《学习情景三培养微生物课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《学习情景三培养微生物课件（39页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、微生物应用技术微生物应用技术学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长主要内容主要内容任务任务1 1 测定微生物生长测定微生物生长 任务任务2 理化因素对微生物生理化因素对微生物生长的影响长的影响1 12 2任务任务3 微生物的分离和纯培微生物的分离和纯培养技术养技术3 3学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长（1）微生物纯种分离、培养和常用的接种技）微生物纯种分离、培养和常用的接种技术以及菌落的初步鉴定；术以及菌落的初步鉴定；（2）生长曲线，生长的测量方法，环境对微）生长曲线，生长的测量方法，环境对微生物生长的影响等；生物生长的影响等；（3
2、）理化因素对微生物生长的影响。）理化因素对微生物生长的影响。【学习内容】学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长 掌握微生物纯种分离、培养和常用的接种技术以及菌落的掌握微生物纯种分离、培养和常用的接种技术以及菌落的初步鉴定；掌握生长曲线和生长的测量方法；掌握理化因素初步鉴定；掌握生长曲线和生长的测量方法；掌握理化因素对微生物生长的影响。对微生物生长的影响。【知识目标知识目标】【技能目标技能目标】 根据菌种需要，配制不同类型的培养基；完成菌种的根据菌种需要，配制不同类型的培养基；完成菌种的纯化及测量等操作过程。纯化及测量等操作过程。任务任务1 测定微生物生长测定微生物生
3、长学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长 为为了了全全面面对对微微生生物物的的测测量量，需需要要了了解解微生物生长曲线的相关内容。微生物生长曲线的相关内容。任务分析任务分析任务任务1 1 测定微生物生长测定微生物生长一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖生理生理生理生理生命活动机理（食、住）生命活动机理（食、住）生命活动机理（食、住）生命活动机理（食、住）生命活动生命活动生命活动生命活动营养、呼吸、环境卫生营养、呼吸、环境卫生营养、呼吸、环境卫生营养、呼吸、环境卫生营养物及其获取方式营养物及其获取方式营养物及其获取方式营养物及其获取方式营养营养营养营养营养物质的代谢营
4、养物质的代谢营养物质的代谢营养物质的代谢 呼吸呼吸呼吸呼吸那些环境因素使细菌病、死？那些环境因素使细菌病、死？那些环境因素使细菌病、死？那些环境因素使细菌病、死？环境卫生环境卫生环境卫生环境卫生任务实施的相关专业知识任务实施的相关专业知识任务任务1 1 测定微生物生长测定微生物生长个体生长个体生长细胞物质有规律地、不可逆增加，导致细胞体细胞物质有规律地、不可逆增加，导致细胞体积扩大的生物学过程积扩大的生物学过程。群体生长：群体生长：在一定时间和条件下细胞数量的增加。在一定时间和条件下细胞数量的增加。繁殖繁殖微生物生长到一定阶段由于细胞结构的复制与重建微生物生长到一定阶段由于细胞结构的复制与重建
5、并通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增并通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。加的生物学过程。提问：提问：为什么这里不考察细菌个体的生长呢？为什么这里不考察细菌个体的生长呢？个体太小，难观察计量个体太小，难观察计量; 群体细菌对环境产生影响群体细菌对环境产生影响任务实施的相关专业知识任务实施的相关专业知识一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖各类细菌都是倾向于各类细菌都是倾向于群居（物以类聚）群居（物以类聚）一一山山不不容容二二虎虎n n提问：弱势生物的群居优势是什么？弱势生物的群居优势是什么？n生存状况提高，攻防具佳生存状况提高，攻防具佳n（攻）（攻）
6、群居的细菌获得营养的能力大大高于游离群居的细菌获得营养的能力大大高于游离的细菌，的细菌， （防）（防）群居的细菌不易被天敌伤害，群居的细菌不易被天敌伤害，还能释放类似外激素的调节因子，使群体主动适还能释放类似外激素的调节因子，使群体主动适应环境的变化，可有性生殖；应环境的变化，可有性生殖；n团结就是力量团结就是力量一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖n n外界因素引起的外界因素引起的外界因素引起的外界因素引起的细菌数量的增加、停滞、衰细菌数量的增加、停滞、衰细菌数量的增加、停滞、衰细菌数量的增加、停滞、衰减等变化。减等变化。减等变化。减等变化。n n提问：提问：提问：提问：如何研究呢？如何研究
7、呢？如何研究呢？如何研究呢？ n n测菌数量变化与外因的关系测菌数量变化与外因的关系测菌数量变化与外因的关系测菌数量变化与外因的关系细菌群体力量改变环境通常都是将细菌群体作为研究对象，考察细通常都是将细菌群体作为研究对象，考察细菌群体的菌群体的生长规律生长规律“生、老、病、死生、老、病、死”。n n提问：细菌群的提问：细菌群的提问：细菌群的提问：细菌群的“ “生、老、病、死生、老、病、死生、老、病、死生、老、病、死” ”表现为何呢表现为何呢表现为何呢表现为何呢？一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法1.测生长量测生长量（1）测体积）测体
8、积 初步比较。初步比较。 把待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或把待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察其体积等。进行一定时间的离心，然后观察其体积等。一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖（2）称重法）称重法方法方法 ：离心法或过滤法，测定样品的湿重或干重。：离心法或过滤法，测定样品的湿重或干重。已知已知单个细菌的平均重量单个细菌的平均重量 除法计算除法计算细菌的细菌的湿湿重量重量10-1510-11g/个细胞个细胞干重约为干重约为湿重的湿重的1020。干重法干重法n n方法：方法：方法：方法：含菌水样在含菌水样在含菌水样在含菌水样在105105110110下进行
9、干燥恒重下进行干燥恒重下进行干燥恒重下进行干燥恒重（本质测水中本质测水中本质测水中本质测水中悬浮物重量悬浮物重量悬浮物重量悬浮物重量MLSSMLSS或或或或MLVSSMLVSS）。）。）。）。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法1.测生长量测生长量悬浮物无机物悬浮物无机物+ +有机物（包括细菌）有机物（包括细菌）提问：提问：如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？高温高温(550)灼烧灼烧n n无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解n n提提
10、提提问问问问：什什什什么么么么情情情情况况况况下下下下可可可可以以以以直直直直接接接接用用用用悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物的的的的重重重重量量量量表表表表示细菌的重量？示细菌的重量？示细菌的重量？示细菌的重量？n n悬浮物中绝大多数是细菌。一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖1.测生长量测生长量（2）称重法）称重法悬浮物中绝大多数为细菌时细胞数目细胞数目=MLSS个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量离心沉淀离心沉淀 滤膜过滤滤膜过滤计算计算105110下进行干燥下进行干燥恒重恒重恒重恒重称重称重或或或或MLSSMLSS悬浮物悬浮物悬浮物悬浮物（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的
11、测定方法除细菌外还有大量无机悬浮物时 W无无MLVSS挥发性悬浮物挥发性悬浮物MLSS W无 =细菌群体的干重量细菌群体的干重量细胞数目细胞数目= MLVSS个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量550下灼烧下灼烧2h称重称重105110下进下进行干燥恒重行干燥恒重称重称重MLSS（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（3）有大量非细菌有机悬浮物时提问：提问：如何测定呢？如何测定呢？不能用重量法，应改用其他方法。不能用重量法，应改用其他方法。总总体体来来说说重重量量法法方方法法误误差差较较大大，一一般般只只作作为为菌菌数数粗略估算粗略估算如如活活性性污污泥泥测测定定（以
12、以重重量量MLSS、MLVSS间间接接表表示细菌数量示细菌数量）（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（3）比浊计数法）比浊计数法浊浊细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度提问：提问：提问：提问：如何定量二者关系呢？如何定量二者关系呢？如何定量二者关系呢？如何定量二者关系呢？n n细细细细菌菌菌菌不不不不完完完完全全全全透透透透光光光光，一一一一定定定定范范范范围围围围内内内内菌菌菌菌溶溶溶溶液的混浊度与菌数量成液的混浊度与菌数量成液的混浊度与菌数量成液的混浊度与菌数量成正比正比正比正比原理原理：菌体的生长可使培养液产生浑浊现象。：菌体的生长可使培养液产生浑浊现象。方法方法：用
13、比浊计、比色计、分光光度计测定培养液的浊用比浊计、比色计、分光光度计测定培养液的浊度，用透光率或光密度表示菌悬液的浓度，再对照标准曲线，度，用透光率或光密度表示菌悬液的浓度，再对照标准曲线，即可求出菌数。即可求出菌数。 （一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法 (2)(2)比浊法比浊法（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法 制标准曲线（ODNo）测菌液浊度，查图表得出细菌数量测菌液浊度，查图表得出细菌数量浊浊度度仪仪或或7 72 21 1分分光光光光度度仪仪（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法仪器：仪器：浊度计、分光光度计等浊度
14、计、分光光度计等仪器测出菌液的浓度，然后再仪器测出菌液的浓度，然后再对照标准曲线，就可查出相似对照标准曲线，就可查出相似的菌数。的菌数。注意注意: :培养液的颜色太深会影培养液的颜色太深会影响测定结果，不要混杂其他物响测定结果，不要混杂其他物质。质。适用范围：适用范围：用于溶液的总细胞用于溶液的总细胞的计数。的计数。缺点：灵敏度较差缺点：灵敏度较差优点：简便、快速、不干扰或优点：简便、快速、不干扰或不破坏样品。不破坏样品。浊度计浊度计分光光度计分光光度计（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（4） 含含N测定法测定法原原理理：细细胞胞蛋蛋白白质质量量是是比比较较稳稳定定的
15、的，可可反反映映微微生生物物的的生生长长量量。通通过过菌菌体体含含氮氮量量的的测测定定求求出出蛋蛋白白质质的的含含量量，并并大大致致算算出细胞物质的重量。出细胞物质的重量。方法：方法：从一定量培养物中分离出菌体，洗涤后用从一定量培养物中分离出菌体，洗涤后用凯氏微量定氮凯氏微量定氮法法测定出总氮含量，其值乘以测定出总氮含量，其值乘以6.256.25，大多数生物包括细菌，细胞内的大多数生物包括细菌，细胞内的蛋蛋白质氮含量白质氮含量比较稳定，一般为蛋比较稳定，一般为蛋白质干重白质干重1516，平均为平均为16。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法 2.计繁殖数计繁殖数 提问：
16、提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？繁殖繁殖提问：提问：细菌繁殖的可见现象是什么？细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落产生菌落（固体培养基培养）（固体培养基培养）、菌液混浊菌液混浊（液体培养基培养）液体培养基培养）计数原理计数原理：一个一个细菌细菌可繁殖成可繁殖成一个一个菌落或一群细菌菌落或一群细菌.缺点：缺点：慢慢 分分固体培养法和液体培养法固体培养法和液体培养法（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法 2.计繁殖数计繁殖数计计算算微微生生物物的的个个体体数数目目。适适宜宜于于单单细细胞胞状状态态的的微微生物或丝状微
17、生物所产生的孢子。生物或丝状微生物所产生的孢子。（1）显微镜直接计数法）显微镜直接计数法又称为全菌计数法，又称为全菌计数法，借助显微镜观察测定借助显微镜观察测定n n优点：优点：优点：优点：快速快速快速快速n n提问提问提问提问: :有哪些缺点有哪些缺点有哪些缺点有哪些缺点? ?n n缺点：缺点：缺点：缺点：不能区分细菌的死活。不能区分细菌的死活。不能区分细菌的死活。不能区分细菌的死活。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖（1）显微镜直接计数法）显微镜直接计数法计数器(血球计数板）测定法0.050.052 2cmcm2 225250.
18、1ml0.1ml菌液菌液1625格或25*16格（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法提提问问：数数了了125个个小小格格中中有有90个个细细菌菌，样样品品中中的的细细菌菌浓浓度度是是多少？多少？(90个个125) 400 / 0.1ml =2880个个/ml适用范围：适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物细细菌菌个个体体若若太太小小、过过多多，由由于于每每一一小小格格中中细细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数一般数125个小格个小格），），折算折算样品
19、细菌浓度；样品细菌浓度；（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法2.计繁殖数计繁殖数 (2)(2)平板菌落计数法平板菌落计数法 通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法。接确定其活菌数的方法。依据：依据：在稀释情况下一个菌落是由一个活细胞在稀释情况下一个菌落是由一个活细胞繁殖形成的。繁殖形成的。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法无菌水无菌水n（2）平板计数法第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀
20、释得到不同得到不同稀释度稀释度 （10-x）菌液菌液菌样被菌样被菌样被菌样被无菌水无菌水无菌水无菌水不同稀不同稀不同稀不同稀释倍率释倍率释倍率释倍率后后后后平板平板平板平板培养图培养图培养图培养图 10-2 10-3 10-4 10-5 各各取取1ml于于培培养养皿皿上上,再再加加入入不不烫烫手手固固体体培培养养基基平板上混合均匀冷却。平板上混合均匀冷却。第三步：培养第三步：培养稀稀稀稀 释释释释 度度度度过过过过 低低低低 ，菌菌菌菌 落落落落 密密密密集集集集 无无无无 法法法法计数计数计数计数可可可可以以以以计计计计数数数数，但但但但数数数数量量量量过过过过多多多多，费费费费时时时时费力
21、费力费力费力数量合数量合数量合数量合适，统适，统适，统适，统计计算，计计算，计计算，计计算，作为结作为结作为结作为结果果果果数数数数量量量量太太太太少少少少，误误误误 差差差差 因因因因 素素素素太太太太 大大大大 ， 不不不不做计数做计数做计数做计数第二步：接种平板第二步：接种平板每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个菌落菌落菌落菌落一微生物的生长繁殖一微生物的生长繁殖一一般般计计数数平平板板的的细细菌菌生生长长菌菌落落数数以以30300个个为为宜。宜。n n第四步第四步第四步第四步： 计数计数计数计数n细菌数量细菌数量=？n细菌数量细菌数量=数出的
22、菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为125cfun细菌数量细菌数量=125/10-5=1.25107cfu/mLn 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法平板计数法是采用最广的一种活菌计数法n如国标法水中如国标法水中细菌总数细菌总数的测定的测定 。n注意注意：作空白及取平行样（作空白及取平行样（2 23 3组）均值减小误差组）均值减小误差平均（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（3）膜过滤法）膜过滤法方法：方法：用微孔薄膜过滤定量的空气或水样，菌体用微孔薄膜过滤定量的空气或水样，菌体便被截留在滤膜上，然后取下滤膜进行培养，
23、便被截留在滤膜上，然后取下滤膜进行培养，计数其上的菌落数从而求出样品中所含的菌数。计数其上的菌落数从而求出样品中所含的菌数。适用范围适用范围：对于细胞总数对于细胞总数10106 6个个/ml/ml的液体样品。的液体样品。对膜干燥后，染色、计数对膜干燥后，染色、计数（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（3 3）薄膜计数法）薄膜计数法薄膜薄膜微孔滤膜微孔滤膜（0.45m） 滤膜培养滤膜培养滤膜培养滤膜培养膜有菌面冲上膜有菌面冲上膜有菌面冲上膜有菌面冲上n n原理原理原理原理膜抽滤膜抽滤膜抽滤膜抽滤（细菌浓（细菌浓（细菌浓（细菌浓缩）缩）缩）缩）+ + + + 膜平板培养膜平
24、板培养膜平板培养膜平板培养 + + + + 计计计计数数数数抽滤抽滤抽滤抽滤（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法统计计数统计计数提提问问：假假如如 测测出出2 25050cfucfu菌菌落落，抽抽滤滤了了50ml50ml自自来来水水，自来水中菌浓度是多少呢？自来水中菌浓度是多少呢？ 25050ml=5cfu/ml自来水自来水样品中的细菌数量样品中的细菌数量=菌落数菌落数抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数n n提问：提问：提问：提问：如何用活菌计数法测定较脏的水样？如何用活菌计数法测定较脏的水样
25、？如何用活菌计数法测定较脏的水样？如何用活菌计数法测定较脏的水样？n n减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法（4 4）稀释培养法）稀释培养法原理原理：菌液经多次稀释后，菌数可随之减少直至没有。：菌液经多次稀释后，菌数可随之减少直至没有。可从最后有菌生长的几个稀释度的可从最后有菌生长的几个稀释度的3 35 5次重复中求次重复中求最大概率数。最大概率数。 所以又叫所以又叫MPN(MPN(最大可能数量最大可能数量) )法。法。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定
26、方法 （4）最近似法）最近似法特点：特点：液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数又称又称MPN法法 （或最可能数法）（或最可能数法）例如例如测定测定SRB（硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，厌氧厌氧）的数量）的数量提问：提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板法计数吗？为什么？一一般般不不能能，厌厌氧氧菌菌暴暴露露在在空空气气中中不不能能生生长长（除除非非厌厌氧氧培养箱）培养箱）n对这类菌可以利用它们生长时产生的对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征硫化亚铁黑色特征进进行行深层隔氧液体培养深层隔氧液体培养，按，按MPNMPN法进行计数。法进行计数。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法适合范围：适合范围：测定土壤微生物中特定生理群的数量和检测测定土壤微生物中特定生理群的数量和检测污水、牛奶中特定微生物类群的数量污水、牛奶中特定微生物类群的数量。（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法浓度浓度长菌管数长菌管数1010-4-40 0MPN=12MPN=120 0个个/100mL/100mL1010-5-52 21010-6-62 2菌数菌数120120稀释培养法稀释培养法1010-4-41010-5-51010-6-6（一）微生物生长繁殖的测定方法（一）微生物生长繁殖的测定方法
