《生物化学》教学课件：08 核酸化学

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1、第第08章章核酸化学核酸化学 龙中儿生命科学学院第08章 核酸化学 核苷酸及核酸的共价结构DNA的结构RNA的结构核酸的性质核酸的水解核酸概述第一节 核酸概述 核酸的发现核酸的概念1869年瑞士科学家F. Miescher（米歇尔）脓细胞核中分离到一磷含量非常丰富的物质核素（nuclein）呈酸性核酸（nucleic acid, NA） 第一节 核酸概述 一、核酸的发现核酸：由几几十十个个甚至成成千千上上万万个个核核苷苷酸酸通过3，5-磷磷酸酸二二酯酯键键连接而成的具有一定空间结构的大分子化合物（线形多聚核苷酸）线形多聚核苷酸）。 基本结构单位是核苷酸。nucleic acid ribonuc

2、leic aciddeoxyribonucleic acid RNA DNA第一节 核酸概述 二、核酸的概念第二节 核苷酸及核酸的共价结构 核苷酸核酸的共价结构第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸核酸磷酸 核苷 碱基 戊糖 核苷酸 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基（base）嘧啶碱（pyrimidine, Py） 又称含氮碱嘌呤碱（purine, Pu） 碱基稀有碱基（purine, Pu） 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基母体化合物为嘧啶的衍生物核酸中常见的嘧啶：嘧啶碱胞嘧啶胸腺嘧啶尿嘧啶其它嘌呤（核酸的代谢产物）：黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸等 第二

3、节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基嘌呤碱腺嘌呤鸟嘌呤第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基修饰碱基也称稀有碱基（minor base） 甲基化1）互变异构现象 uracil 酮式 uracil 烯醇式第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基 性质2）碱基的紫外吸收 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基 性质最大吸收峰在 260nm附近3）碱基的解离 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基 性质3）碱基的解离 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸1. 碱基 性质结构 -D-核糖-D-2-脱氧核糖-D-2-O-甲基核糖第二

4、节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸2. 戊糖（pentose） 核苷中的糖苷键：型的C-N苷 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸3. 核苷（ nucleoside ）是一种N-糖苷，由戊糖的苷羟基和碱基脱水缩合而成。概念概念第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸3. 核苷核苷核苷中戊糖与碱基的连接方式： 腺嘌呤核苷 （adenosine）胞嘧啶脱氧核苷 （deoxycytidne）连接方式连接方式第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸3. 核苷天然核苷：一般为反式构象 构象构象核苷 核糖核苷（核苷）：A、G、C、U 脱氧核糖核苷： dA、dG、dC、dT （脱氧核苷）第二节

5、 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸3. 核苷修饰核苷（modified nucleoside）种类种类也称稀有核苷（minor nucleoside） 修饰核苷包括三种情况: 由修饰碱基和糖组成的核苷 由非修饰碱基和2-O-甲基核糖组成的核苷 由碱基与糖连接方式特殊的核苷 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸3. 核苷核苷修饰核苷修饰核苷第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸4. 磷酸（phosphoric acid）第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸（nucleotide, Nt）由核苷和磷酸脱水缩合而成，是核苷的磷酸酯核苷酸嘌呤核苷酸 嘧啶核苷酸 第二节 核

6、苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸核苷酸（核糖）核苷酸（ribonucleotide） 脱氧（核糖）核苷酸(deoxyribonucleotide) 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸核糖核苷酸核糖核苷酸(2-AMP)(3-AMP)(5-AMP)第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸核糖核苷酸核糖核苷酸第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸脱氧核糖核苷酸脱氧核糖核苷酸3- dAMP5- dAMP第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸脱氧核糖核苷酸脱氧核糖核苷酸第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸核酸

7、核苷酸简称RNA 腺嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸胞嘧啶核苷酸尿嘧啶核苷酸腺苷酸（AMP）鸟苷酸（GMP）胞苷酸（CMP）尿苷酸（UMP）DNA 脱氧腺嘌呤核苷酸脱氧鸟嘌呤核苷酸脱氧胞嘧啶核苷酸脱氧胸腺嘧啶核苷酸脱氧腺苷酸（dAMP）脱氧鸟苷酸（dGMP）脱氧胞苷酸（dCMP）脱氧胸苷酸（dTMP）第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质性质1）互变异构现象 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质2）紫外吸收 四种单核苷酸吸收光谱的标准比值 250/260 280/260 290/2602.07.02.07.02.07.05-CMP0.460.842.100.99

8、1.550.305-AMP0.850.800.220.150.030.0035-UMP0.740.730.380.400.030.035-GMP1.221.150.680.680.400.28光密度 比值pH核苷酸第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质性质第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质3 3）核苷酸的两性解离和等电点）核苷酸的两性解离和等电点 胞嘧啶核苷酸的解离胞嘧啶核苷酸的解离 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质3 3）核苷酸的两性解离和等电点）核苷酸的两性解离和等电点 胞嘧啶核苷酸的解离胞嘧啶核苷酸的解离 四种核苷酸的

9、解离曲线 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质性质可在pH2.05.0之间分离各种核苷酸 pH3.5时各核苷酸所带电荷 核苷酸 磷酸基电荷 碱基的电荷 净电荷 AMP-1+0.54-0.46GMP-1+0.05-0.95CMP-1+0.84-0.16UMP-1+0-1第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸5. 核苷酸性质性质NTP类的高能磷酸化合物 AMPADPATP第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸6. 细胞内游离的核苷酸及其重要衍生物NTP类的高能磷酸化合物 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸6.细胞内游离的核苷酸及其重要衍生物环状核苷酸 第二节

10、核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸6. 细胞内游离的核苷酸及其重要衍生物细胞内 :磷酸二酯酶 5-AMP 腺苷酸环化酶 （AC）ATPcAMP + PPi环状核苷酸 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸6. 细胞内游离的核苷酸及其重要衍生物核苷多磷酸类 第二节 核苷酸及核酸的共价结构 一、核苷酸6. 细胞内游离的核苷酸及其重要衍生物第二节 核苷酸及核酸的共价结构 二、核酸的共价结构构成核酸的核苷酸之间的连接方式：3，5磷酸二酯键第二节 核苷酸及核酸的共价结构 二、核酸的共价结构多聚核苷酸骨架：糖和磷酸侧链：碱基两个末端： 5端3端方向性：第二节 核苷酸及核酸的共价结构 二、核酸的共价结构

11、核酸链的表示方法：一般从5向3端方向书写。线条式：文字式：A5P3T5P3G5P3C5P3A5P3pATGCA第三节 DNA的结构 DNA的一级结构DNA的二级结构DNA的三级结构DNA的结构与功能的关系第三节 DNA的结构一、DNA的一级结构1. 概念DNA是由四种脱氧核苷酸（每一种脱氧核苷酸都有许多个）通过3，5磷酸二酯键连接起来的、具有一定空间结构的直线形或环形多聚体。DNA的的一一级级结结构构指DNA分子中脱氧核苷酸的组成及其排列顺序二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构1. DNA分子的碱基组成特征DNA分子由两种脱氧嘧啶核苷酸（dCPM和dTMP）和两种脱氧嘌呤核苷酸（dAMP

12、和dGMP）组成20世纪40年代chargaff规则 DNA碱基组成有种属的特异性，但没有组织、器官特异性。 A+G=T+C ； A=T；G=CX射线衍射观察二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构2DNA双螺旋结构模型1953年Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构（double-helical structure）。 2DNA双螺旋结构模型第三节 DNA的结构结构要点： 两条反反向向平平行行多核苷酸链绕同一轴成右手双螺旋。 双螺旋的直径，螺距大沟（深沟） 小沟（浅沟） 二、DNA的二级结构 2DNA双螺旋结构模型第三节 DNA的结构二、DNA的二级结构 碱基配对 碱基的序列 碱基

13、、糖、磷酸的位置。二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构3. 稳定DNA双螺旋结构的化学键互补碱基对之间的氢键 碱基堆积力磷酸基上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键 4. DNA二级结构的其他形式Watson Crick DNA双螺旋结构（B型DNA） 当DNA盐的种类盐的种类和相对湿度相对湿度改变时，DNA的构象发生改变。 不同DNA纤维的空间结构 类型结晶状态ANa盐，相对湿度75%时结晶BNa盐，相对湿度92%时结晶C锂盐，相对湿度66%时结晶二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构A-DNA 与B-DNA相同处：反向的两条多核苷酸链，右手螺旋与B-DNA不同点 :螺体宽而短

14、，直径2.55nm；11个核苷酸一圈，螺距2.46nm 碱基的倾角大一些：倾角19 A-DNA和B-DNA之间可以相互转换，推测在转录时，DNA分子发生BA的转变 二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构4. DNA二级结构的其他形式A-DNA 二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构4. DNA二级结构的其他形式二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构C-DNA 4. DNA二级结构的其他形式C型DNA的一些数据与B型DNA很相似 5. DNA二级结构的研究进展 Z-DNA 1979年，美国ARich等人发现了左旋DNA（左手DNA双螺旋结构）晶体X-光衍射分析 人工合成的d(Cp G

15、p Cp Gp Cp Gp)二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构5. DNA二级结构的研究进展 Z-DNA Z-DNA的生物功能：与基因表达、基因调控有关。 二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构5. DNA二级结构的研究进展 三螺旋三螺旋DNA 四螺旋DNA 二、DNA的二级结构 第三节 DNA的结构5. DNA二级结构的研究进展 聚核苷酸dAGGG(TTAGGG)3的四螺旋构像三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构1. DNA三级结构的概念 指DNA在双螺旋结构基础上的进一步扭曲所形成的特定构象。线形结构环形结构DNA开环结构超螺旋结

16、构三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构1. DNA三级结构的概念 指DNA在双螺旋结构基础上的进一步扭曲所形成的特定构象。线形结构环形结构DNA开环结构超螺旋结构三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构2. DNA的超螺旋结构 超螺旋（Super coil）即是螺旋的螺旋（covalently closed circular DNA, cccDNA）DNA双螺旋的扭曲形成超螺旋 三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构互绕数()螺旋圈数()超螺旋数 ()三、DNA

17、的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构互绕数()在双螺旋DNA中，一条链以右手螺旋绕另一条链缠绕的次数三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构互绕数()螺旋圈数()超螺旋数 ()在双螺旋DNA中，一条链以右手螺旋绕另一条链缠绕的次数在双螺旋DNA中螺旋的轮数指DNA双螺旋绕超螺旋轴的次数三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构负超螺旋 正超螺旋三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构3. 共价闭合环状双链DNA的超螺旋结构比连环差()L0：DNA处在共价闭合的松弛状态时的互绕

18、数L：变化后的互绕数4. 开环DNA（open circular DNA, ocDNA）也称松环DNA (relaxed circular DNA, rcDNA)三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构+5. 连环DNA（Catenanes DNA） 单体二聚体三、DNA的三级结构 第三节 DNA的结构DNA是主要的遗传物质，是遗传信息的载体第三节 DNA的结构四、DNA结构与功能的关系基因指导蛋白质的合成基因是DNA分子上的一段序列DNA双螺旋结构提供了遗传信息传递的基础第四节 RNA的结构 RNA的类别tRNA的结构rRNA的结构mRNA的结构RNA的一般结构第四节 RNA的结构一、RN

19、A的类别 信使RNA（messenger RNA, mRNA） 转移RNA（transfer RNA, tRNA） 核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 不均一的核RNA（hnRNA） 核内小分子RNA（snRNA） 第四节 RNA的结构二、RNA的一般结构 大多数天然RNA是一条单链，通过自身回折形成部分螺旋区，部分非螺旋区 第四节 RNA的结构二、RNA的一般结构 大多数天然RNA是一条单链，通过自身回折形成部分螺旋区，部分非螺旋区 也有少数病毒RNA，如水稻矮缩病毒、呼肠孤病毒、伤瘤病毒等RNA是双双链链螺螺旋旋，类似于DNA的双螺旋结构的双螺旋结构。 RNA中双螺旋结

20、构稳定的因素主要是碱碱基基堆积力堆积力，其次是氢键氢键 第四节 RNA的结构三、mRNA的结构1. mRNA的一级结构 mRNA前体 断裂、修剪、修饰 成熟mRNA（有功能的RNA） 1. mRNA的一级结构 真核生物mRNA的一级结构可用下式表示 :5-帽子帽子 5-非密码区非密码区 密码区密码区3-非密码区非密码区 polyA 第四节 RNA的结构三、mRNA的结构5-cap：m7G(5)ppp5Np 第四节 RNA的结构三、mRNA的结构1. mRNA的一级结构 5-cap第四节 RNA的结构三、mRNA的结构1. mRNA的一级结构 5-cap5-cap：m7G(5)ppp5Np 5-

21、cap m7G(5)ppp5NmpNp m7G(5)ppp5NmpNmpNp cap0cap1cap2第四节 RNA的结构三、mRNA的结构1. mRNA的一级结构 5-cap5-cap：m7G(5)ppp5Np 5-cap m7G(5)ppp5NmpNp m7G(5)ppp5NmpNmpNp cap0cap1cap2功能：(1) 防止mRNA被核酸酶降解(2) 为mRNA翻译活性所必需(3) 与蛋白质合成的正确起始有关第四节 RNA的结构三、mRNA的结构1. mRNA的一级结构 5-cap3-polyA : polyA的残基数20200个，或更多。polyA的功能： (1) 保护mRNA，

22、免受核酸外切酶的作用。(2) 与翻译有关，没有polyA翻译活性降低。(3) 与mRNA从细胞核转移到细胞质有关。1. mRNA的一级结构 第四节 RNA的结构三、mRNA的结构3-polyA第四节 RNA的结构三、mRNA的结构2. mRNA的二级结构 第四节 RNA的结构四、tRNA的结构 1. tRNA的一级结构及其特点Mr较小（Mr25000），沉降常数4S。 各种tRNA的链长很接近，一般在7393个核苷酸之间。 tRNA分子中约20多个位置上的核苷酸是保守的（不变和半不变的） 各种tRNA的3一端为CCA；5一端大多数为pG，少数为pC。 tRNA分子中含有较多的修饰成分。 第四节

23、 RNA的结构四、tRNA的结构 2. tRNA的二级结构aa接受臂二氢尿嘧啶环反密码环额外环TC环第四节 RNA的结构四、tRNA的结构 2. tRNA的二级结构1980年牛心线粒体tRNAser只有63个核苷酸，沉降常数3S，缺少D环和D臂，呈二叶草型。近年来发现2种线虫线粒体tRNA也不是标准的三叶草结构。 第四节 RNA的结构四、tRNA的结构 3. tRNA的三级结构第四节 RNA的结构五、rRNA的结构 rRNA占细胞RNA总量的80%，是细胞质核糖体的组分原核生物核糖体 70S50S30S5S rRNA， 23S rRNA34种蛋白质16S rRNA21种蛋白质第四节 RNA的结

24、构五、rRNA的结构 1. rRNA的一级结构特点真核生物核糖体 80S60S40S5SrRNA，5.8SrRNA，28SrRNA49种蛋白质18SrRNA33种蛋白质第四节 RNA的结构五、rRNA的结构 1. rRNA的一级结构特点2rRNA的二级结构 第四节 RNA的结构五、rRNA的结构 第五节 核酸的性质 核酸的一般性质 核酸的紫外吸收 沉降特性 核酸的凝胶电泳 核酸的变性 核酸的复性 核酸的杂交 核酸的水解分子大小第五节 核酸的性质一、核酸的一般性质 性状溶解度第五节 核酸的性质一、核酸的一般性质 DNA 1061010或更大RNA 104106 或更大 1. 分子大小第五节 核酸

25、的性质一、核酸的一般性质 2. 性状DNA为白色纤维状固体RNA为白色粉末 第五节 核酸的性质一、核酸的一般性质 3. 溶解度不溶于一般的有机溶剂微溶于水核酸的钠盐在水中溶解度较大 第五节 核酸的性质二、核酸的紫外吸收 核酸中碱基的共轭双键紫外区有强烈吸收（最大吸收峰在260nm附近）核酸的定性/定量测定紫外分光光度法摩尔磷消光系数法第五节 核酸的性质二、核酸的紫外吸收 1. 紫外分光光度法 首先根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度纯RNA：A260/A280=2.0纯DNA：A260/A280=1.8样品中含有杂蛋白或苯酚导致A260/A280比值降低纯的核酸样品可根据260nm的

26、光吸收值算出其含量若260nm光吸收值为1：相当于50g/ml双螺旋DNA或相当于40g/ml单链DNA或RNA或相当于20g/ml寡核苷酸。第五节 核酸的性质二、核酸的紫外吸收 2. 摩尔磷消光系数法 ：摩尔磷消光系数A：样品的光吸收值 C：每升溶液中磷的摩尔数 L：光径 （molar absorptivity） 知道了磷的含量就可知核酸的含量在在pH7.0时；时；DNA的的 为为6600, RNA的的 为为77007800 1. 核酸浮力密度的测定 第五节 核酸的性质三、沉降特性 经密度梯度沉降平衡法测出的密度1. 核酸浮力密度的测定 第五节 核酸的性质三、沉降特性 氯化绝（CsCl）密度

27、梯度沉降平衡 用12个已知浮力密度的标准DNA样品作参考 ：未知DNA的密度 0：标准DNA的密度 ：角速度（弧度/秒） r： 未知DNA与转轴之间的距离 r0：已知DNA与转轴之间的距离 第五节 核酸的性质三、沉降特性 1. 核酸浮力密度的测定 式中：第五节 核酸的性质三、沉降特性 2. 核酸浮力密度的影响因素 G-C含量DNA的构象2. 核酸浮力密度的影响因素 G-C含量含量G-C对的含量与浮力密度之间呈正比关系 Rolfe-Meselson导出了如下公式： =0.100（G-C%）+1.658(g/cm3) 知道了浮力密度就可计算出G-C对的含量 第五节 核酸的性质三、沉降特性 2.核酸

28、浮力密度的影响因素核酸的构象核酸的构象：RNA环状DNA线状DNA蛋白质 DNA 沉降第五节 核酸的性质三、沉降特性 核酸研究中最常用的方法 优点：简单、快速、灵敏、成本低 通过凝胶电泳，可以：（1）分离核酸，确定核酸的纯度 （2）测定核酸的分子大小 （3）估计核酸的构象 第五节 核酸的性质四、核酸的凝胶电泳 凝胶电泳兼有分子筛效应和电荷效应 1. 琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）琼脂糖凝胶电泳的迁移率主要与分子大小、胶浓度、核酸构象、电流等有关。 适用于大分子核酸，一般用于DNA分析。 第五节 核酸的性质四、核酸的凝胶电泳 2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （

29、polyacrylamide gel electrophoresis） 用于分析RNA或Mr小于1000bp的DNA片段 第五节 核酸的性质四、核酸的凝胶电泳 1. 核酸变性的概念 第五节 核酸的性质五、核酸的变性主要指DNA的变性（denaturation）指水溶液中，双股DNA分子在某些物物理理因因素素或化化学学因因素素的影响下，双螺旋结构中的碱基堆积力和碱基对之间的氢键受到破坏，严密的双螺旋结构变成了随机卷曲的、单一的多核苷酸链。1. 核酸变性的概念 第五节 核酸的性质五、核酸的变性主要指DNA的变性（denaturation）酸碱加热某些变性剂（如尿素、胍）某些有机溶剂（如乙醇、丙酮等

30、）结构：螺旋线团 理化性质：紫外吸收 （ 增色效应）增色效应） 粘度 比旋光度 生物活性：或丧失 第五节 核酸的性质五、核酸的变性2. 热变性 第五节 核酸的性质五、核酸的变性2. 热变性 熔点（Tm） 在DNA的热变性过程中，产生紫外吸收值跃变的温度。通常以增色效应达到一半时的温度表示。3. 影响Tm值的因素 DNA中G-C对的含量 第五节 核酸的性质五、核酸的变性 经验式: (G-C)%=(Tm-69.3)2.44 盐离子强度 DNA的均一性 1复性（renaturation）的概念 理化性质: (p) 比旋光度 粘度高于Tm值5 复性也称退火 生物活性得到部分恢复 第五节 核酸的性质六、

31、核酸的复性2. 影响复性的因素 样品的性质 DNA的浓度 DNA片段的大小 温度 离子强度 第五节 核酸的性质六、核酸的复性3. 复性动力学 DNA的复性过程是一种双分子反应 S：single strand DNA D：double strand DNA 经重排，积分得： 式中 C0：t=0时，起始DNA的浓度（mol/L） C：t时间时，单链DNA的浓度（mol/L） k：复性反应常数（L/molsec） t：复性时间（sec） 第五节 核酸的性质六、核酸的复性Cot1/2: 时的Cot值，即指复性完成一半时的Cot值。 第五节 核酸的性质六、核酸的复性第五节 核酸的性质七、核酸的杂交核酸的

32、杂交（hybridization）是指不同来源的单链核酸之间通过碱基互补配对形成双链结构。 单链DNA与单链DNA杂交（DNA-DNA）单链DNA与单链RNA杂交（DNA-RNA）单链RNA与单链RNA杂交（RNA-RNA）利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。用硝酸纤维素膜作为支持物进行杂交用硝酸纤维素膜作为支持物进行杂交 1975年，英国E. M. Southern首创Southern印迹技术（ Southern blotting ）原理方法探针：作为检测用的已知探针：作为检测用的已知DNA序列或序列或RNA序列的片段序列的片段 第五节 核酸的性质七、核酸的杂交 1977年G.

33、K.Stark首创Northern印迹 （ Northern blotting ） Western blotting（Western 印迹） 第五节 核酸的性质七、核酸的杂交 第五节 核酸的性质八、核酸的水解 第六节 核酸的水解 核酸的酸水解 核酸的碱水解 核酸的酶水解第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 1. 核酸水解酶的概念 能水解核酸的酶第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 2. 核酸水解酶的种类 核酸水解酶底物作用方式磷酸二酯键断裂的方式其他核糖核酸酶（ribonuclease, RNase)脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease, DNase） 核酸内切酶（endonucle

34、ase）核酸外切酶（exonuclease）a型酶b型酶双链酶单链酶限制性内切酶（restriction endonuclease）简称限制酶，主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，对自身起了保护作用。第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 5. 限制性内切酶具有严格的碱基专一性，有专一的识别顺序、切点 粘性未端第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 5. 限制性内切酶特点特点平整末端具有严格的碱基专一性，有专一的识别顺序、切点 粘性未端第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 5. 限制性内切酶特点特点平整末端Eco RI 第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 5. 限制性内切酶命名命名第六节 核酸的水解三、核酸的酶水解 5. 限制性内切酶应用举例应用举例