代谢工程导读

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1、代谢工程导读代谢工程导读 研究代谢工程的就是为了能精确地处理好微生物细胞自身的利益与人类对微生物细胞提出的要求之间的对立与统一的关系。2024/8/92张星元：发酵原理（讲座）代谢工程的导读代谢工程的导读1. 代谢工程的酝酿代谢工程的酝酿2. 代谢流及其控制的的概念代谢流及其控制的的概念3. 代谢工程的两个组成部分代谢工程的两个组成部分4. 代谢工程的含义代谢工程的含义5. 代谢工程的应用代谢工程的应用2024/8/93张星元：发酵原理（讲座）1.1 半半个个多多世世纪纪生生理理与与育育种种知知识识的累积的累积1.2 基因工程理论和技术的成熟基因工程理论和技术的成熟1.3 代谢流定量分析技术的

2、发展代谢流定量分析技术的发展1.4 生生化化工工程程在在线线检检测测和和建建模模方方法的发展法的发展 1. 代谢工程的酝酿代谢工程的酝酿2024/8/94张星元：发酵原理（讲座） 用用代代谢谢途途径径操操作作的的手手段段来来改改造造微微生生物物以以获获得得期期望望的的性性质质，这这确确实实并并不不是是新新的的观观念念。在在氨氨基基酸酸、抗抗生生素素、溶溶剂剂和和维维生生素素的的发发酵酵法法生生产产中中，都都可可以以找找到到采采用用这这个个路路子子实实现现人人类类理理想想的的一一些些突突出出的的例例子子。这这些些方方法法主主要要依依赖赖于于用用化化学学诱诱变变剂剂处处理理微微生生物物，并并用用进

3、进行行设设计计的的筛筛选选技技术术来来检检出出已已获获得得优优良良性性状状的的突突变变株株。尽尽管管这这种种方方法法已已被被广广泛泛地地接接受受并并已已取取得得好好的的效效果果，但但人人们们对对突突变变株株的的遗遗传传和和代代谢谢性性状状的的精确变化，知之甚少。精确变化，知之甚少。1.1 半个多世纪生理与育种知识的累积半个多世纪生理与育种知识的累积2024/8/95张星元：发酵原理（讲座） 尽管在所有的菌种改良方案中都有尽管在所有的菌种改良方案中都有某种定向的含义，但传统的诱变是随机某种定向的含义，但传统的诱变是随机的。的。“定向定向”与随机诱变没有直接关系。与随机诱变没有直接关系。 事实上，

4、我们早就根据随机诱变后事实上，我们早就根据随机诱变后从突变株中筛得的高产突变株遗传标记，从突变株中筛得的高产突变株遗传标记，及这些突变株的优良性质的实验结果，及这些突变株的优良性质的实验结果，来推测途径及其控制的机制来推测途径及其控制的机制。2024/8/96张星元：发酵原理（讲座） 有人把这样的做法叫做有人把这样的做法叫做“逆逆行的代谢工程行的代谢工程”（reverse metabolic engineering）, “逆行逆行的代谢工程的代谢工程” 为代谢网络的构建为代谢网络的构建和完善，以及代谢工程的进展提和完善，以及代谢工程的进展提供了大量的生理学和遗传学信息。供了大量的生理学和遗传学

5、信息。2024/8/97张星元：发酵原理（讲座） 二十多年来，基因工程的理论和二十多年来，基因工程的理论和DNA重组的分子生物学技术已成熟。重组的分子生物学技术已成熟。DNA重组的分子生物学技术的开发和重组的分子生物学技术的开发和应用，把代谢操作引进了一个新的层应用，把代谢操作引进了一个新的层面，人们已能对代谢途径的指定酶反面，人们已能对代谢途径的指定酶反应进行精确的修饰，因此，有可能构应进行精确的修饰，因此，有可能构建精心设计的遗传背景。建精心设计的遗传背景。 1.2 基因工程理论和技术的成熟基因工程理论和技术的成熟2024/8/98张星元：发酵原理（讲座）1.3 代谢流定量分析技术的发展代

6、谢流定量分析技术的发展 代谢流量分析（代谢流量分析（ metabolic flux analysis）是一种研究胞内代谢的方法，是一种研究胞内代谢的方法，根据已有的代谢网络的信息建立胞内主根据已有的代谢网络的信息建立胞内主要反应的化学计量模型和胞内代谢产物要反应的化学计量模型和胞内代谢产物的质量平衡，以实际测得的分泌到胞外的质量平衡，以实际测得的分泌到胞外的代谢中间产物的浓度，来推算代谢代的代谢中间产物的浓度，来推算代谢代谢流量谢流量。2024/8/99张星元：发酵原理（讲座） 这种分析方法的基础是拟稳态这种分析方法的基础是拟稳态假设，即假设在产物形成速率最大假设，即假设在产物形成速率最大的阶

7、段各种代谢中间物的胞内浓度的阶段各种代谢中间物的胞内浓度变化速率为零。根据质量平衡，由变化速率为零。根据质量平衡，由 n 个中间代谢物即可得到个中间代谢物即可得到 n 个关于个关于速率的方程，通过测定胞外代谢产速率的方程，通过测定胞外代谢产物的浓度，计算未知途径的流量。物的浓度，计算未知途径的流量。2024/8/910张星元：发酵原理（讲座）1.4 生化工程在线检测和建模方法的发展生化工程在线检测和建模方法的发展 色谱、质谱、红外等等在线检测色谱、质谱、红外等等在线检测手段，以及生物传感技术的发展，可为发手段，以及生物传感技术的发展，可为发酵在线检测和反馈提供可靠的原始数据。酵在线检测和反馈提

8、供可靠的原始数据。建模方法也有发展。建模方法也有发展。2024/8/911张星元：发酵原理（讲座） 代谢流的概念本身实际上并不是新代谢流的概念本身实际上并不是新的概念。代谢流及其控制引起生化研究的概念。代谢流及其控制引起生化研究人员中的少数先知的注意，大约已有人员中的少数先知的注意，大约已有30多年历史了。作为他们工作的结果，代多年历史了。作为他们工作的结果，代谢控制的观念成熟了，并且被严格的定谢控制的观念成熟了，并且被严格的定义了，尽管这些观念并不是始终被传统义了，尽管这些观念并不是始终被传统的生物学家广泛地接受。的生物学家广泛地接受。 2 代谢流及其控制的的概念代谢流及其控制的的概念202

9、4/8/912张星元：发酵原理（讲座） 代谢工程最初仅仅被设想为特定的代谢工程最初仅仅被设想为特定的途径操作（在生物化学、生理学、遗途径操作（在生物化学、生理学、遗传学的领域）。后来，传学的领域）。后来，发酵工程师们发酵工程师们惊喜地发现利用代谢流控制分析这个惊喜地发现利用代谢流控制分析这个有效的平台，可以向工业发酵过程导有效的平台，可以向工业发酵过程导入严密性；并把它变成了发酵工程的入严密性；并把它变成了发酵工程的领域工程数据分析的输出端。领域工程数据分析的输出端。2024/8/913张星元：发酵原理（讲座） 尽管代谢和细胞生理学可为反应途尽管代谢和细胞生理学可为反应途径的分析提供主要的背景

10、知识；还应该径的分析提供主要的背景知识；还应该指出，代谢流量测定和控制的结果具有指出，代谢流量测定和控制的结果具有广阔的适用范围和实际应用前景。因而，广阔的适用范围和实际应用前景。因而，除了要分析代谢途径上的物质流和能量除了要分析代谢途径上的物质流和能量流，代谢工程的概念同样可以应用于将流，代谢工程的概念同样可以应用于将来信号传感途径的信息流的分析（目前来信号传感途径的信息流的分析（目前对于信息流尚未很好地定义）。对于信息流尚未很好地定义）。2024/8/914张星元：发酵原理（讲座） 3 代谢工程的两个组成部分代谢工程的两个组成部分3.1 “分析分析” 部分部分3.2 “综合综合” 部分部分

11、2024/8/915张星元：发酵原理（讲座） 因为代谢工程借助于因为代谢工程借助于 DNA 重组技术而作为一种启用技术而重组技术而作为一种启用技术而出现，所以出现，所以一开始人们就把注意一开始人们就把注意力放在这个领域的综合方面力放在这个领域的综合方面：新：新的基因在不同寄主中的表达，内的基因在不同寄主中的表达，内酶的扩增，基因的删除，酶活力酶的扩增，基因的删除，酶活力修饰，转录的解调或酶的解调等。修饰，转录的解调或酶的解调等。2024/8/916张星元：发酵原理（讲座） 这样所谓的代谢工程，这样所谓的代谢工程，在相当程度上仅仅是应用分在相当程度上仅仅是应用分子生物学技术表现形式，几子生物学技

12、术表现形式，几乎没有工程的内容，因此从乎没有工程的内容，因此从生物过程的角度来衡量，生物过程的角度来衡量，并并不是够格的代谢工程不是够格的代谢工程。 2024/8/917张星元：发酵原理（讲座） 与所有传统的工程领域一与所有传统的工程领域一样，代谢工程也包含样，代谢工程也包含 “ 分析分析 ” 和和 “ 综合综合 ” 两个规定的步两个规定的步骤。骤。2024/8/918张星元：发酵原理（讲座） 重重要要的的工工程程内内容容存存在在于于代代谢谢工工程程的的分分析析方方面面，例如：例如：3.1 “分析分析” 部分部分2024/8/919张星元：发酵原理（讲座）怎样推算特定代谢流量等生理状态参数怎样

13、推算特定代谢流量等生理状态参数？ 怎样用这些信息解释代谢网络的控制怎样用这些信息解释代谢网络的控制结构（体系），进而提出达到某个目标的结构（体系），进而提出达到某个目标的合乎道理的修饰位点？合乎道理的修饰位点？ 怎样进一步估计测定这些遗传修饰和酶怎样进一步估计测定这些遗传修饰和酶的修饰的真实的生化效果，以便进行下一的修饰的真实的生化效果，以便进行下一轮的途径修饰，直到达到目的？轮的途径修饰，直到达到目的？能不能提出一个合理的方法以确定代谢能不能提出一个合理的方法以确定代谢修饰的最有希望的靶位？修饰的最有希望的靶位？ ？2024/8/920张星元：发酵原理（讲座） 综合部分包括以分子生物综合部分

14、包括以分子生物学方法进行的综合实验学方法进行的综合实验：设计设计育种方案的制定，新的基因的育种方案的制定，新的基因的导入和在寄主细胞中的表达，导入和在寄主细胞中的表达，内酶的扩增，基因的删除，酶内酶的扩增，基因的删除，酶活力修饰，转录的解调或酶的活力修饰，转录的解调或酶的解调等解调等。3.2 “综合综合” 部分部分2024/8/921张星元：发酵原理（讲座） 在综合方面，代谢工程的另在综合方面，代谢工程的另一个不同寻常的特征是代谢途径一个不同寻常的特征是代谢途径的的“集成集成”，而往往不是单个反，而往往不是单个反应的导入。这样，代谢工程研究应的导入。这样，代谢工程研究的是整个代谢网络，涉及到途

15、径的是整个代谢网络，涉及到途径分析和热动力学可能性，途径流分析和热动力学可能性，途径流量及其控制。量及其控制。 2024/8/922张星元：发酵原理（讲座） 我们研究的出发点我们研究的出发点正在经历从单个酶反应正在经历从单个酶反应向相互影响的生化反应向相互影响的生化反应体系转变。体系转变。2024/8/923张星元：发酵原理（讲座） 通过对整个反应体系而不通过对整个反应体系而不是一个个孤立的反应的考察就是一个个孤立的反应的考察就有可能获得关于代谢和细胞功有可能获得关于代谢和细胞功能的更全面的认识，在这个的能的更全面的认识，在这个的意义上意义上 “ 代谢网络代谢网络 ” 的观念的观念是最为重要的

16、。是最为重要的。2024/8/924张星元：发酵原理（讲座） 因此，代谢工程使用来自因此，代谢工程使用来自还原论者的大量的信息和研究还原论者的大量的信息和研究技术，来进行设计和综合。而技术，来进行设计和综合。而关于整个体系的运转状态的观关于整个体系的运转状态的观察（工程数据采集），对于进察（工程数据采集），对于进一步的合理的分析来说，又是一步的合理的分析来说，又是最好的指导。最好的指导。2024/8/925张星元：发酵原理（讲座） 代谢工程让人们把注意力代谢工程让人们把注意力转向代谢网络的整个体系而不转向代谢网络的整个体系而不是其组成部分。这个转向说明是其组成部分。这个转向说明基因工程已在总结

17、经验和教训基因工程已在总结经验和教训中走向成熟。中走向成熟。2024/8/926张星元：发酵原理（讲座） 代谢工程把发酵工程的两个关键的代谢工程把发酵工程的两个关键的组成部分菌种和发酵工艺控制凝聚在一组成部分菌种和发酵工艺控制凝聚在一起，这正是发酵原理的基本立场。在发起，这正是发酵原理的基本立场。在发酵工业的历史上菌种和发酵工艺控制的酵工业的历史上菌种和发酵工艺控制的分开，促进了发酵生产的工业化，也束分开，促进了发酵生产的工业化，也束缚了高精度发酵工程的发展。代谢工程缚了高精度发酵工程的发展。代谢工程使发酵工程返朴归真，代谢工程是强化使发酵工程返朴归真，代谢工程是强化了生物学属性的广义的发酵工

18、程。了生物学属性的广义的发酵工程。2024/8/927张星元：发酵原理（讲座） 发酵原理（工业发酵的生物发酵原理（工业发酵的生物学原理）是代谢控制发酵通向代学原理）是代谢控制发酵通向代谢工程的桥梁，是分子生物学技谢工程的桥梁，是分子生物学技术在发酵工业上取得丰硕成果的术在发酵工业上取得丰硕成果的向导，也是我国生物工程、发酵向导，也是我国生物工程、发酵工程界后生超越前辈、领先世界工程界后生超越前辈、领先世界的的“内功内功”。2024/8/928张星元：发酵原理（讲座） 4 代谢工程的含义代谢工程的含义 DNA重组技术刚进入可行阶段不久，重组技术刚进入可行阶段不久，就出现了不少可用来说明这种技术在

19、定向就出现了不少可用来说明这种技术在定向的途径修饰方面的潜在应用的术语。如分的途径修饰方面的潜在应用的术语。如分子育种（子育种（ 1981年），体外进化（年），体外进化（1988年），年），微生物工程或代谢途径工程（微生物工程或代谢途径工程（1988 1991年），细胞工程（年），细胞工程（ 1991 年年 ）和）和 代谢工程代谢工程（1991年），尽管不同的作者提出不完全年），尽管不同的作者提出不完全相同的定义，这些定义均传达了与代谢工相同的定义，这些定义均传达了与代谢工程的总目标和手段相似或递进的含义。程的总目标和手段相似或递进的含义。 2024/8/929张星元：发酵原理（讲座） 几十年

20、来我们一直是用物理几十年来我们一直是用物理或化学诱变来改变微生物的遗传或化学诱变来改变微生物的遗传特性。特性。通过传统的诱变和筛选，通过传统的诱变和筛选，成功开发了大量的生产抗生素和成功开发了大量的生产抗生素和氨基酸的菌种。在已知代谢途径氨基酸的菌种。在已知代谢途径的基础上，采用了一些精心设计的基础上，采用了一些精心设计的筛选方法，但是整体上这个方的筛选方法，但是整体上这个方法还仅仅是一种法还仅仅是一种 “ 试差法试差法 ” 。2024/8/930张星元：发酵原理（讲座） DNA 重组技术的出现使人类重组技术的出现使人类的许多美好理想有可能成为现实。的许多美好理想有可能成为现实。用目标明确的遗

21、传修饰替代传统的用目标明确的遗传修饰替代传统的暗箱操作去改变代谢途径，已取得暗箱操作去改变代谢途径，已取得可喜的成绩。发酵工程和微生物代可喜的成绩。发酵工程和微生物代谢流的分析提供的信息，又可以校谢流的分析提供的信息，又可以校正遗传修饰的精度，从而更进一步正遗传修饰的精度，从而更进一步逼近预定目标。逼近预定目标。2024/8/931张星元：发酵原理（讲座） 代谢工程最初被定义为：代谢工程最初被定义为：用用 DNA 重组技术修饰特定的重组技术修饰特定的生化反应或引进新的生化反应，生化反应或引进新的生化反应，直接改善产物的形成和细胞的直接改善产物的形成和细胞的性能的学科。性能的学科。 2024/8

22、/932张星元：发酵原理（讲座） 这样定义的代谢工程的基本特征是这样定义的代谢工程的基本特征是工作目标的确切性工作目标的确切性。也就是说，先要找。也就是说，先要找到要进行修饰或要引进的目标生化反应，到要进行修饰或要引进的目标生化反应，一旦找准了目标，就用已建立的一旦找准了目标，就用已建立的分子生分子生物学技术物学技术去扩增、去抑制或删除、去传去扩增、去抑制或删除、去传递相应的基因或酶，或者解除对相应的递相应的基因或酶，或者解除对相应的基因或酶调节，而基因或酶调节，而广义的广义的DNA重组重组只是只是常规地应用于不同步骤中，以便于达到常规地应用于不同步骤中，以便于达到这些目标。这些目标。2024

23、/8/933张星元：发酵原理（讲座） 也有人这样给代谢工程下定义：也有人这样给代谢工程下定义：通过使用通过使用 DNA 重组和分子生物学技重组和分子生物学技术，对代谢途径进行修饰和（或）引术，对代谢途径进行修饰和（或）引进缺失，从而改变细胞的新陈代谢作进缺失，从而改变细胞的新陈代谢作用和（或）细胞特性的生物工程的分用和（或）细胞特性的生物工程的分支。这样的定义尽管强调了代谢工程支。这样的定义尽管强调了代谢工程目标的确切性，但目标的确切性，但仍不能包容代谢工仍不能包容代谢工程的工程分析方面的内容，仍不能做程的工程分析方面的内容，仍不能做到到 “分析分析”和和“综合综合”的有机结合。的有机结合。

24、2024/8/934张星元：发酵原理（讲座） 应该根据代谢工程的应该根据代谢工程的生物学和工程学实质来规生物学和工程学实质来规范代谢工程的内涵，给代范代谢工程的内涵，给代谢工程下定义。谢工程下定义。2024/8/935张星元：发酵原理（讲座）代谢工程的定义：代谢工程的定义： 把量化代谢流及其控制的工程分把量化代谢流及其控制的工程分析方法与根据分析结果制定的遗传修析方法与根据分析结果制定的遗传修饰方案付之实施的分子生物学技术结饰方案付之实施的分子生物学技术结合起来，以反复分析、校验和修正的合起来，以反复分析、校验和修正的方式进行实际操作，改善微生物的产方式进行实际操作，改善微生物的产物形成的能力

25、和微生物的细胞性能，物形成的能力和微生物的细胞性能，从而满足人类对生物的特定需求的生从而满足人类对生物的特定需求的生物工程的分支。物工程的分支。2024/8/936张星元：发酵原理（讲座） 提提高高目目的的产产物物的的产产量量及及其其对对主主要要原原料料的的转转化化率率， 扩扩大大细细胞胞可可利利用用基基质质（原原料料）的的范范围围， 扩扩大大细细胞胞生生物物合合成成的的范范围围， 改改善善工工业业生生产产中中细细胞胞的的形形态态和和生生理理性性能能，调调整整细细胞胞合合成成、分分泌泌不不同同代谢产物的产量分布，代谢产物的产量分布，5 代谢工程的应用代谢工程的应用2024/8/937张星元：发酵原理（讲座） 研研究究和和完完善善微微生生物物代代谢谢及及代代谢谢调调节节的的知知识识， 生生物物制制药药方方面面的的应应用用， 环环境境净净化化方方面面的的应应用用， 酶酶制制剂剂、微微生生物物多多肽肽制制品品的的进进一一步步开开发发， 用用微微生生物生产动植物异源蛋白。物生产动植物异源蛋白。2024/8/938张星元：发酵原理（讲座）