《10.07.12高三生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》由会员分享，可在线阅读，更多相关《10.07.12高三生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（80页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数两个主要目的专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数两个主要目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数两个主要目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌尿素:CO（NH2）2 专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数两个主要目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中究竟
2、含有多少这样的细菌CO（NH2）2 + H2OCO2+2NH3脲酶一 研究思路（一）筛选菌株一 研究思路（一）筛选菌株耐高温的DNA聚合酶一 研究思路（一）筛选菌株耐高温的DNA聚合酶美国微生物学家布鲁克1966年发现水生耐热细菌Taq 分离到耐高温的Taq DNA聚合酶一 研究思路（一）筛选菌株自然界筛选：一 研究思路（一）筛选菌株自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。一 研究思路（一）筛选菌株自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。实验室筛选：一 研究思路（一）筛选菌株自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。实验室筛选：人为提供有利于
3、目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。一 研究思路（一）筛选菌株选择培养基：一 研究思路（一）筛选菌株选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。 一 研究思路（二）统计菌落数目一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：先将待测样品制成悬
4、液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数优点：一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：一 研究思路（二）统计菌落数目1.显微镜直接计数：先将
5、待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌。一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 应用：一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 应用： 统计样品中活菌的数目一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 应用： 统计样品中活菌的数目原理：一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 应用： 统计样品中活菌的数目原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表
6、面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 应用： 统计样品中活菌的数目原理：注意：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。一 研究思路（二）统计菌落数目2.稀释涂布平板计数法: 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重
7、复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另 2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。一 研究思路（三）设置对照一 研究思路（三）设置对照增强实验的说服力和准确性。一 研究思路（三）设置对照增强实验的说服力和准确性。将待测样品经过一系列的稀释，然后选择三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。一 研究思路（三）设置对照增强实验的说服力和准确性。将待测样品经过一系列的稀释，然后选择三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。注意：为了结果接近真实值，可将同一稀释度菌液涂布到3
8、个或3个以上的平板上，经培养，计算出菌落的平均数。一 研究思路（三）设置对照判断培养基中是否有杂菌污染：一 研究思路（三）设置对照判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。一 研究思路（三）设置对照判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基是否具有筛选作用：一 研究思路（三）设置对照判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基是否具有筛选作用：对照培养基接种后培养观察菌落数目。二 实验设计二 实验设计1. 实验设计的内容包括：二 实验设计1. 实验设计的内容包括：实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。二 实验设计2.
9、 实验流程：土壤取样样品系列稀释涂布平板与培养观察并记录结果 菌落计数二 实验设计2. 实验流程：（1）土壤取样二 实验设计2. 实验流程：（1）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。二 实验设计2. 实验流程：（1）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。（2）样品的稀释二 实验设计2. 实验流程：（1）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。（2）样品的稀释因为不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30
10、300之间。不同。某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 B B某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2
11、.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 B B计算公式：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 B B计算公式：每克样品中的菌株数 =（CV）M二 实验设计2. 实验流程：（3）微生物的培养与观察二 实验设计2. 实验流程：（3）微生物的培养与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。二 实验设计2. 实验流程：（3）微生物的培养与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。每个
12、培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml。二 实验设计2. 实验流程：（3）微生物的培养与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml。用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释液各0. 1ml，转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。二 实验设计2. 实验流程：（3）微生物的培养与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml。用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释液各0. 1ml，转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。冷却倒置放入3037摄氏度的恒温培养箱中培养。观察纪录。三
13、 操作提示三 操作提示1. 无菌操作2. 做好标记3. 规划时间四 操作提示三 操作提示1. 无菌操作2. 做好标记3. 规划时间四 结果分析与评价五 课题延伸五 课题延伸1.对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生2.物化学的方法。五 课题延伸1.对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生2.物化学的方法。2. 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨 。氨会使培养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。五 课题延伸1.对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生2.物化学的方法。2. 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿
14、素分解成了氨 。氨会使培养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。3. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红 ，说明该细菌能够分解尿素。练习1. 用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比A. 比实际值高B. 比实际值低C. 和实际值一致D. 比实际值可能高也可能低1. 用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比A. 比实际值高B. 比实际值低C. 和实际值一致D. 比实际值可能高也可能低2 2. . 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的
15、培养基是 A. A. KHKH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、葡萄糖、尿素、琼脂、水葡萄糖、尿素、琼脂、水B. KHB. KH2 2PO4PO4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、葡萄糖、琼脂、水葡萄糖、琼脂、水C. KHC. KH2 2POPO4 4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、尿素、琼脂、水尿素、琼脂、水D. KHD. KH2 2PO4PO4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O
16、、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水2 2. . 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 A. A. KHKH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、葡萄糖、尿素、琼脂、水葡萄糖、尿素、琼脂、水B. KHB. KH2 2PO4PO4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、葡萄糖、琼脂、水葡萄糖、琼脂、水C. KHC. KH2 2POPO4 4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、尿素、琼脂、水尿素、
17、琼脂、水D. KHD. KH2 2PO4PO4、N Na a2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基
18、。培养基。3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基。培养基。4 43.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1
19、)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基。培养基。4 4葡萄糖葡萄糖3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)
20、(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基。培养基。尿素尿素4 4葡萄糖葡萄糖3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基。培养基。尿素尿素4
21、4葡萄糖葡萄糖固体固体3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方请根据以上配方，回答下列问题：请根据以上配方，回答下列问题：(1)(1)该培养基含有微生物所需要的该培养基含有微生物所需要的_类营类营养物质。其中最主要的碳源是养物质。其中最主要的碳源是_，氮源，氮源是是_。(2)(2)该培养基按物理性质划分是该培养基按物理性质划分是_培养培养基；按培养基的作用划分是基；按培养基的作用划分是_培养基。培养基。4 4葡萄糖葡萄糖尿素尿素固体固体选择选择3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(3)(3)该培
22、养基具有选择作用的原因是该培养基具有选择作用的原因是 。3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(3)(3)该培养基具有选择作用的原因是该培养基具有选择作用的原因是 。该培养基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解该培养基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(4)(4)该培养基中，可通过检测该培养基中，可通过检测pHpH的变化来判断尿素的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是是否被分解，依据的原
23、理是 。3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(4)(4)该培养基中，可通过检测该培养基中，可通过检测pHpH的变化来判断尿素的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是是否被分解，依据的原理是 。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pHpH升高升高3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(5)(5)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解尿素
24、，可在培养基中加入尿素，可在培养基中加入_指示剂，尿素指示剂，尿素被分解后指示剂变被分解后指示剂变_色。色。3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(5)(5)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解尿素，可在培养基中加入尿素，可在培养基中加入_指示剂，尿素指示剂，尿素被分解后指示剂变被分解后指示剂变_色。色。酚红酚红3.3.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方(5)(5)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解若用该培养基来鉴定某种细菌是否能分解尿素，可在培养基中加入尿素，可在培养基中加入_指示剂，尿素指示剂，尿素被分解后指示剂变被分解后指示剂变_色。色。酚红酚红红红
