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1、上海新王牌教育精品小班三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞 1 1、什么是转化？、什么是转化？ 2 2、目的基因导入植物细胞常用的方法、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？是什么？具体过程是怎样的？ 3 3、目的基因导入动物细胞常用的方法、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？是什么？基本操作程序是怎样的？ 4 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？样的？钙离子有什么作用？转化转化目的基因进入受体细胞内，并且在受目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内体细胞内维持稳定和表达维持稳定和表达的
2、过程。的过程。三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞1.1.目的基因导入植物细胞目的基因导入植物细胞常用的方法常用的方法: : 农杆菌转化法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉基因枪法、花粉 管通道法管通道法农杆菌的特点农杆菌的特点: :a.a.易感染双子叶植物和祼子植物。易感染双子叶植物和祼子植物。b.b.具有趋化性。具有趋化性。c.Tic.Ti质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA可转移到受体细胞，可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的并整合到受体细胞染色体的DNADNA上上三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞1.1.目的基
3、因导入植物细胞目的基因导入植物细胞农杆菌转化法的导入过程农杆菌转化法的导入过程: :构建基因表达载体构建基因表达载体转入转入农杆菌农杆菌植物细胞植物细胞导入导入稳定维持和表达稳定维持和表达. .目的基因导入动物细胞目的基因导入动物细胞常用的方法常用的方法: : 显微注射技术显微注射技术操作程序：操作程序：三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞a.a.先提纯含目的基因的表达载体先提纯含目的基因的表达载体 b.b.从动物体内取出卵从动物体内取出卵( (受精卵）受精卵）c.c.显微注射仪进行显微注射显微注射仪进行显微注射 d.d.将含目的基因的受精卵移植到输卵将含目的基因的受精卵移植到输卵
4、管或子宫中发育成新个体管或子宫中发育成新个体3.3.目的基因导入微生物细胞目的基因导入微生物细胞原核生物的特点原核生物的特点: :繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。少。大肠杆菌的转化过程大肠杆菌的转化过程: :用用CaCa2+2+处理细胞处理细胞 增加细胞壁的透性，增加细胞壁的透性，与细胞膜无关与细胞膜无关三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞 感受态细胞感受态细胞重组表达载体重组表达载体DNADNA分子与感受态细胞混合分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定1 1、导入
5、目的基因后需要检测哪些方面？、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？各采取什么方法？2 2、什么是、什么是DNADNA分子探针？检测时的分子探针？检测时的DNADNA探探针通过什么原理来检测目的基因和相针通过什么原理来检测目的基因和相应的应的mRNAmRNA？3 3、利用抗体抗原杂交检测的原理是什、利用抗体抗原杂交检测的原理是什么？么？1.1.目的基因是否插入受体细胞染色体的目的基因是否插入受体细胞染色体的DNADNA上上目的基因的检测内容和方法目的基因的检测内容和方法检测方法检测方法: :DNADNA分子杂交技术分子杂交技术DNADNA探针：探针：用放射性同位素等作标记的含有用放射
6、性同位素等作标记的含有目的基因的目的基因的DNADNA片段。片段。四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定2.2.目的基因是否转录出目的基因是否转录出mRNAmRNA目的基因的检测内容和方法目的基因的检测内容和方法检测方法检测方法: :分子杂交技术分子杂交技术用用DNADNA探针与探针与mRNAmRNA杂交。杂交。四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定目的基因的检测内容和方法目的基因的检测内容和方法检测方法检测方法: :抗原抗原抗体杂交抗体杂交3.3.目的基因是否翻译出蛋白质目的基因是否翻译出蛋白质 四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定4 4、个体生物学水平的鉴定
7、、个体生物学水平的鉴定四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的出鼠的珠蛋白，想一想，应该如何珠蛋白，想一想，应该如何设计？设计？ 思考与探究思考与探究思考与探究思考与探究1.1.从小鼠中克隆出从小鼠中克隆出珠蛋白基因的编码序列珠蛋白基因的编码序列（CDNACDNA）。）。2.2.将将cDNAcDNA前接上在大肠杆菌中可以
8、适用的启动子，前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。3.3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明菌落，则表明珠蛋白基因已进入。珠蛋白基因已进入。4.4.培养进入了培养进入了珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取体，破碎后从中提取珠蛋白。珠蛋白。
