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1、微生物的实验室培养经典版微生物的实验室培养经典版课题1微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手练习:说出无菌技术及相应的具体方法工作台操作者的手、衣着培养基培养皿玻棒、试管接种环牛奶无菌水饮用水纱布涂布器2.无菌范围： 实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三.菌落
2、鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算： 培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解 取纸蛋白胨、NaCl 琼脂 补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微
3、生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基四.大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6支试管，分别加入9ml无菌水1ml101
4、1ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍平板划线法：四.大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：1.接种：稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37恒温箱中培养12h24h后，观察并记录五.菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上42.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油1ml菌液20一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养：维生素、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：4.种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产化学成分：化学成分：物理性质：物理性质：天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基一.培养基：1.基本成分：2.特殊营养：3.pH、氧气的需求4.种类5.配制原则二.无菌技术 2.无菌范围3. 无菌种类及方法 1.无菌概念 课题1 微生物的实验室培养结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！23
