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1、岛津岛津LC-10ATLC-10AT型型HPLCHPLC操作规操作规程程2 2 目的目的:规规范范岛岛津津LC-10AT型高效液相色型高效液相色谱仪谱仪的使用。的使用。范范围围:适用于适用于岛岛津津LC-10AT型高效液相色型高效液相色谱仪谱仪的使用。的使用。职责职责:操作操作员对员对本本规规程的程的实实施施负责负责。2六、六、 平衡系平衡系统统2 、 2.1 ：按按泵泵的的pump键键，泵泵启启动动，pump指示灯亮。用指示灯亮。用检验检验方法方法规规定的定的流流动动相冲洗系相冲洗系统统，一般最少需，一般最少需6倍柱体倍柱体积积的流的流动动相。相。 2.2 ：检查检查各管路各管路连连接接处处
2、是否漏液，如漏液是否漏液，如漏液应应予以排除。予以排除。 2.3 ：观观察察泵泵控制屏幕上的控制屏幕上的压压力力值值，压压力波力波动应动应不超不超过过1MPa。如超。如超过过则则可初步判断可初步判断为为柱前管路仍有气泡，按柱前管路仍有气泡，按检查管路后再检查管路后再操作。操作。 2.4 ：观观察基察基线变线变化。如果冲洗至基化。如果冲洗至基线线漂移漂移0.01mV/min，噪声，噪声为为25mmol/L的缓冲液的缓冲液4.每天冲洗柱每天冲洗柱5.稳定进样条件稳定进样条件,调节流动相调节流动相6.采用保护柱采用保护柱38二、 保留时间缩短保留时间缩短 1.流速增加流速增加2.样品超载样品超载3.
3、键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度增加温度增加1.检查泵检查泵,重新设定流速重新设定流速2.降低样品量降低样品量3.流流 动动 相相 PH值值 保保 持持 在在37.5检查柱的方向检查柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温39三、 保留时间延长保留时间延长 1.流速下降流速下降2.硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度降低温度降低1.管管路路泄泄漏漏,更更换换泵泵密密封封圈圈,排除泵内气泡排除泵内气泡2.用用流流动动相相改改性性剂剂,如如加加三三乙胺乙胺,或采用碱至钝化柱或采用
4、碱至钝化柱3.流流动动相相PH值值保保持持在在37.5检查柱的方向检查柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温40四四、 出现肩峰或分叉出现肩峰或分叉 1.样品体积过大样品体积过大2.样品溶剂过强样品溶剂过强3.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.进样器损坏进样器损坏1.用用流流动动相相配配样样,总总的的样样品品体体积积小小于于第第一一峰峰的的15%2.采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂3.更换色谱柱更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢,加在线过滤器加在线过滤器,过滤样品过
5、滤样品5.更换进样器转子更换进样器转子41五、 鬼峰鬼峰 1.进样阀残余峰进样阀残余峰2.样品中未知物样品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽谱肽谱)5.水污染水污染(反相反相)1.每每次次用用后后用用强强溶溶剂剂清清洗洗阀阀,改改进进阀阀和和样样品品的的清洗清洗2.处理样品处理样品3.重重新新平平衡衡柱柱,用用流流动动相相作作样样品品溶溶剂剂 (尤尤其其是是离离子对色谱子对色谱)4.每天新配每天新配,用抗氧化剂用抗氧化剂5.通通过过变变化化平平衡衡时时间间检检查查水水质质量量，用用HPLC级级的水的水42六、六、 基线噪声基线噪声 1.气泡气泡(尖锐峰尖锐峰
6、)2.污染污染(随机噪声随机噪声)3.检测器灯连续噪声检测器灯连续噪声4.电干扰电干扰(偶然噪声偶然噪声)5.检测器中有气泡检测器中有气泡1.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压2.清清洗洗柱柱,净净化化样样品品,用用HPLC级试剂级试剂3.更换氘灯更换氘灯4.采采用用稳稳压压电电源源,检检查查干干扰扰的的来源来源(如水浴等如水浴等)5.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压43七、 峰拖尾峰拖尾 1.柱超载柱超载2.峰干扰峰干扰3.硅羟基作用硅羟基作用4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大7.
7、柱效下降柱效下降1.降低样品量降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相增加柱直径采用较高容量的固定相2.清洁样品清洁样品,调整流动相调整流动相3.加加三三乙乙胺胺,用用碱碱致致钝钝化化柱柱增增加加缓缓冲冲液液或或盐盐的的浓浓度度降降低低流动相流动相PH值值,钝化样品钝化样品4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢,加在线过滤器加在线过滤器,过滤样品过滤样品5.更换色谱柱更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件6.连连接接点点降降至至最最低低,对对所所有有连连接接点点作作合合适适调调整整,尽尽可可能能采用细内径的连接管采用细内径的连接管7.用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件,更换柱更换柱,采用保护柱
8、采用保护柱44八、峰展宽峰展宽 1.进样体积过大进样体积过大2.在进样阀中造成峰扩展在进样阀中造成峰扩展3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大1. 用用流流动动相相配配样样,总总的的样样品品体体积积小小于第一峰的于第一峰的15%2.进样前后排出气泡以降低扩散进样前后排出气泡以降低扩散3.设定速率应是每峰大于设定速率应是每峰大于10点点4.设设定定时时间间常常数数为为感感兴兴趣趣第第一一峰峰半半宽的宽的10%45八、峰展宽峰展宽5.流动相粘度过高流动相粘度过高6.检测池体积过大检测池体积过大7.保留时间过长保留时间过长8.柱外体积过大柱外体积过大9.样品过载样品过载5.增加柱温增加柱温,采用低粘度流动相采用低粘度流动相6.用小体积池用小体积池,卸下热交换器卸下热交换器7.等等度度洗洗脱脱时时增增加加溶溶剂剂含含量量也也可可用用梯梯度洗脱度洗脱8.将连接管径和连接管长度降至最小将连接管径和连接管长度降至最小9.进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品46谢 谢！47
