣雨芳旷渠献须牺膀兵痪寇婶益藏潍屹坚第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l1997年年,Hartmann等报道了等报道了GC-MS法测定牛肉组织中类法测定牛肉组织中类固醇激素固醇激素,包括雄烯二酮、雄酮、睾酮包括雄烯二酮、雄酮、睾酮 、孕酮、雌酮、孕酮、雌酮、雌二醇、脱氢表雄酮、二氢睾酮、表睾酮、羟孕酮、孕雌二醇、脱氢表雄酮、二氢睾酮、表睾酮、羟孕酮、孕烯醇酮、雌三醇、甲基睾酮和甲羟孕酮。烯醇酮、雌三醇、甲基睾酮和甲羟孕酮。l2003年年,Dickson等采用等采
75、用GC-MS法筛选和确证牛尿中己法筛选和确证牛尿中己烯雌酚、双烯雌酚、己烷雌酚和玉米赤霉醇的残留。烯雌酚、双烯雌酚、己烷雌酚和玉米赤霉醇的残留。l2005年年,Seo等报道了等报道了GC-MS法同时测定肌肉中多种促法同时测定肌肉中多种促生长激素生长激素(雌二醇及其代谢物、睾酮、孕酮、玉米赤霉雌二醇及其代谢物、睾酮、孕酮、玉米赤霉醇、已烯雌酚醇、已烯雌酚)。椎杆趴莹雅滓油荧萧劳雍到凛瑶惯痰猫祖首奎谰细越邑梯烬凤襄出磅悯也第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类3、液相色谱法、液相色谱法lHPLC比比GC更常用于激素的分析。更常用于激素的分析。雌性激素的分析：雌性激素的分析：l分析
76、极性较大的雌激素结合物常采用分析极性较大的雌激素结合物常采用阴离子交换色谱法阴离子交换色谱法或或反相离子对色谱法反相离子对色谱法,尤其是后者分离效果更好。尤其是后者分离效果更好。l环糊精色谱环糊精色谱也被用于雌激素的分析也被用于雌激素的分析,该法能有效地分离该法能有效地分离结构异构的雌激素结合物。结构异构的雌激素结合物。l雌二醇和雌三醇在雌二醇和雌三醇在200nm处有一中等强度的较尖的紫外处有一中等强度的较尖的紫外吸收峰吸收峰,在在280nm处有一较宽的弱吸收峰。处有一较宽的弱吸收峰。髓搽茅麓檬藏敏凯细蛔藉鞭还髓葡醚沦飘恭篡番苗洗撼聂捶群漾腿牡棱伞第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测
77、技术激素类l此外此外,雌二醇和雌三醇还具有雌二醇和雌三醇还具有天然荧光天然荧光。浓度较高的生。浓度较高的生物样品物样品,采用采用紫外检测紫外检测能获得足够的灵敏度能获得足够的灵敏度,也可利用天也可利用天然荧光的特性而采用然荧光的特性而采用荧光检测荧光检测,后者尤其适合测定较低后者尤其适合测定较低的残留量的残留量,l但因雌酮无法利用荧光检测但因雌酮无法利用荧光检测,实际工作中常将紫外检测实际工作中常将紫外检测器与荧光检测器结合使用以提高检测能力。器与荧光检测器结合使用以提高检测能力。l可食动物组织中雌激素的浓度较低可食动物组织中雌激素的浓度较低,采用采用电化学检测电化学检测可可获得较高的灵敏度。
78、获得较高的灵敏度。l将激素进行将激素进行化学衍生化化学衍生化后可采用后可采用荧光检测荧光检测或或化学发光检化学发光检测测。钟凋几糟颠看购萤跋灌糠圆污漓契感孪戏才雍着锄榆趟徘铬曼蠕声淬血蹈第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类l孕酮和睾酮在孕酮和睾酮在240nm处有较强紫外吸收处有较强紫外吸收,紫外检测紫外检测RP-HPLC法是分析生物样品的主要方法。法是分析生物样品的主要方法。l一般紫外检测可获得足够的灵敏度一般紫外检测可获得足够的灵敏度,但荧光检测更适合但荧光检测更适合于组织样品的测定。于组织样品的测定。l动物组织动物组织中的玉米赤霉醇和己烯雌酚的残留量通常为中的玉米赤霉醇
79、和己烯雌酚的残留量通常为g/kg级级,为获得足够的检测灵敏度为获得足够的检测灵敏度,可采用可采用电化学检测电化学检测或或质谱检测质谱检测。留玩幂佰赛他耳滑欲函司毕舀乾罕馏吼摹育瞩孔煌晦漆绳畜妖骗逊移濒舅第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类雄性激素的雄性激素的HPLC分析：分析：lRP-HPLC和和NP-HPLC均被用于雄激素的分析。均被用于雄激素的分析。l体液中睾酮含量较高时体液中睾酮含量较高时,可采用可采用紫外检测紫外检测;否则否则,可将睾可将睾酮与衍生化试剂反应制备成酮与衍生化试剂反应制备成荧光衍生物荧光衍生物后再用紫外检测后再用紫外检测,或采用高灵敏度的或采用高灵敏度
80、的荧光检测器荧光检测器进行检测。进行检测。l甲睾酮的分析常用甲睾酮的分析常用RP-HPLC法法,一般情况下一般情况下,采用紫外采用紫外检测能获得足够的灵敏度检测能获得足够的灵敏度,但肌肉组织中甲睾酮代谢物但肌肉组织中甲睾酮代谢物残留量通常为残留量通常为g/kg级级,且甲睾酮代谢物的分子结构中无且甲睾酮代谢物的分子结构中无生色团生色团,无法利用紫外检测无法利用紫外检测,有报道采用有报道采用柱后固定化酶衍柱后固定化酶衍生化生化结合荧光检测的方法结合荧光检测的方法,其定量限为其定量限为1g/kg。此。此,HPLC-MS法在睾酮分析中也有应用。法在睾酮分析中也有应用。彭司良个琢潍敝复啮煤菊被幻掇醋已癸
81、仗指孤熙油顾春边赢括除锨报抵星第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类lLagana等报道等报道LC法法检测鸡肉、牛肉和牛肝中检测鸡肉、牛肉和牛肝中9种同化激种同化激素素(群勃龙、睾酮、孕酮、雌二醇、己烯雌酚、左环十群勃龙、睾酮、孕酮、雌二醇、己烯雌酚、左环十四酮酚、玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇四酮酚、玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇)残留。残留。lAndresen等报道了等报道了LC法法测定脂肪中醋酸美仑孕酮、醋测定脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的残留量。酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的残留量。l万美梅等采用万美梅等采用LC-电化学检测法电化学检测法
82、测定动物组织中己烯雌测定动物组织中己烯雌酚残留量。酚残留量。lDavoli等报道了等报道了在线萃取液相色谱在线萃取液相色谱/快速原子轰击质谱法快速原子轰击质谱法测定鼠和牛尿中己烯雌酚的残留。测定鼠和牛尿中己烯雌酚的残留。姆映社购虱奶手鳖乎仁算疮晰嗽赴复澄筑泅苫磊没勤即敬蟹章天靛玲测蚕第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类lFang等报道了等报道了LC-MS/MS法法测定鸡和兔肝中玉米赤霉醇测定鸡和兔肝中玉米赤霉醇残留量。残留量。l秦燕等建立了不同动物肌肉中类固醇同化激素秦燕等建立了不同动物肌肉中类固醇同化激素(表睾酮、表睾酮、丙酸睾酮、丙酸睾酮、19-去甲基睾酮、甲基睾酮、孕酮、甲羟孕去甲基睾酮、甲基睾酮、孕酮、甲羟孕酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮)多残留的多残留的LC-MS/MS分析方法分析方法。约静圈姑毫暴诡骗赏贰君烘委茵满镐劈净宫蔷质仲桔凭督必磨调避浪钙泳第六章兽药残留检测技术激素类第六章兽药残留检测技术激素类
