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1、中药指纹图谱的测定04年省药分学术会Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望 一、测定中药指纹图谱的意义一、测定中药指纹图谱的意义 中药指纹图谱的定义中药指纹图谱的定义: 中药指纹图谱（中药指纹图谱（Fingerprint）是经光谱、）是经光谱、色谱或其他方法测定得到的中药组分群的特征色谱或其他方法测定得到的中药组分群的特征图谱，带有综合、宏观、图谱，带有综合、宏观、“模糊模糊”的非线性特的非线性特征，具有完整性和唯一性，是评价中药质量的征，具有完整性和唯一性，是评价中药质量
2、的重要手段之一。重要手段之一。 测定中药指纹图谱的意义：测定中药指纹图谱的意义： 1. 对保证用药的安全、有效，保证药品质对保证用药的安全、有效，保证药品质量的稳定具有意义。量的稳定具有意义。 2. 有利于中药作用机理的进一步深入研究。有利于中药作用机理的进一步深入研究。 3. 可以促进中药工业现代化，中药农业现可以促进中药工业现代化，中药农业现代化。代化。 4. 可以促进中药走向世界。可以促进中药走向世界。 二二. . 检测方法检测方法 （一）色谱法（一）色谱法（一）色谱法（一）色谱法 1. 1. 薄层色谱法（薄层色谱法（薄层色谱法（薄层色谱法（TLCTLC） 薄层色谱法分离效能高，操作简便
3、，图像直观、形象，薄层色谱法分离效能高，操作简便，图像直观、形象，薄层色谱法分离效能高，操作简便，图像直观、形象，薄层色谱法分离效能高，操作简便，图像直观、形象，有多种显色剂供选择使用，可以作多样品的平行分析，使有多种显色剂供选择使用，可以作多样品的平行分析，使有多种显色剂供选择使用，可以作多样品的平行分析，使有多种显色剂供选择使用，可以作多样品的平行分析，使用薄层扫描法可以得到定量的薄层指纹图谱。用薄层扫描法可以得到定量的薄层指纹图谱。用薄层扫描法可以得到定量的薄层指纹图谱。用薄层扫描法可以得到定量的薄层指纹图谱。 需使用标准的材料和条件，才能得到高质量的、可重需使用标准的材料和条件，才能得
4、到高质量的、可重需使用标准的材料和条件，才能得到高质量的、可重需使用标准的材料和条件，才能得到高质量的、可重复的结果。复的结果。复的结果。复的结果。 薄层色谱法多用于无紫外吸收，不能用薄层色谱法多用于无紫外吸收，不能用薄层色谱法多用于无紫外吸收，不能用薄层色谱法多用于无紫外吸收，不能用HPLCHPLC测定的测定的测定的测定的样品，也可以作为样品，也可以作为样品，也可以作为样品，也可以作为HPLCHPLC的补充和佐证。的补充和佐证。的补充和佐证。的补充和佐证。 二二. . 检测方法检测方法 2. 2. 高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC) 高效液相色谱
5、法分离效能高，重复性好，准确性高，高效液相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，高效液相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，高效液相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，适用范围广，是指纹图谱测定应用最多的方法。适用范围广，是指纹图谱测定应用最多的方法。适用范围广，是指纹图谱测定应用最多的方法。适用范围广，是指纹图谱测定应用最多的方法。 使用的检测器有：紫外检测器，蒸发光散射检测器，使用的检测器有：紫外检测器，蒸发光散射检测器，使用的检测器有：紫外检测器，蒸发光散射检测器，使用的检测器有：紫外检测器，蒸发光散射检测器，示差折光检测器，质谱（示差折光检测器，质谱（示差折光检测器，质谱（示差折光
6、检测器，质谱（LC-MSLC-MS）等。）等。）等。）等。 多用反相色谱，也可以使用吸附色谱。如组分保留时多用反相色谱，也可以使用吸附色谱。如组分保留时多用反相色谱，也可以使用吸附色谱。如组分保留时多用反相色谱，也可以使用吸附色谱。如组分保留时间的差别很大，可以使用梯度洗脱。间的差别很大，可以使用梯度洗脱。间的差别很大，可以使用梯度洗脱。间的差别很大，可以使用梯度洗脱。 二二. . 检测方法检测方法 3. 气相色谱法气相色谱法 (GC) 气相色谱法分离效能高，重复性好，准气相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，有通用型的检测器。主要用于挥发性确性高，有通用型的检测器。主要用于挥发性样品的测定
7、。样品的测定。二二. . 检测方法检测方法 4. 毛细管电泳毛细管电泳(HPCE) 毛细管电泳分离效能高，灵敏度高，对样毛细管电泳分离效能高，灵敏度高，对样品预处理的要求不太高。主要用于带电荷组分品预处理的要求不太高。主要用于带电荷组分的分离，特别是大分子物质的分离，如蛋白质、的分离，特别是大分子物质的分离，如蛋白质、多肽、核酸等。也可以用于小分子的或一般有多肽、核酸等。也可以用于小分子的或一般有机组分的分离。机组分的分离。二二. . 检测方法检测方法 （二）光谱法（二）光谱法 1. 紫外分光光度法紫外分光光度法 是分子的电子光谱，是分子的电子光谱，反映生色团的特征吸收，不能反映组分整体反映生
8、色团的特征吸收，不能反映组分整体的情况。紫外光谱的形状简单，易重叠，鉴的情况。紫外光谱的形状简单，易重叠，鉴别意义不大。别意义不大。 二二. . 检测方法检测方法 2. 红外光谱法（红外光谱法（IR） 是分子的振动是分子的振动转转动光谱，结构的信息量较紫外光谱大，但对动光谱，结构的信息量较紫外光谱大，但对多成分的混合物，难以确定归属。多成分的混合物，难以确定归属。 二二. . 检测方法检测方法 3. 核磁共振光谱核磁共振光谱(NMR) 核磁共振光谱核磁共振光谱的专属性强，信息量大，可以定量，是一种的专属性强，信息量大，可以定量，是一种有前途的指纹图谱的测定方法。有前途的指纹图谱的测定方法。 三
9、三. . 色谱指纹图谱研究的技术色谱指纹图谱研究的技术要求要求 （一）供试品的收集（一）供试品的收集 以承认传统的功能主治和长期临床验证以承认传统的功能主治和长期临床验证结果为前提，使用的标准样品应为经长期临结果为前提，使用的标准样品应为经长期临床使用证明是安全、有效的样品。床使用证明是安全、有效的样品。 要收集有代表性的供试品，至少要收集有代表性的供试品，至少10批批。（一）供试品的收集 1. 原料药材原料药材 应有稳定和固定的来源，要进行基原鉴定，应有稳定和固定的来源，要进行基原鉴定，并经检验符合中国药典或国家药品质量标准。并经检验符合中国药典或国家药品质量标准。 药材的药材的“批批”是指
10、相互独立的供试品。应是指相互独立的供试品。应有完整的采样原始记录。有完整的采样原始记录。（一）供试品的收集 2. 半成品（提取物）半成品（提取物） 用符合要求的药材为原材料，用规范的用符合要求的药材为原材料，用规范的工艺生产的半成品。应有完整的制备和相关工艺生产的半成品。应有完整的制备和相关信息的记录。信息的记录。 （一）供试品的收集 3. 成品成品 用符合要求的半成品和规范的工用符合要求的半成品和规范的工艺生产的产品。应有完整的制备和相关信息艺生产的产品。应有完整的制备和相关信息的记录。的记录。 （二）参照物 参照物：是指纹图谱测定用的参照物质。主要用参照物：是指纹图谱测定用的参照物质。主要
11、用参照物：是指纹图谱测定用的参照物质。主要用参照物：是指纹图谱测定用的参照物质。主要用于色谱峰的辨认，考察指纹图谱的稳定程度和重现性。于色谱峰的辨认，考察指纹图谱的稳定程度和重现性。于色谱峰的辨认，考察指纹图谱的稳定程度和重现性。于色谱峰的辨认，考察指纹图谱的稳定程度和重现性。 参照物一般选择容易获得的主要活性成分或指标参照物一般选择容易获得的主要活性成分或指标参照物一般选择容易获得的主要活性成分或指标参照物一般选择容易获得的主要活性成分或指标成分，成分，成分，成分，一个或一个以上一个或一个以上一个或一个以上一个或一个以上。如无参照物也可以用指纹图如无参照物也可以用指纹图如无参照物也可以用指纹
12、图如无参照物也可以用指纹图谱中稳定的色谱峰作为参照峰谱中稳定的色谱峰作为参照峰谱中稳定的色谱峰作为参照峰谱中稳定的色谱峰作为参照峰。 参照物应有明确的化学结构、名称以及质量考察参照物应有明确的化学结构、名称以及质量考察参照物应有明确的化学结构、名称以及质量考察参照物应有明确的化学结构、名称以及质量考察的指标。的指标。的指标。的指标。 （三）测定方法（三）测定方法 1. HPLC1. HPLC 色谱条件的选择：首选反相色谱条件的选择：首选反相色谱条件的选择：首选反相色谱条件的选择：首选反相HPLCHPLC。色谱柱：。色谱柱：。色谱柱：。色谱柱：比较不同类型、不同牌号的色谱柱，选出适合的色比较不同
13、类型、不同牌号的色谱柱，选出适合的色比较不同类型、不同牌号的色谱柱，选出适合的色比较不同类型、不同牌号的色谱柱，选出适合的色谱柱，确定色谱柱的来源与规格。应考虑使用多数谱柱，确定色谱柱的来源与规格。应考虑使用多数谱柱，确定色谱柱的来源与规格。应考虑使用多数谱柱，确定色谱柱的来源与规格。应考虑使用多数实验普遍使用的色谱柱。实验普遍使用的色谱柱。实验普遍使用的色谱柱。实验普遍使用的色谱柱。 流动相：流动相：流动相：流动相：至少用三种不同组成的流动相进行比至少用三种不同组成的流动相进行比至少用三种不同组成的流动相进行比至少用三种不同组成的流动相进行比较，选出最适合的流动相较，选出最适合的流动相较，选
14、出最适合的流动相较，选出最适合的流动相。如需要使用梯度洗脱，。如需要使用梯度洗脱，。如需要使用梯度洗脱，。如需要使用梯度洗脱，应尽量采用线性梯度，并报告滞后时间。应尽量采用线性梯度，并报告滞后时间。应尽量采用线性梯度，并报告滞后时间。应尽量采用线性梯度，并报告滞后时间。 （三）测定方法（三）测定方法 测定波长的选择：既要满足主要有效成分测定波长的选择：既要满足主要有效成分的检测，也要考虑尽可能多地检出药物中的的检测，也要考虑尽可能多地检出药物中的组分。通过组分。通过比较不同波长的检测结果，选出比较不同波长的检测结果，选出合适的检测波长。合适的检测波长。（三）测定方法（三）测定方法 2. TLC
15、2. TLC 薄层板：多使用硅胶薄层板，聚酰胺膜薄层板或薄层板：多使用硅胶薄层板，聚酰胺膜薄层板或薄层板：多使用硅胶薄层板，聚酰胺膜薄层板或薄层板：多使用硅胶薄层板，聚酰胺膜薄层板或纤维素薄层板。正式测定时，应使用有质量保证的商纤维素薄层板。正式测定时，应使用有质量保证的商纤维素薄层板。正式测定时，应使用有质量保证的商纤维素薄层板。正式测定时，应使用有质量保证的商品预制板或高效预制板。品预制板或高效预制板。品预制板或高效预制板。品预制板或高效预制板。 展开剂：至少比较三种不同的展开系统，选出最展开剂：至少比较三种不同的展开系统，选出最展开剂：至少比较三种不同的展开系统，选出最展开剂：至少比较三
16、种不同的展开系统，选出最适合的展开系统。注意温度和相对湿度对色谱行为的适合的展开系统。注意温度和相对湿度对色谱行为的适合的展开系统。注意温度和相对湿度对色谱行为的适合的展开系统。注意温度和相对湿度对色谱行为的影响。影响。影响。影响。 （三）测定方法（三）测定方法 显色：可以结合使用通用型显色剂和专属显色显色：可以结合使用通用型显色剂和专属显色显色：可以结合使用通用型显色剂和专属显色显色：可以结合使用通用型显色剂和专属显色剂，以获得整体的和不同类别组分的图谱。剂，以获得整体的和不同类别组分的图谱。剂，以获得整体的和不同类别组分的图谱。剂，以获得整体的和不同类别组分的图谱。 图象摄影：普通相机或数
17、码相机（图象摄影：普通相机或数码相机（图象摄影：普通相机或数码相机（图象摄影：普通相机或数码相机（200200万象素以万象素以万象素以万象素以上），可以用积分软件生成轮廓扫描图和积分数据，上），可以用积分软件生成轮廓扫描图和积分数据，上），可以用积分软件生成轮廓扫描图和积分数据，上），可以用积分软件生成轮廓扫描图和积分数据，也可用薄层扫描仪进行积分和绘制轮廓图谱。也可用薄层扫描仪进行积分和绘制轮廓图谱。也可用薄层扫描仪进行积分和绘制轮廓图谱。也可用薄层扫描仪进行积分和绘制轮廓图谱。 （三）测定方法（三）测定方法 3. GC 3. GC 色谱柱：最好使用毛细柱，填充柱如能满足要求也色谱柱：最好使
18、用毛细柱，填充柱如能满足要求也色谱柱：最好使用毛细柱，填充柱如能满足要求也色谱柱：最好使用毛细柱，填充柱如能满足要求也可以使用。通过比较不同极性的色谱柱，以确定最适合可以使用。通过比较不同极性的色谱柱，以确定最适合可以使用。通过比较不同极性的色谱柱，以确定最适合可以使用。通过比较不同极性的色谱柱，以确定最适合的色谱柱。的色谱柱。的色谱柱。的色谱柱。 柱温：可使用恒温或程序升温，程序升温宜采用线柱温：可使用恒温或程序升温，程序升温宜采用线柱温：可使用恒温或程序升温，程序升温宜采用线柱温：可使用恒温或程序升温，程序升温宜采用线性程序，尽量避免复杂的多阶程序性程序，尽量避免复杂的多阶程序性程序，尽量
19、避免复杂的多阶程序性程序，尽量避免复杂的多阶程序 其他测定条件：如进样器温度、检测器温度、气体其他测定条件：如进样器温度、检测器温度、气体其他测定条件：如进样器温度、检测器温度、气体其他测定条件：如进样器温度、检测器温度、气体流速等也应确定。流速等也应确定。流速等也应确定。流速等也应确定。 检测器：尽量使用检测器：尽量使用检测器：尽量使用检测器：尽量使用FIDFID。（四）色谱指纹图谱标准的建立（四）色谱指纹图谱标准的建立 指纹图谱标准的建立包括指纹图谱标准的建立包括标准指纹图谱标准指纹图谱（对照模式）的建立（对照模式）的建立和和样品指纹图谱的测定样品指纹图谱的测定及相似性的判断。及相似性的判
20、断。（四）色谱指纹图谱标准的建立（四）色谱指纹图谱标准的建立 1. 色谱峰的辨认色谱峰的辨认 以以相对保留时间为依据对色谱峰进行辨相对保留时间为依据对色谱峰进行辨认认，从，从原料药材出发，找出具有指纹意义的峰原料药材出发，找出具有指纹意义的峰进行编号，缺峰缺号进行编号，缺峰缺号。（四）色谱指纹图谱标准的建立（四）色谱指纹图谱标准的建立 2. 相似性相似性的评价的方法：的评价的方法： 相似性：指两张指纹图谱之间相似的程相似性：指两张指纹图谱之间相似的程度。包括度。包括供试品指纹图谱与对照指纹图谱之间供试品指纹图谱与对照指纹图谱之间的的相似性相似性，供试品指纹图谱之间的相似性，供试品指纹图谱之间的
21、相似性 （四）色谱指纹图谱标准的建立（四）色谱指纹图谱标准的建立 相似性包括两个方面：相似性包括两个方面： （1）色谱的整体面貌的相似性）色谱的整体面貌的相似性 峰的数目、峰的数目、各峰峰面积的比例各峰峰面积的比例，即总体面貌是否相似。，即总体面貌是否相似。 （2）总积分值的量化比较）总积分值的量化比较 供试品与对照样供试品与对照样品或对照用指纹图谱总积分面积的差异品或对照用指纹图谱总积分面积的差异（量的差（量的差异）异）。 （四）色谱指纹图谱标准的建立（四）色谱指纹图谱标准的建立3. 相似性的判断方法相似性的判断方法（1）通过共有峰判断通过共有峰判断（2）通过相似度判断通过相似度判断 （1）
22、通过共有峰判断）通过共有峰判断 共有峰：共有峰：共有峰：共有峰：不同样品的指纹图谱中所共有的指纹峰称不同样品的指纹图谱中所共有的指纹峰称不同样品的指纹图谱中所共有的指纹峰称不同样品的指纹图谱中所共有的指纹峰称为共有峰。为共有峰。为共有峰。为共有峰。 重叠率：重叠率：重叠率：重叠率： 重叠率重叠率重叠率重叠率=2=2共有峰数共有峰数共有峰数共有峰数 / / 供试品与对照样品色谱峰总数供试品与对照样品色谱峰总数供试品与对照样品色谱峰总数供试品与对照样品色谱峰总数 重叠率不得低于一定的限度。重叠率不得低于一定的限度。重叠率不得低于一定的限度。重叠率不得低于一定的限度。 供试品中共有峰与参照峰供试品中
23、共有峰与参照峰供试品中共有峰与参照峰供试品中共有峰与参照峰面积的比值面积的比值面积的比值面积的比值与标准指纹图与标准指纹图与标准指纹图与标准指纹图谱比较，不得超过一定的限度。谱比较，不得超过一定的限度。谱比较，不得超过一定的限度。谱比较，不得超过一定的限度。 供试品供试品供试品供试品中非共有峰的面积占总峰面积的比值，不得中非共有峰的面积占总峰面积的比值，不得中非共有峰的面积占总峰面积的比值，不得中非共有峰的面积占总峰面积的比值，不得超过一定的限度超过一定的限度超过一定的限度超过一定的限度 。 （2）通过相似度判断）通过相似度判断 对照模式的计算：选对照模式的计算：选10批标准样品，测定批标准样
24、品，测定指纹图谱，计算对照模式。有两种算法：指纹图谱，计算对照模式。有两种算法： 平均矢量平均矢量 平均矢量平均矢量 式中式中式中式中X X1 1, X, X2 2, Xn, Xn为矢量，代表第为矢量，代表第为矢量，代表第为矢量，代表第1 1，2 2 到第到第到第到第n n个样品的指纹图谱。个样品的指纹图谱。个样品的指纹图谱。个样品的指纹图谱。 X X1 1 = =（x x1,11,1, x, x1,21,2, x, x1m1m） 中位数矢量中位数矢量 中位数矢量中位数矢量median(X1j,X2j.Xnj) 中位数矢量是把对应的矢量按大小排列，中位数矢量是把对应的矢量按大小排列，取处于当中
25、的矢量作为对照模式。如果样品数取处于当中的矢量作为对照模式。如果样品数为奇数时，中位数只有为奇数时，中位数只有1个；样品数为偶数时，个；样品数为偶数时，中位数是当中两个数的平均值。中位数是当中两个数的平均值。 推荐使用平均矢量。推荐使用平均矢量。 相似度的计算：相似度的计算： 把供试品和对照模式的指纹图谱作为两个把供试品和对照模式的指纹图谱作为两个矢量，矢量矢量，矢量(x1, x2, , xn)代表样品代表样品X的图谱，的图谱，其中其中xi代表样品代表样品X图谱中第图谱中第i个色谱峰的峰面积；个色谱峰的峰面积；矢量矢量 (y1, y2 ,yn) 代表对照模式代表对照模式Y的图谱，的图谱，yi代
26、表对照模式图谱中第代表对照模式图谱中第i个色谱峰的峰面积。个色谱峰的峰面积。可以用下面两种方法表示相似度。可以用下面两种方法表示相似度。 相关系数相关系数相关系数相关系数相关系数越接近于相关系数越接近于1，两个样品越相似。，两个样品越相似。 夹角余弦夹角余弦夹角余弦夹角余弦 夹角余弦夹角余弦夹角余弦夹角余弦 夹角余弦是矢量夹角余弦是矢量夹角余弦是矢量夹角余弦是矢量 (x (x1 1, x, x2 2, , x, , xn n) ) 和和和和 (y(y1 1,y ,y2 2,y,yn n) ) 在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用
27、在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其夹角越小，夹角的余弦值越接近于夹角越小，夹角的余弦值越接近于夹角越小，夹角的余弦值越接近于夹角越小，夹角的余弦值越接近于1 1；当两个样品等同；当两个样品等同；当两个样品等同；当两个样品等同时，夹角为时，夹角为时，夹角为时，夹角为0 0，夹角余弦等于，夹角余弦等于，夹角余弦等于，夹角余弦等于1 1。 若若2个样品中分别只有个样品中分别只有2个色谱峰，则每个色谱峰，则每个样品可以用
28、二维的向量来表示。个样品可以用二维的向量来表示。2个样品可个样品可以表示为直角坐标系中的两个点，其夹角为以表示为直角坐标系中的两个点，其夹角为。 A (x1, x2)B (y1, y2)0 = 根据差角余弦定理，根据差角余弦定理， cos = cos( ) = cos cos + sin sin = = = 一般相关系数或夹角余玄在一般相关系数或夹角余玄在0.91.0之间，之间，相似度符合要求。相似度符合要求。（六）方法的考察（六）方法的考察 1色谱系统适用性试验色谱系统适用性试验 一般按参照物计算。一般按参照物计算。包括：柱效，主要色谱峰的分离度。包括：柱效，主要色谱峰的分离度。 2精密度精
29、密度 包括日内精密度，日间精密度，重包括日内精密度，日间精密度，重复性。计算保留时间、相对保留时间和峰面积的复性。计算保留时间、相对保留时间和峰面积的RSD值，也可以计算一组测定结果的相似度。值，也可以计算一组测定结果的相似度。 3耐用性耐用性 使用三根不同的色谱柱进行比较。使用三根不同的色谱柱进行比较。 （七）应用示例（七）应用示例 1. 丹参注射液指纹图谱的测定丹参注射液指纹图谱的测定 色谱条件：色谱条件：Luna 5u C18(2)柱，流动相柱，流动相A：水水-冰醋酸（冰醋酸（100 0.8）；流动相）；流动相B:乙腈乙腈-冰醋酸冰醋酸（100 0.8），用梯度洗脱。），用梯度洗脱。28
30、0nm检测。检测。（七）应用示例（七）应用示例 2. 沙棘指纹图谱的测定沙棘指纹图谱的测定 色谱条件：色谱条件：Shim-pack VP-ODS柱，柱，流动相流动相A：乙腈；流动相：乙腈；流动相B：0.4%磷酸水溶液，用梯度磷酸水溶液，用梯度洗脱，洗脱，360nm检测。检测。 3. 3. 中药枳壳的化学模式识别中药枳壳的化学模式识别中药枳壳的化学模式识别中药枳壳的化学模式识别 枳壳供试液制备枳壳供试液制备枳壳供试液制备枳壳供试液制备 精密称取不同来源的药材粉末精密称取不同来源的药材粉末精密称取不同来源的药材粉末精密称取不同来源的药材粉末( (过过过过4 4号筛号筛号筛号筛) )各各各各2 20
31、g0g，精密加入甲醇，精密加入甲醇，精密加入甲醇，精密加入甲醇50ml50ml，称定重量，称定重量，称定重量，称定重量，冷浸冷浸冷浸冷浸1h1h，加热超声，加热超声，加热超声，加热超声20min20min，静置冷却，用甲醇补足减，静置冷却，用甲醇补足减，静置冷却，用甲醇补足减，静置冷却，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液失的重量，滤过，精密量取续滤液失的重量，滤过，精密量取续滤液失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml25ml，置旋转蒸发，置旋转蒸发，置旋转蒸发，置旋转蒸发仪回收溶剂，残渣用甲醇溶解，定容至仪回收溶剂，残渣用甲醇溶解，定容至仪回收溶剂，残渣用甲醇溶解，定容至仪回收溶剂，残
32、渣用甲醇溶解，定容至5ml5ml，即得。，即得。，即得。，即得。 精密吸取上述枳壳供试液各精密吸取上述枳壳供试液各精密吸取上述枳壳供试液各精密吸取上述枳壳供试液各4l4l，分别用自动点样，分别用自动点样，分别用自动点样，分别用自动点样仪成条带状点样于硅胶仪成条带状点样于硅胶仪成条带状点样于硅胶仪成条带状点样于硅胶G60G60预制板上，在相对湿度预制板上，在相对湿度预制板上，在相对湿度预制板上，在相对湿度6565的调节缸中放置的调节缸中放置的调节缸中放置的调节缸中放置1h1h，取出，放入双槽展开缸中，以氯，取出，放入双槽展开缸中，以氯，取出，放入双槽展开缸中，以氯，取出，放入双槽展开缸中，以氯仿
33、仿仿仿甲醇甲醇甲醇甲醇乙酸乙酸乙酸乙酸(75(75：2525：5)5)为展开剂，展开，展距约为展开剂，展开，展距约为展开剂，展开，展距约为展开剂，展开，展距约15cm15cm。取出薄层板，晾干，以。取出薄层板，晾干，以。取出薄层板，晾干，以。取出薄层板，晾干，以2 2三氯化铝乙醇溶液为三氯化铝乙醇溶液为三氯化铝乙醇溶液为三氯化铝乙醇溶液为显色剂，显色剂，显色剂，显色剂，110110加热加热加热加热5min5min，使斑点清晰。，使斑点清晰。，使斑点清晰。，使斑点清晰。 将显色后的薄层板置于薄层色谱扫描仪中扫描，将显色后的薄层板置于薄层色谱扫描仪中扫描，将显色后的薄层板置于薄层色谱扫描仪中扫描，
34、将显色后的薄层板置于薄层色谱扫描仪中扫描，光束狭缝：光束狭缝：光束狭缝：光束狭缝：6.000.45mm6.000.45mm；扫描速度：；扫描速度：；扫描速度：；扫描速度：20mm/s20mm/s；分辨；分辨；分辨；分辨率：率：率：率：50m/step50m/step；扫描波长：；扫描波长：；扫描波长：；扫描波长：300nm300nm；扫描灯：；扫描灯：；扫描灯：；扫描灯：D2D2；扫；扫；扫；扫描模式：荧光；滤镜：描模式：荧光；滤镜：描模式：荧光；滤镜：描模式：荧光；滤镜：K400K400。经过对。经过对。经过对。经过对1111批枳壳样品薄批枳壳样品薄批枳壳样品薄批枳壳样品薄层扫描图的分析比较
35、和判断，确定了能体现枳壳药材层扫描图的分析比较和判断，确定了能体现枳壳药材层扫描图的分析比较和判断，确定了能体现枳壳药材层扫描图的分析比较和判断，确定了能体现枳壳药材共性、可对其进行有效鉴别的共性、可对其进行有效鉴别的共性、可对其进行有效鉴别的共性、可对其进行有效鉴别的1111个特征峰，这个特征峰，这个特征峰，这个特征峰，这1111个特个特个特个特征峰的征峰的征峰的征峰的RfRf值分别为值分别为值分别为值分别为0.050.05、0.110.11、0.170.17、0.210.21、0.280.28、0.360.36、0.410.41、0 08888、0.910.91、0.940.94、0.97
36、0.97。 4. 双黄连胶囊的双黄连胶囊的X-射线衍射指纹图谱射线衍射指纹图谱 实验仪器：日本理学实验仪器：日本理学实验仪器：日本理学实验仪器：日本理学Rigaku D/max2400Rigaku D/max2400粉末粉末粉末粉末x x射射射射线衍射仪。实验条件为：线衍射仪。实验条件为：线衍射仪。实验条件为：线衍射仪。实验条件为：Cu KalCu Kal辐射，石墨单色器，管辐射，石墨单色器，管辐射，石墨单色器，管辐射，石墨单色器，管压压压压40kV40kV，管流，管流，管流，管流150mA150mA，22扫描范围扫描范围扫描范围扫描范围360360，扫描速度，扫描速度，扫描速度，扫描速度8/
37、min8/min，步长，步长，步长，步长0.020.02。 参参 考考 文文 献献1. 1. 中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南国家药典委员中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南国家药典委员中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南国家药典委员中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南国家药典委员 会，国药典发（会，国药典发（会，国药典发（会，国药典发（20022002）第）第）第）第009009号号号号2. 2. 谢培山谢培山谢培山谢培山. . 中药制剂色谱指纹图谱鉴别，中成药，中药制剂色谱指纹图谱鉴别，中成药，中药制剂色谱指纹图谱鉴别，中成药，中药制剂色谱指纹图谱鉴别，中成药，20002000
38、，2222 （6 6）3. 3. 黄黠黄黠黄黠黄黠. . 丹参药材和丹参指纹图谱的研究，四川大学华西药丹参药材和丹参指纹图谱的研究，四川大学华西药丹参药材和丹参指纹图谱的研究，四川大学华西药丹参药材和丹参指纹图谱的研究，四川大学华西药学学学学 院研究生论文院研究生论文院研究生论文院研究生论文4. 4. 陈雏陈雏陈雏陈雏. . 川西高原产沙棘植物资源及生药学研究，四川大学川西高原产沙棘植物资源及生药学研究，四川大学川西高原产沙棘植物资源及生药学研究，四川大学川西高原产沙棘植物资源及生药学研究，四川大学华华华华 西药学院研究生论文西药学院研究生论文西药学院研究生论文西药学院研究生论文5. 5. 苏薇薇，等苏薇薇，等苏薇薇，等苏薇薇，等. . 中药枳壳的化学模式识别研究，中药材，中药枳壳的化学模式识别研究，中药材，中药枳壳的化学模式识别研究，中药材，中药枳壳的化学模式识别研究，中药材， 2002 2002，2525（1010）6. 6. 商素琴，等商素琴，等商素琴，等商素琴，等. .双黄连胶囊的双黄连胶囊的双黄连胶囊的双黄连胶囊的X-X-射线衍射指纹图谱鉴定，中草射线衍射指纹图谱鉴定，中草射线衍射指纹图谱鉴定，中草射线衍射指纹图谱鉴定，中草 药，药，药，药，20022002，3333（1111）
