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1、ABO血型鉴定、血型鉴定、Rh血型鉴定血型鉴定临床检验基础与输血教研室唾液中唾液中HAB血型物质测定血型物质测定 实验一一 ABO ABO、RhRh血型血型鉴定定目的：目的：目的：目的：掌握掌握ABOABO正反定型的原理、方法及正反定型的原理、方法及RhRh血型鉴定血型鉴定原理：原理：原理：原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定定型鉴定ABOABO血型。血型。正定型正定型是用已知血型特异性抗体（抗是用已知血型特异性抗体（抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗- -D D等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；等分型血清）来测定红细胞上有无相应的
2、抗原；反定型反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。应的抗体。器材器材: :小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、记号笔、显微镜。试剂试剂: :1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体： 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。235A型、B型及O型试剂红细胞。 3. 生理盐水。标本标本: :抗凝静脉血 操作操作（试管法）(1)(1)标记试管：标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明A、B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc、Oc。(2)(2)配配5%5%悬浮红细胞：悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，2
3、500r/min离心3分钟，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)(3)加样：加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4 4）离心：）离心：3000rmin离心15秒（1000g）。 (5)(5)结果：结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。操作：玻片法操作：玻片法( (鉴定纸板鉴定纸板) ) (1)(1)洁净玻片洁净玻片( (鉴定纸板鉴定纸板) )一张。标一张。标A A、B B，分别，分别用滴管滴加用滴管滴加A A、B B试剂试剂1 1滴，再加受检者滴，再加受检者3 35 5红细胞悬液红细胞悬液l l滴，混匀。
4、滴，混匀。 (2)(2)另取洁净玻片另取洁净玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) )一张。标一张。标AcAc、BcBc、OcOc，各加受检血清，各加受检血清2 2滴，再分别滴加滴，再分别滴加AcAc、BcBc、OcOc悬红悬红1 1滴。滴。 (3)(3)室温轻转动玻片室温轻转动玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) ) ，使血清与细胞，使血清与细胞充分混匀连续约充分混匀连续约2min2min，肉眼观察凝集，肉眼观察凝集( (溶血溶血) )反应。反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。玻片试验时可用低倍镜观察结果。 表表l ABOl ABO血型正反定型血型正反定型结果果试剂血清试剂血清试剂血清试剂血清+ +受
5、检红细胞受检红细胞受检红细胞受检红细胞 受检血清受检血清受检血清受检血清+ +试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞 （正定型）（正定型）（正定型）（正定型） （反定型）（反定型）（反定型）（反定型） -A -B -A -B 受检血型受检血型受检血型受检血型 Ac Ac BcBc OcOc A A B B OO ABAB 注意事项注意事项1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染作业作业简述ABO血型鉴定正反不一致的原因 4+ 4+ 4+ 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成
6、一大块，血清清晰透明。 3+ 3+ 3+ 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 2+ 2+ 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ l+ l+ l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多
7、游镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。离红细胞。离红细胞。离红细胞。mf mf mf mf 混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（mixed fieldmixed fieldmixed fieldmixed field）指镜下可见少数红）指镜下可见少数红）指镜下可见少数红）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均
8、匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准目的目的目的目的 掌握掌握RhRh血型鉴定的原理、方法。血型鉴定的原理、方法。原理原理原理原理 RhRh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗相应的抗C C、抗、抗c c、抗、抗D D、抗、抗E E、抗、抗e e五种五种RhRh分型血清来分型血清来检查红细胞抗原。检查红细胞抗原。在临床输血中一般只做在临床输血中一般只做D D抗原的鉴定，被检红抗原的鉴定，被检红细胞和抗细胞和抗D D血清凝集者为血清凝集者为RhRh阳性，不凝
9、集者为阳性，不凝集者为RhRh阴性。阴性。二二 、 Rh血型鉴定血型鉴定器材器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、载小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。玻片、显微镜、离心机。试剂试剂1.Rh1.Rh抗血清：常用的为抗血清：常用的为IgMIgM抗抗D D。2.2.己知己知RhRh阳性和阴性的阳性和阴性的5 5红细胞悬液各红细胞悬液各1 1份份3.3.盐水溶液。盐水溶液。标本标本 静脉血静脉血。操作操作( (盐水试管测试法盐水试管测试法) )1.1.取单克隆抗取单克隆抗-D-D（IgMIgM）-C-C、-c-c、-E-E、-e-e试试剂各剂各1 1滴到滴到5 5支试管中。支试管中。
10、2.2.每管各加每管各加1 1滴滴3 35 5待检红细胞悬液。待检红细胞悬液。3.3.充分混匀，以充分混匀，以1000 g1000 g离心离心1515秒。秒。4.4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。用肉眼观看凝集。5.5.判定结果判定结果注意事项注意事项1 1如临床上只检查是否为如临床上只检查是否为RhRh阳性，只需用抗阳性，只需用抗D D血清血清进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查排除排除排除排除DuDuDuDu型。型。型。型。2 2因抗因抗e e血清难以得到，故临床上常用四种血清难以得到，故临床上常
11、用四种RhRh抗血抗血清来定型。清来定型。3 3RhRh血型鉴定应严格控制温度与时间，因血型鉴定应严格控制温度与时间，因RhRh抗原、抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。轻轻摇动试管，不可用力振摇。4 4如鉴定结果只与抗如鉴定结果只与抗D D血清起反应，而与抗血清起反应，而与抗C C、-c-c、-E-E、-e-e都不凝集，则受检者为都不凝集，则受检者为RhRh缺失型，以缺失型，以- -D-D-表示。表示。唾液中唾液中HAB血型物质测定血型物质测定 【目的目的目的目的】了解唾液了解唾液HAB血型物血型物质测定的原理
12、、方法。定的原理、方法。【原理原理原理原理】 HAB血型物血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中也存在于某些人的分泌液中。唾液中HAB血型物血型物质为半抗原，能特异性地与相半抗原，能特异性地与相应抗体抗体结合，从而抑制抗体与相合，从而抑制抗体与相应红细胞胞发生凝集。所以利生凝集。所以利用凝集抑制用凝集抑制试验，可，可测定唾液中定唾液中HAB血型物血型物质，它，它有助于有助于ABO亚型的分型的分类及其特殊情况下血型的及其特殊情况下血型的鉴定定【器材器材】小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机【试剂】1. A、B和O型红细胞盐水悬液。2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清）【标本本】受检者唾液1.
13、被被检者漱口后留取自然流出的唾液者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取，将留取的唾液的唾液1000g离心，取上清液置于大离心，取上清液置于大试管中，煮管中，煮沸沸10min，再离心，再离心10min，留取上清液，留取上清液备用。用。 2.排列排列试管管3支，分支，分别标明明-A、-B、-H，3管各加唾管各加唾液液1滴，每管加相滴，每管加相应标标化血清化血清化血清化血清1滴。滴。3.混匀，置室温，中和混匀，置室温，中和10min。4.每管加相每管加相应悬红1滴滴.5. 混匀，离心混匀，离心15秒，秒，观察察结果果.标化血清标化血清1.标记试管管：3排排18支，分支，分别抗抗A、抗抗B及抗及抗H
14、。每排再。每排再标2、4、8、16.稀稀释：每管加每管加盐水水50l。每排第。每排第1管管对应加抗加抗A抗抗B及抗及抗H血清血清50l，倍量稀，倍量稀释成成2、4、8、16稀稀释液。液。.加加3悬红：每每排各管排各管对应加加悬红50l，振振摇混匀，混匀，1000g，离心，离心15秒。秒。.结果：果：以以+为标化血清的最适稀化血清的最适稀释度。度。操作步骤操作步骤反应物反应物抗管抗管抗管抗管抗管抗管受检唾液受检唾液ddd标化抗标化抗d标化抗标化抗d标化抗标化抗d混匀，室温中和混匀，室温中和10min%红细胞红细胞d%红细胞红细胞d%红细胞红细胞d混匀室温放置混匀室温放置10min，离心后观察，离
15、心后观察抗抗抗抗A A管管管管抗抗抗抗B B管管管管抗抗抗抗H H管管管管非分泌型非分泌型非分泌型非分泌型4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +A A A A型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型4 4 4 4+ + + +1 4+ 1 4+ B B B B型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型4 4 4 4+ + + +1 4+ 1 4+ 0 0 0 0型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +ABABABAB型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型1 3+ 1 3+ 结果判定结果判定6.取取试管两支分管两支分别作阳性及
16、阴性作阳性及阴性对照管，照管，各加分泌型和非分泌型唾液各加分泌型和非分泌型唾液l滴再加滴再加抗抗H最适稀最适稀释度血清度血清l 滴，以滴，以30型型红细胞作指示，同胞作指示，同时进行行试验，阳性，阳性对照照应不凝集，阴性不凝集，阴性对照照应凝集。凝集。【注意事注意事项】1如果加如果加热前不离心并前不离心并除去沉淀除去沉淀，任何可能存在的，任何可能存在的细胞可胞可释放放H物物质，使非分泌，使非分泌导致假阳性。致假阳性。2欲得到清晰的欲得到清晰的不含粘液的液体不含粘液的液体，最好的，最好的办法是将法是将唾液冰唾液冰冻保存数天融化后离心，除去保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰胞碎屑，冰冻唾液的活性可保留几年。唾液的活性可保留几年。3可用可用5%白蛋白白蛋白代替代替盐水水标化。化。.为防止弱分泌型漏防止弱分泌型漏检，同，同时盐水水对照照试验，比，比较二二者凝集者凝集强度。度。 思考题请列表比较红细胞血型系统中的主要请列表比较红细胞血型系统中的主要抗原及产生抗体的异同点抗原及产生抗体的异同点简述正反定型不一致的原因简述正反定型不一致的原因
