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1、实验四、血小板计数实验四、血小板计数 丛丛 辉辉1;.u 血小板（血小板（platelet，PLT）是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持血）是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持血管内皮完整性以及黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能。管内皮完整性以及黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能。u 血小板计数是止血、凝血检查最常用的筛检试验之一。血小板计数是止血、凝血检查最常用的筛检试验之一。u 血小板计数（血小板计数（PLT）是测定单位容积的血液中血小板的数量。）是测定单位容积的血液中血小板的数量。 血小板特点血小板特点 2;.血小板形态检查血小板形态检查 在血涂片上血小板往往散在或成
2、在血涂片上血小板往往散在或成簇分布，多为圆形、椭圆形或略欠规则簇分布，多为圆形、椭圆形或略欠规则形；胞质呈淡蓝或淡红色，有细小、分形；胞质呈淡蓝或淡红色，有细小、分布均匀而相聚或分散于胞质中的紫红色布均匀而相聚或分散于胞质中的紫红色颗粒。颗粒。正常血小板形态：正常血小板形态： 正常血小板呈两面微凸的圆盘状，直径约正常血小板呈两面微凸的圆盘状，直径约1.53m，新生血小板体积，新生血小板体积大，成熟者体积小。大，成熟者体积小。3;.异常血小板形态：异常血小板形态： 1大小异常大小异常 血小板可出现明显的大小不均变化。血小板可出现明显的大小不均变化。 （1）大血小板：直径为）大血小板：直径为47m
3、，巨型血小板直径大于，巨型血小板直径大于7m，常为，常为720m，也可大于，也可大于20m，胞质中嗜天青颗粒细小或融合为大颗粒。，胞质中嗜天青颗粒细小或融合为大颗粒。 主要见于主要见于ITP、粒细胞白血病、血、粒细胞白血病、血小板无力症、巨大血小板综合征、小板无力症、巨大血小板综合征、MDS和脾切除后等。和脾切除后等。血小板形态检查血小板形态检查 4;. （2）小血小板：直径小于）小血小板：直径小于1.5m，主要见于缺铁性贫血、再生障碍性贫，主要见于缺铁性贫血、再生障碍性贫血、血、ITP等。等。 2形态异常形态异常 血小板可以出现杆状、逗点状、蝌蚪状、蛇形和丝状突起血小板可以出现杆状、逗点状、
4、蝌蚪状、蛇形和丝状突起等异常形态，健康人偶见（少于等异常形态，健康人偶见（少于2%）。）。 影响血小板形状改变的因素很多，各影响血小板形状改变的因素很多，各种形态异常又无特异性。因此，不规则和种形态异常又无特异性。因此，不规则和畸形的血小板比值超过畸形的血小板比值超过10%时才有临床意时才有临床意义。义。血小板形态检查血小板形态检查 5;. 3聚集性和分布异常聚集性和分布异常 血小板聚集、分布状态可间接反映其功能。聚集功血小板聚集、分布状态可间接反映其功能。聚集功能正常的血小板在非抗凝血的外周血涂片中常可见能正常的血小板在非抗凝血的外周血涂片中常可见35个聚集成簇或成团，聚个聚集成簇或成团，聚
5、集与散在血小板之比为集与散在血小板之比为20 1。 在在EDTA抗凝血的血涂片中，可见抗凝血的血涂片中，可见血小板不聚集而呈散在分布状态或出现血小板不聚集而呈散在分布状态或出现诱发的血小板聚集现象。诱发的血小板聚集现象。6;. （1）血小板卫星现象：血小板黏附、围绕于中性粒细胞周围（或偶尔黏附于）血小板卫星现象：血小板黏附、围绕于中性粒细胞周围（或偶尔黏附于单核细胞）的现象，有时可见血小板吞噬现象。此时，血小板和中性粒细胞形态单核细胞）的现象，有时可见血小板吞噬现象。此时，血小板和中性粒细胞形态和功能均正常。血小板卫星现象偶见于和功能均正常。血小板卫星现象偶见于EDTA抗凝血。抗凝血。 因因E
6、DTA和免疫球蛋白相互作用、和免疫球蛋白相互作用、非特异性结合血小板之故，被抗体包被非特异性结合血小板之故，被抗体包被的血小板与中性粒细胞结合。血小板卫的血小板与中性粒细胞结合。血小板卫星现象是血液分析仪血小板计数假性减星现象是血液分析仪血小板计数假性减少的原因之一（血小板被误计为白细胞）少的原因之一（血小板被误计为白细胞）。7;. （2）血小板片状聚集：原发性血）血小板片状聚集：原发性血小板增多症和血小板增多的慢性粒细小板增多症和血小板增多的慢性粒细胞白血病，血小板可呈大片聚集（图胞白血病，血小板可呈大片聚集（图2-57）。）。 （3）血小板减少：再生障碍性贫血和）血小板减少：再生障碍性贫血
7、和ITP因血小板数量少，血小板聚集因血小板数量少，血小板聚集成团的情况明显减少。成团的情况明显减少。 （4）血小板功能异常：血小板无力症时血小板无聚集功能，且散在分）血小板功能异常：血小板无力症时血小板无聚集功能，且散在分布，不出现聚集成团的现象。布，不出现聚集成团的现象。8;. 血小板计数血小板计数9;.血小板计数方法血小板计数方法10;.血小板计数方法学评价血小板计数方法学评价11;.血小板计数原理血小板计数原理 血液经血小板稀释液稀释后，红细胞被溶解，注入计数池后，在显微镜血液经血小板稀释液稀释后，红细胞被溶解，注入计数池后，在显微镜下计数血小板。经换算求出每升血液中的血小板数。下计数血
8、小板。经换算求出每升血液中的血小板数。12;. 试剂器材试剂器材 试剂试剂 草酸铵稀释液草酸铵稀释液 草酸铵草酸铵10克克 EDTA0.12克克 蒸馏水加至蒸馏水加至1000ml，过滤后，过滤后 备用。备用。 13;.试剂器材试剂器材器材 改良牛鲍计数板改良牛鲍计数板采血针采血针 微量吸管微量吸管显微镜显微镜14;.操作步骤 吸取血小板稀释液吸取血小板稀释液0.38ml于康氏试管中。于康氏试管中。 用一次性微量吸管吸血用一次性微量吸管吸血20ul于上述稀释液中。充分混于上述稀释液中。充分混 匀后取一小滴于血球计数池内，静止匀后取一小滴于血球计数池内，静止10-15分钟分钟. 用低倍镜或高倍镜计
9、数中央大方格中五个中方格内之用低倍镜或高倍镜计数中央大方格中五个中方格内之 血小板数。血小板数。15;.计算按下列公式计算血小板数 参考值 （100-300）109/L16;. 质量控制质量控制有少数患者可能红细胞溶解不完全。有少数患者可能红细胞溶解不完全。稀释液可放室温使用，但应密闭以防灰尖及水份蒸发，最好放冰箱保存为妥。稀释液可放室温使用，但应密闭以防灰尖及水份蒸发，最好放冰箱保存为妥。采血时，如同时做采血时，如同时做WBCWBC等，应先采血做血小板。等，应先采血做血小板。悬液制备，充分混匀，摇动标本悬液制备，充分混匀，摇动标本2min2min或或200200次以上。次以上。计数时应等待充
10、液静止计数时应等待充液静止10-15min10-15min后方可计数，时间过短因血小板尚未下沉，后方可计数，时间过短因血小板尚未下沉，使计数结果偏低，但时间不宜放置过长，否则出现颗粒沉淀物，使计数无法使计数结果偏低，但时间不宜放置过长，否则出现颗粒沉淀物，使计数无法进行。进行。血小板在镜下为富于折光之小点，约为红细胞的血小板在镜下为富于折光之小点，约为红细胞的1/21/21/3大小。大小。计数光线不可太强，计数光线不可太强，1h1h内计数完成。如红细胞不完全溶解，影响血小板计数内计数完成。如红细胞不完全溶解，影响血小板计数时，可加大稀释倍数，或另换稀释液。时，可加大稀释倍数，或另换稀释液。 1
11、7;. 血小板减少是引起出血的常见原因血小板减少是引起出血的常见原因 2050109/L时，可有轻度出血或手术后出血；时，可有轻度出血或手术后出血；20109/L，可有较严重的出血；，可有较严重的出血；400109/L为血小板增多为血小板增多 临床意义18;.毛细血管采血标准操作程序 操作步骤操作步骤u采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指 内侧或足跟两侧采血。内侧或足跟两侧采血。u轻轻按摩采血部位。轻轻按摩采血部位。u用洗必泰碘棉签消毒局部皮肤、待干。用洗必泰碘棉签消毒局部皮肤、待干。？u紧捏刺血部位，使其自然充血
12、。紧捏刺血部位，使其自然充血。u用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度23mm，稍加挤压以血液流，稍加挤压以血液流 出为宜。出为宜。u用干棉球擦去第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。？u按需要依次采血。按需要依次采血。u采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。19;.质量保证u除特殊情况外，不要在耳垂采血。若在耳垂采血应避开冻疮、炎症、水肿等部位。u皮肤消毒，严格无菌操作。u快、准，深度适宜。u微量吸管吸血准确，血液弯面达到刻度线即可，标本不易放在冰箱保存。u进行多项检验时，采血次序为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、涂片等。 20;.思考题思考题u为什么第一滴血不宜用于血小板计数？为什么第一滴血不宜用于血小板计数？u用于血小板计数的标本为什么不能储存于冰箱？用于血小板计数的标本为什么不能储存于冰箱？21;.
