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1、乙肝核心抗原的检测与应用摘要 HBcAgHBcAg存在于存在于DaneDane颗粒的核心，是颗粒的核心，是HBVHBV的结构蛋白即的结构蛋白即病毒核壳蛋白，具有重要的生物学特性和临床病理意义，病毒核壳蛋白，具有重要的生物学特性和临床病理意义，HBcAgHBcAg由由HBVHBV基因组的基因组的C C开放读码区（开放读码区（ORFORF）编码，具有）编码，具有高度免疫原性，对高度免疫原性，对HBcAgHBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要的免疫应答在病毒清除中有重要作用。血清作用。血清HBcAgHBcAg阳性可提供肝内阳性可提供肝内HBVHBV合成的信息，是病合成的信息，是病毒存在的直接标志，毒
2、存在的直接标志，HBcAgHBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后攻击的靶细胞，肝细胞溶解后HBcAgHBcAg可直接释放入血，故可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。检测肝组织能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。检测肝组织HBcAgHBcAg有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的预后。血清和肝组织预后。血清和肝组织HBcAgHBcAg检测具有多种实用价值，值得检测具有多种实用价
3、值，值得推荐。推荐。 1.2免疫反应 HBcAg具有高度免疫原性，在T细胞和B细胞水平上，HBcAg的抗原性较HBeAg强100倍，几乎所有HBV感染者都产生抗-HBc，同时有T细胞免疫应答。对HBcAg的免疫应答在病毒清除中可能有重要作用。这对HBcAg DNA的疫苗研究有重要的指导意义。 1.2免疫反应 Th细胞根据其的分泌细胞因子不同可分为Th1和Th2亚群。Th1细胞主要产生白介素-2（IL-2），干扰素（IFN）和肿瘤坏死因子（TNF）等促进细胞免疫反应；Th2细胞主要产生白介素-6（IL-6）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）等促进体液免疫反应。Th1和Th2细胞
4、通过分泌的细胞因子相互下调对方的生长分化，刺激自身的增生。 1.2免疫反应 机体的机体的Th1型免疫反应可促进病原体的清除，而型免疫反应可促进病原体的清除，而Th2型免疫反应则可加重机体的病理损害，在型免疫反应则可加重机体的病理损害，在HBcAg诱导下，外周血单个核细胞（诱导下，外周血单个核细胞（PBMC）产生）产生Th1类细类细胞因子量明显增高；在胞因子量明显增高；在HBeAg诱导下，诱导下，Th2类细胞因类细胞因子量明显增高。慢性子量明显增高。慢性HBV感染进行免疫调节治疗的感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使一个目标就是使HBeAg特异性特异性T细胞由细胞由Th2细胞主导细胞主导型转化为
5、型转化为Th1细胞型，细胞型，HBcAg有望打破有望打破HBeAg诱导的诱导的免疫耐受状态而增强免疫耐受状态而增强Th1细胞优势表达达到治疗的目细胞优势表达达到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性携带者体内针对慢性携带者体内针对HBV的特异性的特异性CTL应答明显低下，纠正这种应答明显低下，纠正这种CTL低低反应状态，对于机体有效地清除反应状态，对于机体有效地清除HBV至关重要。至关重要。 1.2免疫反应 DNA疫苗（基因疫苗）是近几年免疫学和分子生物学研究的新兴领域，它作为一种全新的高效免疫方法，己在许多难治性感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤性疾病的预防
6、及治疗领域显示出较好的应用前景。DNA疫苗可刺激机体特异性CTL功能的特性给HBV慢性持续感染的治疗带来新的希望。 1.2免疫反应 采用治疗性疫苗打破宿主对采用治疗性疫苗打破宿主对HBVHBV的免疫耐受状态来的免疫耐受状态来治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的有效途径。有效途径。HBVHBV核心抗原区核心抗原区AA1-AA151AA1-AA151段含有多个不段含有多个不连续的抗原表位，对刺激机体产生特异性的体液免疫和连续的抗原表位，对刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫均具有重要作用。细胞免疫均具有重要作用。KuhoberKuhob
7、er和和Geissier Geissier et alet al作了作了HBcAg DNAHBcAg DNA疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。该疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。该DNADNA疫苗具有良好的细胞免疫原性，确可刺激宿主产生疫苗具有良好的细胞免疫原性，确可刺激宿主产生较强的较强的CTLCTL反应。这一结果为我们进一步探索该反应。这一结果为我们进一步探索该DNADNA疫疫苗在治疗主要因机体苗在治疗主要因机体CTLCTL功能低下所致功能低下所致HBVHBV慢性持续感慢性持续感染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。 2 临床应用 2.1血清H
8、BcAg HBsAg、HBeAg、抗-HBc等免疫学指标都是体内存在乙型肝炎病毒颗粒的间接标志，而HBcAg则是HBV存在的直接标志。所以，HBcAg测定更能反映HBV的存在及其复制程度，比其他各种免疫学指标更灵敏、更特异。HBcAg是乙型肝炎病毒（HBV）的核心成分，若在血清中检出HBcAg则说明有HBV复制。 血中的HBcAg是作为Dane颗粒内部成分存在，极少有游离的HBcAg，故用常规方法不易检出，在血清中不能直接检出HBcAg，需加用开壳剂，使HBcAg释放于溶液中然后进行测定。检测HBcAg，目前多采用间接的方法，即首先在试管内将Dane颗粒沉淀，再用裂解剂裂解Dane颗粒外壳，使
9、HBcAg暴露游离，并经过多次洗涤处理后，用放免或酶免方法检测。如用EIA微板法检测血清HBcAg，被检标本不须任何处理，直接在微孔板内进行检测，应用于临床，可与乙型肝炎病毒标志物同步检测。 2.1.1检测 2.1.2血HBcAg与HBsAg的关系 HBcAgHBcAg出出现现的的阳阳性性率率与与HBsAgHBsAg的的出出现现密密切切相相关关，往往往往HBcAgHBcAg（）与与HBsAgHBsAg（）同同时时存存在在，而而HBsAgHBsAg（）时时不不一一定定会会出出现现HBcAgHBcAg（）。抗抗- -HBsHBs的的出出现现并并不不标标志志着着HBVHBV复复制制的的中中止止，而而
10、是是复复制制水水平平减减低低。不不能能以以HBsAgHBsAg阴阴性性就就排排除除HBVHBV感感染染，临临床床上上HBsAgHBsAg阴阴性性的的患患者者，只只要要HBcAgHBcAg检检出出阳阳性性，说说明明仍仍有有乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒复复制制。以以往往认认为为血血清清中中仅仅HBsAgHBsAg阳阳性性者者，病病毒毒为为非非复复制制相相，无无传传染染性性，但但这这种种患患者者中中，也也有有检检测测出出HBcAgHBcAg、HBV HBV DNADNA阳阳性性者者，故故判判断断单单项项血血清清HBsAgHBsAg阳性者的传染性时应慎重。阳性者的传染性时应慎重。 2.1.3血HBcAg与
11、e系统的关系 HBeAg阳性是HBV持续高水平复制和传染性强的标志，其与HBcAg、HBV DNA密切相关，并具有明显的平行关系。多年来，一直认为e抗原是复制标记物，由于HBeAg是HBcAg的降解产物，以可溶性蛋白形式存在，在结构上不及HBcAg与病毒颗粒关系密切，对判断病毒复制、评估传染性不及HBcAg敏感可靠。 2.1.3血HBcAg与e系统的关系 一般认为，当HBeAg/抗-HBe转换后，HBV复制趋于减少，没有传染性或传染性很小。HBeAg被公认为是HBV复制的标志物。但部分阴性者HBeAg的血清中仍可检出HBcAg和（或）HBV DNA，说明HBeAg的表达可能不是HBV复制的必然
12、结果，对HBeAg阴性感染者的带毒状态及抗-HBe表达的临床意义必须重新认识，不能忽视其具有传染性的可能。 2.1.4血HBcAg与HBV DNA、HBV DNA-P的关系 在慢性乙型肝炎患者中，血HBcAg与血HBV DNA有很好的相关性；而在急性期，尤其是在肝损害极期时，往往血HBcAg阳性，而血HBV DNA阴性，考虑为HBcAg从受免疫损伤的被感染的肝细胞内释放入血，这种情况甚至在病毒已终止复制后也可出现。对HBsAg慢性携带状态患者，判断HBV复制及传染性，HBcAg的敏感性最高，HBV DNA和HBV DNA-P次之，HBeAg敏感性低。 2.1.5不同肝病的检出率 慢性活动性肝炎
13、中血慢性活动性肝炎中血HBcAg阳性率阳性率明显高于明显高于ASC（无症状病毒携带者），（无症状病毒携带者），说明血说明血HBcAg阳性较多见于病变活动较阳性较多见于病变活动较重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的ASC。血清中的。血清中的HBcAg阳性与肝脏病变阳性与肝脏病变活动程度有关，且对估计预后有很好价活动程度有关，且对估计预后有很好价值。值。HBcAg检出结果是：肝硬化慢性检出结果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。 2.1.6检测血HBcAg的临床意义 （1）对血液内）对血液内HBV的开壳处理，能直接检的开壳处理，
14、能直接检测测HBcAg，能比，能比HBeAg更客观地反映血更客观地反映血HBV的的存在，以及作出数量多少的判断，可替代存在，以及作出数量多少的判断，可替代HBeAg而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒存而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标志。它与在的直接标志。它与HBV复制标志呈正相关，可复制标志呈正相关，可以反映以反映HBV活动的复制程度。活动的复制程度。HBcAg与乙型肝炎与乙型肝炎病毒其他五项标志物相比更是反映病毒其他五项标志物相比更是反映HBV复制的直复制的直接证据。它可与其他的接证据。它可与其他的HBV血清学标志物起到相血清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。互
15、配合和相互补充的作用。 2.1.6检测血HBcAg的临床意义 （2）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后胞，肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故能可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性乙直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期型肝炎早期HBcAg亦达高峰值，而且病情严重者亦达高峰值，而且病情严重者的的HBcAg水平也相应提高。慢性乙型肝炎患者，水平也相应提高。慢性乙型肝炎患者，血血HBcAg阴性者比阳性者有明显的临床及生化
16、指阴性者比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。标的改善。HBcAg含量与肝脏损害的情况有关，含量与肝脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。 2.1.6检测血HBcAg的临床意义 （3）从理论上讲，聚合酶链反应（）从理论上讲，聚合酶链反应（PCR）检）检测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现HBcAg阳性而阳性而HBV DNA阴性的结果。因此，两种阴性的结果。因此，两种检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具备检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具备PCR检测条件的单位，以酶联（检测条件的
17、单位，以酶联（ELISA）法试剂盒）法试剂盒在检测血清在检测血清HBV五项标志的同时，检测五项标志的同时，检测HBcAg不不仅能进一步了解病毒的复制情况，还可了解肝细胞仅能进一步了解病毒的复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且检测费用低廉，有临床损害和病情进展的程度，且检测费用低廉，有临床实用价值。实用价值。 2.1.6检测血HBcAg的临床意义 （4）在在对对献献血血员员的的筛筛选选中中，单单凭凭HBsAg的的测测定定来来判判断断是是否否受受HBV感感染染也也是是不不够够的的，会会漏漏诊诊HBsAg阴阴性性而而HBcAg和和抗抗-HBc阳阳性性的的乙乙型型肝肝炎炎患患者者，只只有有
18、三三者者同同时时检检测测，才才能能更更好好地地诊诊断断乙乙型型肝肝炎炎并并防防止止在在输输血血中中传传播，降低输血后肝炎的发生率。播，降低输血后肝炎的发生率。2.2肝组织肝组织HBcAg 2.2.1分布分布 HBcAg主要存在于主要存在于HBV颗粒和受染颗粒和受染的肝细胞中，的肝细胞中，HBV复制时复制时HBcAg表达于表达于肝细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。肝细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。Delladetsima et al发现胆管上皮细胞也是发现胆管上皮细胞也是HBV的适合宿主，的适合宿主，HBV能够在其中复制能够在其中复制并表达并表达HBcAg和和HBsAg抗原。抗原。 2.2.2
19、肝内肝内HBcAg与与HBV DNA关系关系 肝肝内内HBcAg与与HBV DNA的的分分布布区区域域常常较较一一致致，有有的的肝肝细细胞胞可可同同时时检检出出HBcAg和和HBV DNA，但但多多数数HBV DNA（）肝肝细细胞胞并并不不同同时时含含有有HBcAg。HBV高高复复制制期期HBcAg以以胞胞核核表表达达为为主主，无无或或很很少少在在胞胞质质内内表表达达；而而低低复复制制期期时时相相反反，HBcAg在在肝肝细细胞胞核核内内而而不不是是细细胞胞质质内内的的表表达达程程度度能能够够精精确确地地反反映映慢慢性性乙乙型型肝肝炎炎患患者者的的病病毒毒复复制制水水平平。肝肝HBcAg与与血血
20、清清HBV DNA水水平平呈呈正正相相关关。经经干干扰扰素素治治疗疗后后的的慢慢性性活活动动性性乙乙型型肝肝炎炎患患者者，HBcAg发生从核内向胞质的转换。发生从核内向胞质的转换。2.2.3肝内HBcAg与HBeAg关系 HBcAg与与HBeAg常同时表达在肝细胞内，常同时表达在肝细胞内，但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的制的ASC，常有较强的，常有较强的HBcAg胞核表达和胞核表达和HBeAg胞质表达；活动性慢性乙型肝炎时常胞质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有有HBcAg的胞质表达，因免疫清除而病毒减的胞质表达，因免疫清除而病毒减少，难以检出少，难
21、以检出HBeAg。作为免疫攻击的靶抗。作为免疫攻击的靶抗原，原，HBeAg不及不及HBcAg重要。重要。 2.2.4肝内肝内HBcAg与肝组织炎症活动关系与肝组织炎症活动关系 血血清清HBV DNA、HBeAg和和定定位位于于核核内内的的HBcAg都都与与肝肝组组织织的的损损害害程程度度无无关关。慢慢性性HBV感感染染者者肝肝组组织织中中浆浆膜膜型型HBcAg的的表表达达强强度度随随肝肝组组织织病病变变活活性性积积分分（HAI）评评分分值值的的增增高高而而增增强强，HAI评评分分值值低低者者核核型型HBcAg的的表表达达增增强强。HBcAg在在核核内内或或胞胞质质内内同同时时表表达达的的其其“
22、炎炎症症活活动动指指数数”高高于于HBcAg在在胞胞质质内内和膜内表达。和膜内表达。 2.2.4肝内肝内HBcAg与肝组织炎症活动关系与肝组织炎症活动关系 光镜下发现浆膜型HBcAg多分布于碎屑样坏死及灶性坏死区，浆膜型HBcAg阳性肝细胞常有各种变化，或明显萎缩，或肿胀变形。增生胞核抗原（PCNA）是再生肝细胞的标志，代表肝组织的炎症活性，PCNA与胞质HBcAg表达程度正相关，但不是胞核型HBcAg的独立影响因素。发生前-C区突变的HBV与未发生突变的野生株相比HBcAg在胞质内表达显著增高，并伴有较明显的肝组织炎症活动。HBcAg在胞质内表达预示预后不良。 2.2.4肝内肝内HBcAg与
23、肝组织炎症活动关系与肝组织炎症活动关系 乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中HBcAg、HBV DNA的阳性率较高。的阳性率较高。HBcAg颗粒在肝组织中颗粒在肝组织中主要呈弥漫的浆膜型分布，主要呈弥漫的浆膜型分布，HBcAg和和HBV DNA呈呈浆、膜型分布者，其肝组织中浆、膜型分布者，其肝组织中HBV DNA表达程度、表达程度、炎症活动度和纤维组织增生程度，明显较呈核型炎症活动度和纤维组织增生程度，明显较呈核型分布者高。分布者高。HBcAg及及HBV DNA阳性的肝组织，炎阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。 2.
24、2.4肝内肝内HBcAg与肝组织炎症活动关系与肝组织炎症活动关系 观察肝内颗HBcAg粒的分布类型，有助于判断HBV在肝组织中的复制状况；肝组织病变的活动程度。这可能是由于机体对呈浆、膜型分布的HBcAg和HBV DNA具有更加强烈的免疫反应，将肝内含活跃复制的HBV DNA和靶抗原HBcAg表达的肝细胞溶解破坏，以清除病毒所致。 2.2.5合并丁型肝炎时，肝内合并丁型肝炎时，肝内HBcAg表达特点表达特点 HBV合并合并HDV感染者的肝组织中，感染者的肝组织中，HBcAg和和HDAg阳性细胞分布关系不密切，阳性细胞分布关系不密切，HBcAg阳性细胞明显少于阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞，阳
25、性细胞，HBcAg主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达强度也较弱，表明少见到，表达强度也较弱，表明HDV感染者感染者HBV是低水平复制，是低水平复制，HDV可能有抑制可能有抑制HBV基基因复制或病毒抗原表达的作用，特别是在因复制或病毒抗原表达的作用，特别是在HDV复制活跃的阶段，即复制活跃的阶段，即HDAg大量表达时，大量表达时，HBV复制受到的抑制最为明显。复制受到的抑制最为明显。 2.2.6儿童肝内儿童肝内HBcAg表达特点表达特点 儿童肝内儿童肝内HBcAg主要表达于核内。肝内主要表达于核内。肝内HBcAg呈弥漫性分布者，多见于呈弥漫性分布者，多见
26、于10岁以内的岁以内的较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于10岁岁以上的较大儿童，以上的较大儿童，HBcAg呈局灶性分布比弥呈局灶性分布比弥漫性分布者，漫性分布者，ALT水平较高并伴有较明显的水平较高并伴有较明显的肝脏炎症活动。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝脏炎症活动。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内肝内HBcAg呈弥漫性分布者为病毒感染早期，呈弥漫性分布者为病毒感染早期，HBcAg呈局灶性分布并伴随呈局灶性分布并伴随HBeAg阳性者为阳性者为疾病短期内进展的标志。疾病短期内进展的标志。 2.2.7肝组织肝组织HBcAg检测的应用价值检测的应用价值 （1）检测肝组织
27、）检测肝组织HBcAg有助于有助于确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血清乙型肝炎病毒标志物阴性病例，于血清乙型肝炎病毒标志物阴性病例，在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝炎的不足。肝炎的不足。 2.2.7肝组织肝组织HBcAg检测的应用价值检测的应用价值 （2）有助于评估肝细胞坏死炎性活）有助于评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的预后。肝细胞内型肝炎的预后。肝细胞内HBcAg转阴和肝转阴和肝细胞坏死病变减轻具有一致性。细胞坏死病变减轻具有一致性。HBcAg浆浆膜型者显示
28、此种一致性，而核型则否，可膜型者显示此种一致性，而核型则否，可能由于肝细胞质、膜上的能由于肝细胞质、膜上的HBcAg作为靶抗作为靶抗原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞损害，而核型肝细胞损害，而核型HBcAg则不具有此种则不具有此种作用。作用。 2.2.7肝组织肝组织HBcAg检测的应用价值检测的应用价值 （3）HBcAg检测也是判断检测也是判断HBV复制状态的一项重要指标，肝组织复制状态的一项重要指标，肝组织HBcAg与与HBV DNA两种病毒复制标两种病毒复制标志物相关。研究结果证实肝组织志物相关。研究结果证实肝组织HBcAg检测具有多种实用价值，
29、值得检测具有多种实用价值，值得推荐。推荐。 2.3其他组织的其他组织的HBcAg表达表达 国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死胎进行研究，发现胎进行研究，发现HBcAg在多种脏器内均在多种脏器内均可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最低。说明低。说明HBV有可能在多种组织内复制并有可能在多种组织内复制并表达抗原。这可能是表达抗原。这可能是HBV通过产妇传播，通过产妇传播，导致新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿导致新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育不良和死亡的重要
30、因素。发育不良和死亡的重要因素。 3 3 小结小结 总之，充分认识总之，充分认识HBcAg的生物学特点和的生物学特点和其在血液、肝组织内表达的规律，有助于我其在血液、肝组织内表达的规律，有助于我们通过对们通过对HBcAg的检测而正确判断是否有的检测而正确判断是否有HBV的复制以及复制的强度，正确评估肝病的复制以及复制的强度，正确评估肝病活动及肝组织损害的程度，从而指导制定有活动及肝组织损害的程度，从而指导制定有效的治疗方案。对效的治疗方案。对HBcAg的强免疫原特性的的强免疫原特性的认识，可以指导我们研制更有效的预防或治认识，可以指导我们研制更有效的预防或治疗乙型病毒性肝炎的疫苗。疗乙型病毒性
31、肝炎的疫苗。 4 HBcAg的ELISA法检测 4.1试剂 HBcAg ELISA试剂由北京美迪科生物技术有限公司提供，试剂主要包括HBsAb包被板、HBcAg包被板、开壳剂、HBcAb-HRP结合物、底物液TMB等。 4.2 步骤（1）标本处理：取血清检测。（2）乙肝病毒Dane颗粒的分离。将HBsAb包被板用蒸馏水洗2次并拍干，每孔加样本、阴阳性对照血清各100ul（空白对照孔不加），用封片纸封好，45温育30分钟，弃去孔内液体并用蒸馏水洗7次并拍干。（3）加开壳剂释放出HBcAg。将上述的HBsAb包被板每孔加入100ul开壳剂（空白对照孔不加），置45温育30分钟。 4.2 步骤（4）
32、中和抑制法检测HBcAg。将上述的HBsAb包被板每孔中的开壳液转移50ul至相应的已用蒸馏水洗2次并拍干的HBcAg包被板中（注意每份样品要更换一个吸头，以防交叉污染），然后每孔加入HBcAb-酶结合物50ul（空白对照孔不加），混匀并封板，置45温育30分钟，弃去孔内液体并用蒸馏水洗7次并拍干。 4.2 步骤（5）显色。将上述的HBcAb包被板每孔中加底物液A、B各50ul，混匀，室温放置10-20分 钟 。 每 孔 中 加 入 终 止 液（ 2MH2SO4） 50ul， 混 匀 ， 选 择 波 长450nm，空白孔调零，上酶标仪测OD值。（6）结果判定。Cutoff值（界限值）=阴性对照OD均值/2.1。标本OD值Cutoff值，为阳性；OD值Cutoff值，为阴性。 4.2 步骤（5）显色。将上述的HBcAb包被板每孔中加底物液A、B各50ul，混匀，室温放置10-20分 钟 。 每 孔 中 加 入 终 止 液（ 2MH2SO4） 50ul， 混 匀 ， 选 择 波 长450nm，空白孔调零，上酶标仪测OD值。（6）结果判定。Cutoff值（界限值）=阴性对照OD均值/2.1。标本OD值Cutoff值，为阳性；OD值Cutoff值，为阴性。 结束结束
