核酸分子杂交技术课件

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1、核酸分子杂交（核酸分子杂交（DNA/DNA or DNA/RNA）核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸核酸分子杂交分子杂交技术：技术： 具一定同源性的两条具一定同源性的两条(DNA或或RNA)单链单链在适宜的温度及离子强度等条件下在适宜的温度及离子强度等条件下, 可按可按碱基互补配对原则碱基互补配对原则特异性地复性，特异性地复性，形成形成双链双链。探针探针(已知核酸片断，已知核酸片断，单链单链)待测核苷酸序列待测核苷酸序列(单链单链)核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件 核酸分子杂交技术，是在1968年由华盛顿卡内基学院（Carnegie Institute of

2、Washington）的Roy Britten及其同事发明的。所依据的原理是，带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构。 核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交的基本原理n nDNA变性方法方法n n热变性：热变性：9010090100n n酸碱变性：常采用碱变性酸碱变性：常采用碱变性n n化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等特点：粘度增加、密度增加、增色效应、溶特点：粘度增加、密度增加、增色效应、溶解温度解温度(melting temperature,Tm)(melting

3、temperature,Tm)n nDNA复性或杂交(hybridization)DNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNADNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNA等等核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件影响杂交的因素n n核酸分子的浓度和长度核酸分子的浓度和长度 浓度大，复性快；分子量大，复性慢浓度大，复性快；分子量大，复性慢n n温度温度n n离子强度离子强度n n杂交液中的甲酰胺杂交液中的甲酰胺n n核酸分子的复杂性核酸分子的复杂性n n非特异性杂交反应非特异性杂交反应

4、预杂交：封闭非特异性杂交位点，用鲑鱼精子预杂交：封闭非特异性杂交位点，用鲑鱼精子DNADNA核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件分子杂交的基本方法n nSouthern 印迹法n nNorthern 印迹法n nWestern 印迹法n n原位杂交n n斑点印迹杂交n n液相杂交核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Southern DNA印迹杂交印迹杂交核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Southern DNA印迹杂交印迹杂交 使在电泳凝胶中分离的使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单链合在适当的滤膜上，然后

5、通过同标记的单链DNA或或 RNA探针的杂交作用检测这些被转移探针的杂交作用检测这些被转移的的DNA片段，这种实验方法叫做片段，这种实验方法叫做DNA印迹杂印迹杂交技术。由于它是由英国人交技术。由于它是由英国人Edwin Mellor Southern于于1975年首先设计出来的，故又叫年首先设计出来的，故又叫Southern blot。 核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Southern 杂交(Southern bloting)(Southern bloting)的主要步骤n n待测待测DNADNA样品的制备、酶切样品的制备、酶切n n待测待测DNA DNA 样品的电泳分离：琼

6、脂糖凝胶电泳样品的电泳分离：琼脂糖凝胶电泳n n凝胶中凝胶中DNADNA的变性：碱变性的变性：碱变性n nSouthernSouthern转膜：转膜： 硝酸纤维素硝酸纤维素(NC)(NC)膜、尼龙膜膜、尼龙膜 毛细管虹吸印迹法、电转印法、真空转移法毛细管虹吸印迹法、电转印法、真空转移法n n探针的制备探针的制备n n Southern Southern杂交杂交n n杂交结果的检测杂交结果的检测核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（a）（b）（c）（d）（e）基因组基因组DNADNA限制片段限制片段硝酸纤维素滤膜硝酸纤维素滤膜同探针同源杂交的基因同探针同源杂交的基因DNA片段片段X光

7、底片光底片核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件DNA凝胶电泳凝胶电泳核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Southern DNA 印迹杂交之印迹杂交之X光显像图片光显像图片 水稻（Oryza sativa L.)的叶绿体DNA分别用核酸内切限制酶Bgl(A-C)、BamH（D-F）、EcoR（G-I）、和Hind（J-L）消化，加样在

8、含有EtBr染料的1%的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同32P标记的玉米psbA探针作Southern杂交。X光底片中显现的阳性条带 ，表明含有水稻的psbA基因序列核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件利用非放射性探针检测核苷酸利用非放射性探针检测核苷酸核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件n n主要应用1.遗传病诊断 2.DNA图谱分析 3.PCR产物分析核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Northern blot核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件NorthernNorthern杂交杂交* 1979* 1979* 1979* 1979年，年

9、，年，年，J. C. AlwineJ. C. AlwineJ. C. AlwineJ. C. Alwine等人发展而来，是将等人发展而来，是将等人发展而来，是将等人发展而来，是将RNARNARNARNA分子从电泳分子从电泳分子从电泳分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。 也称为也称为也称为也称为Northe

10、rnNorthernNorthernNorthern印迹（印迹（印迹（印迹（Northern BlotNorthern BlotNorthern BlotNorthern Blot），用以检测某），用以检测某），用以检测某），用以检测某一特定的一特定的一特定的一特定的RNARNARNARNA（通常是（通常是（通常是（通常是mRNAmRNAmRNAmRNA）片段的存在及表达量。）片段的存在及表达量。）片段的存在及表达量。）片段的存在及表达量。* * 因因这种方法与Southern blot杂交技术十分类似，与与DNADNA的的杂交（杂交（Southern Southern 杂交）相对应，被趣称为

11、杂交）相对应，被趣称为NorthernNorthern杂杂交。交。核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Northern印迹杂交印迹杂交 1、基本原理和基本过程与、基本原理和基本过程与Southern blot基本相同基本相同 2、鉴别、鉴别RNA 3、探针可用、探针可用DNA或或RNA片段片段 4、待测样品为总、待测样品为总RNA或或mRNA核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Northern印迹与印迹与Southern 印迹的不同点印迹的不同点 1、变性：、变性：RNA电泳前加热变性、电泳时加变性剂保电泳前加热变性、电泳时加变性剂保 持持RNA处于变性状态，处于变性状

12、态，DNA电泳前和电泳电泳前和电泳 中不变性中不变性与与SouthernSouthern印迹杂交不同之处：印迹杂交不同之处： RNA RNA电泳电泳 避免单链避免单链RNARNA自身形成高级结构和自身降解自身形成高级结构和自身降解 变性凝胶电泳变性凝胶电泳(甲醛、尿素、甲酰胺等甲醛、尿素、甲酰胺等)RNase抑制环境抑制环境核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件 2、转膜：、转膜：RNA转膜前不需变性和中和处理转膜前不需变性和中和处理,Southern 印迹时，印迹时，DNA转膜前需进行碱变性及中和处理转膜前需进行碱变性及中和处理 3、靶核酸为、靶核酸为RNA核酸分子杂交技术最新课件

13、核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件Western 杂交印迹法(Western bloting)(Western bloting)n n检测蛋白质，即将电泳分离的非标记蛋白质转移到固相载体上，用特异的抗血清对蛋白质进行鉴定及定量的方法n n主要步骤：蛋白质样品的制备蛋白质样品的制备SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)(PAGE)电泳电泳蛋白质的电转移：蛋白质的电转移：NCNC膜膜靶蛋白的免疫学检测靶蛋白的免疫学检测n n靶蛋白于第一抗体（一抗）反应靶蛋白于第一抗体（一抗）反应n n与标记的第二抗体（酶标二抗）反应与标记的第二抗体（酶标二抗

14、）反应n n显色反应：酶促反应显色反应：酶促反应核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件In Situ Hybridization原位杂交原位杂交核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件原位杂交原位杂交(in situ hybridization)* * 细胞或染色体的原位杂交，用于基因定位。细胞或染色体的原位杂交，用于基因定位。 * * 细菌菌落的原位杂交：筛选阳性克隆。细菌菌落的原位杂交：筛选阳性克隆。n n将标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸进行将标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸进行将标记的核酸探针与固定在细胞

15、或组织中的核酸进行将标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸进行杂交，称原位杂交。根据检测物分细胞内原位杂交和杂交，称原位杂交。根据检测物分细胞内原位杂交和杂交，称原位杂交。根据检测物分细胞内原位杂交和杂交，称原位杂交。根据检测物分细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交；根据探针与待检核酸分：组织切片内原位杂交；根据探针与待检核酸分：组织切片内原位杂交；根据探针与待检核酸分：组织切片内原位杂交；根据探针与待检核酸分：DNA/DNADNA/DNA、RNA/DNARNA/DNA、RNA/RNA RNA/RNA 杂交。杂交。杂交。杂交。n n特点特点特点特点 能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究能在成

16、分复杂的组织中进行单一细胞的研究能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究 不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低的靶序不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低的靶序不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低的靶序不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低的靶序列灵敏度高列灵敏度高列灵敏度高列灵敏度高 能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件原位杂交原位杂交 1、定义：将标记的核酸探针与固定在细胞或组、定义：将标

17、记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸进行杂交，称原位杂交。根据检测物分织中的核酸进行杂交，称原位杂交。根据检测物分细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交；根据探针细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交；根据探针与待检核酸分：与待检核酸分：DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA 杂交杂交核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件 保持组织细胞的形态保持组织细胞的形态 对核酸无抽提，修饰与降解作用对核酸无抽提，修饰与降解作用 不改变核酸在组织细胞内的定位不改变核酸在组织细胞内的定位 不阻碍核酸与探针的杂交过程不阻碍核酸与探针的杂交过程 对杂交信号无遮蔽作用对杂交信号无遮蔽作用 理化性质稳定

18、理化性质稳定 2、杂交过程：、杂交过程：（1）组织或细胞的固定）组织或细胞的固定 理想固定液应具备：理想固定液应具备：核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（2）组织细胞杂交前的预处理）组织细胞杂交前的预处理 去垢剂（如去垢剂（如Triton x-100和和SDS）和蛋白酶和蛋白酶 K去除核酸表面的蛋白质去除核酸表面的蛋白质 组织细胞内的核酸与蛋白质结合成核酸蛋白复合体组织细胞内的核酸与蛋白质结合成核酸蛋白复合体 控制消化时间，避免细胞结构破坏和核酸从载玻控制消化时间，避免细胞结构破坏和核酸从载玻 片上脱落片上脱落核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（3）探针的选择与标记

19、）探针的选择与标记 以获得最好杂交效果为依据选择探针以获得最好杂交效果为依据选择探针 探针的长度一般为探针的长度一般为50300bp ,有时达有时达1.5kb 放射性核素标记探针敏感性高，操作简便稳定放射性核素标记探针敏感性高，操作简便稳定 检测结果分辨率高，但信号检测时间长检测结果分辨率高，但信号检测时间长 非核素标记探针安全、稳定性好、显色快，易非核素标记探针安全、稳定性好、显色快，易 于观察于观察核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（4）杂交）杂交 杂交液体积小：杂交液体积小：1020l cDNA和和RNA探针杂交温度约为探针杂交温度约为50 杂交时间杂交时间:DNA探针杂交

20、为探针杂交为24h.RNA探针杂交过夜探针杂交过夜 杂交前一般将组织切片置杂交前一般将组织切片置95 515分钟使分钟使DNA变性变性 冲洗温度一般冲洗温度一般 不超过不超过50 核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（5）杂交结果检测）杂交结果检测 所用探针为核素标记所用探针为核素标记,放射自显影检测放射自显影检测 所用探针为非核素标记所用探针为非核素标记,比色或化学发光检测比色或化学发光检测核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件斑点及狭缝印迹杂交斑点及狭缝印迹杂交 1、斑点印

21、迹为圆形、斑点印迹为圆形 2、狭缝印迹为线状、狭缝印迹为线状 3、鉴别、鉴别DNA、RNA 4、简单、快速，同一张膜可检测多个样品、简单、快速，同一张膜可检测多个样品 5、特异性不高、不能鉴别核酸分子量、特异性不高、不能鉴别核酸分子量核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件斑点印迹杂交(dot bloting)n n将RNA或DNA变性后直接点样于NC膜或尼龙膜上n n优点：简单、快速、可同时检测多个样品核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件液相杂交液相杂交 指待测核酸和探针都存在于杂交液中，碱基互补指待测核酸和探针都存在于杂交

22、液中，碱基互补的单链核酸分子在液体中配对形成杂交分子的过程。的单链核酸分子在液体中配对形成杂交分子的过程。核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（一）（一）RNA酶保护分析法酶保护分析法1、RNA酶保护分析法原理酶保护分析法原理 RNaseA和和RNaseT1专一水解杂交体系中的单专一水解杂交体系中的单链链RNA，不水解探针，不水解探针RNA与待测与待测RNA互补形成互补形成的双链的双链RNA，使杂交分子得到保护，称，使杂交分子得到保护，称RNA酶保酶保护分析法。护分析法。核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件2、杂交过程、杂交过程 制备待测制备待测RNA RNA探针的制备

23、与标记：体外转录法制备和标探针的制备与标记：体外转录法制备和标 记记RNA探针探针 杂交：待测杂交：待测RNA与与RNA探针在液相中杂交探针在液相中杂交 RNaseA和和RNaseTI除去单链除去单链RNA 电泳分离电泳分离RNA 放射自显性检测杂交结果放射自显性检测杂交结果核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件（二）核酸酶（二）核酸酶S1保护分析法保护分析法 1、原理、原理 核酸酶核酸酶S1在一定条件下专一水解杂交体系中在一定条件下专一水解杂交体系中的单链的单链DNA和单链和单链RNA，不水解，不水解DNA探针与待测探针与待测RNA杂交形成的杂交体，使杂交分子得到保护，杂交形成的杂

24、交体，使杂交分子得到保护，称核酸酶称核酸酶S1保护分析法保护分析法核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件2、杂交过程、杂交过程 制备待测制备待测RNA：总：总RNA或或mRNA均可均可 单链单链DNA探针的制备与标记探针的制备与标记 杂交：单链杂交：单链DNA探针与待测探针与待测RNA在液相中杂交在液相中杂交 核酸酶核酸酶S1除去单链除去单链DNA和单链和单链RNA 电泳分离电泳分离DNA/RNA杂交体分子杂交体分子 放射自显影检测杂交结果放射自显影检测杂交结果核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸杂交的探针核酸杂交的探针 核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课

25、件(1)常用探针类型：常用探针类型： 人工合成寡核苷酸探针人工合成寡核苷酸探针 基因组基因组DNA探针探针 cDNA探针探针 RNA探针探针核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件 (2)探针标记物探针标记物 放射性标记物放射性标记物 32P 高放射性高放射性 半衰期半衰期14.3 d 35S 放射性较弱放射性较弱 半衰期半衰期87.1 d 3H 放射性弱放射性弱 半衰期半衰期12.35 a 非放射性标记物非放射性标记物 半抗原：生物素、地高率半抗原：生物素、地高率 配体：生物素是亲和素的配体配体：生物素是亲和素的配体 荧光素：异硫氰酸荧光素、罗丹明等荧光素：异硫氰酸荧光素、罗丹明等

26、化学发光探针：标记物与某种底物反应发光，化学发光探针：标记物与某种底物反应发光， 如生物素酰化的碱性磷酸酶如生物素酰化的碱性磷酸酶 可使发光底物发光可使发光底物发光 核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件BiotinAvidin核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件(2)探针标记物探针标记物理想标记物应具备的特性：理想标记物应具备的特性： 高度灵敏性高度灵敏性 不影响碱基配对的特异性不影响碱基配对的特异性 不影响探针分子的主要理化性质不影响探针分子的主要理化性质 对酶促反应活性无影响或影响不大对酶促反应活性无影响或影响不大 检

27、测方法具有高度灵敏性和高度特异性检测方法具有高度灵敏性和高度特异性核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件BCIP/NBT紫蓝色沉淀紫蓝色沉淀Dig抗抗Dig抗体抗体碱性磷酸酶碱性磷酸酶核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件 (3)探针标记方法探针标记方法 切切口平移法口平移法(nick translation)随机引物法随机引物法(random primer)：六核苷酸残基的：六核苷酸残基的引物引物PCR标记法标记法末端标记法末端标记法核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件1、利用、利用DNase I在在DNA双链上

28、造成单链切口双链上造成单链切口2、利用大肠杆菌、利用大肠杆菌DNA聚合酶聚合酶I的的53 核酸核酸外切酶活性在切口处将旧链从外切酶活性在切口处将旧链从5 末端逐步切末端逐步切除除3、在、在DNA聚合酶聚合酶I的的53 聚合酶催化下，聚合酶催化下，以互补的以互补的DNA单链为模板依次将单链为模板依次将dNTP连接到连接到切口的切口的3 末端末端-OH上，合成新的上，合成新的DNA链，同链，同时将标记的核苷酸掺入到新的时将标记的核苷酸掺入到新的DNA链中链中切口平移法（切口平移法（nick translation)核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件切口平移法切口平移法(nick tr

29、anslation labeling)553333355555533335555553DNA酶酶IDNA聚合酶聚合酶I +标记的标记的dNTP53变性变性探针平均长度600bp核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件随机引物法随机引物法 其原理是随机引物能与各种单链其原理是随机引物能与各种单链DNA模板结合，模板结合，作为合成新链的引物，在作为合成新链的引物，在DNA聚合酶的催化下，聚合酶的催化下，按按53 方向合成一新的方向合成一新的DNA链，其核苷酸序链，其核苷酸序列与模板列与模板DNA

30、完全互补。另一单链完全互补。另一单链DNA模板同样模板同样合成一条新的完全互补的合成一条新的完全互补的DNA链。合成时，带放链。合成时，带放射性核素标记的核苷酸掺入到新合成的射性核素标记的核苷酸掺入到新合成的DNA分子分子中中核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件随机引物法所具有的优点：随机引物法所具有的优点：1、能进行双链、能进行双链DNA、单链、单链DNA或或RNA探针的标记探针的标记2、操作简单方便，避免因、操作简单方便，避免因DNaseI处理浓度掌握不处理浓度掌握不当所带来的一系列问题当所带来的一系列问题3、标记活性高，标记活性可达、标记活性高，标记活性可达108cpm/gD

31、NA以以上上4、可直接在低熔点琼脂糖溶液中进行标记、可直接在低熔点琼脂糖溶液中进行标记核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件随机引物法随机引物法(random primed DNA labeling)53535353随机随机6-12bp单核苷酸引物单核苷酸引物变性变性一般探针长度在400-600bp之间核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件末端标记法末端标记法(terminal labeling) 3末端末端 5末端末端核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件PCR标记法标记法光敏标记法光敏标记法 生物素、地高辛等生物

32、素、地高辛等光敏基团与生物素结合光敏基团与生物素结合化学衍生结合标记法化学衍生结合标记法 转氨标记法等转氨标记法等核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件n n(4)探针的纯化探针的纯化n n1 1、乙醇沉淀法：无水乙醇可以沉淀、乙醇沉淀法：无水乙醇可以沉淀DNADNA片段，可片段，可去除去除dNTPdNTP和蛋白质和蛋白质n n2 2、凝胶过滤柱层析法：利用凝胶的分子筛作用，、凝胶过滤柱层析法：利用凝胶的分子筛作用，将大分子将大分子DNADNA和小分子和小分子dNTPdNTP、磷酸根离子及寡核苷、磷酸根离子及寡核苷酸（酸（80bp)80bp)等物质分离，常用凝胶基质是等物质分离，常用凝胶基质是Sephadex G-50Sephadex G-50n n3 3、微柱离心法：其原理与上述凝胶过滤柱层析法、微柱离心法：其原理与上述凝胶过滤柱层析法相同，不同的是上述采用洗脱的方式纯化探针，相同，不同的是上述采用洗脱的方式纯化探针，而此法则是利用离心的方式来纯化探针而此法则是利用离心的方式来纯化探针核酸分子杂交技术最新课件核酸分子杂交技术最新课件