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1、流式细胞仪（流式细胞仪（Flow Cytometer)基础基础(jch)简介简介中科院生物物理研究所中国科学院蛋白质科学研究平台(pngti)2005年3月 刘春春第一页，共二十六页。主要主要(zhyo)内容内容l流式细胞仪概要(giyo)l流式细胞仪的工作原理l流式细胞仪测量的对象第二页，共二十六页。什么什么(shn me)是流式细胞仪是流式细胞仪流式细胞仪实物流式细胞仪实物(shw)(shw)BD FACSVantageBD-Calibur 第三页，共二十六页。l流式细胞仪基本(jbn)结构第四页，共二十六页。FCMFCM的定义的定义(dngy)(dngy) 流式细胞仪是指，使细胞（或其他
2、粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号(xnho)，对信号(xnho)进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。第五页，共二十六页。l对比 流式细胞仪是一种(y zhn)特殊的显微镜 流式细胞仪 显微镜 流动的细胞 静止的细胞样本 数量大 数量少 高速分选 样本难以再利用细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息第六页，共二十六页。流式细胞仪 蛋白胶 多参数 单参数 量化的分布 平均值 容易检测各个参数间的相关性 不容易第七页，共二十六页。l功能特点 （1）多参数定量分析每一个(y )细胞； （2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例
3、的稀有细胞群； 单细胞克隆等。 （3）高通量（分析(fnx)分选） 分析150，000个/ 秒 分选100，000个/秒 第八页，共二十六页。l应用领域 疾病诊断生物学基础研究环境监测(hun jn jin c)海洋微生物研究农业领域应用等等 70年代美国为攻克癌症而建造。厂商(chngshng)：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成为一个几十亿美金的产业第九页，共二十六页。流式细胞仪工作流式细胞仪工作(gngzu)原原理理流体(lit)动力学聚焦流动(lidng)室激光聚焦液流与光源第十页，共二十六页。探测(tnc)光路聚焦第十一页，共二十
4、六页。二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光 光信号(xnho)分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号(xnho)。光信号(xnho)收集第十二页，共二十六页。数据处理数据处理FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数(du sh) 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲(michng)处理，模数转换光信号(xnho)电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）第十三页，共二十六页。流式细胞仪产生流式细胞仪产生(chnshng)的信号的信号l非荧光(ynggung)信号颗粒(kl)度细胞大小第十四页，共二十六页。散射光信号区分裂解(l
5、i ji)后的外周血细胞群第十五页，共二十六页。l荧光(ynggung)信号 荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量(hnling)的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量第十六页，共二十六页。PIAnnexinV细胞(xbo)凋亡检测DNA含量(hnling)-PIAnnexin-V第十七页，共二十六页。CD45 FITC (log)R1=单核细胞 (CD14+ve) R2=淋巴细胞 (CD45单核细胞)R3=中性粒细胞 (CD45单核细胞) CD14 PE (log)前向散射光 (linear)侧向(c xin)散射光(linear)PEFITC荧光标记
6、检测(jin c)外周血裂解后细胞群第十八页，共二十六页。细胞(xbo)分选第十九页，共二十六页。流式细胞仪的测量流式细胞仪的测量(cling)对象对象l大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。 大小范围：0.2uM-300uM。l对象类型 细胞类型： （1） 高等真核细胞； （2）酵母； （3）细菌(xjn)； （4）多细胞的聚集体，如胰岛等。 非生命颗粒： 细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。第二十页，共二十六页。l流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色： 大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。 2）需染色或标记： 细胞组分： 细胞膜：流动性，通透性，膜电位
7、细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。 核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等 总蛋白质 蛋白质分子(fnz)间相互作用 抗原 细胞骨架成分 受体第二十一页，共二十六页。功能属性：酶活性细胞凋亡(dio wn)细胞坏死细胞活性氢硫基凝血素结合位点药物动力学.经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记的成分或者(huzh)某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。第二十二页，共二十六页。G1S phaseG2MG112 1DNA含量(hnling) DNA 含量(hnling)细胞周期时相G0/1G2/MS细胞(xbo)数细胞周期分析第二十三页，
8、共二十六页。Hoechst33258（AT）Chromomycin A3 （GC）白血病患者(hunzh)2456X89-127recip 9-221314151617Y 1820192221Ph1 / 3染色体组型测定(cdng)13第二十四页，共二十六页。生物物理所现有生物物理所现有(xin yu)流式细胞仪流式细胞仪l型号：BD FACSVantage SEl参数(cnsh)：分析10，000个/秒，分选7，000个/秒；激光：488nm，UV；四色荧光通道。l地点：1406l联系方式：电话64839306 或 ：64862503 电子邮件第二十五页，共二十六页。内容(nirng)总结流式细胞仪（Flow Cytometer)基础简介。2005年3月 刘春春。容易检测各个参数间的相关性 不容易。（3）高通量（分析分选）。光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。多荧光标记(bioj)胞内多种组分，实现多参数测量。CD14 PE (log)。经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记(bioj)的成分或者某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。2 1。Y 18。1 / 3第二十六页，共二十六页。
