《骨代谢异常的生物化学诊断PPT课件》由会员分享,可在线阅读,更多相关《骨代谢异常的生物化学诊断PPT课件(79页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、骨代谢异常的生物化学诊断骨代谢异常的生物化学诊断教学目标与要求教学目标与要求1. 掌握掌握钙、磷、镁代谢异常与代谢性骨病的关系钙、磷、镁代谢异常与代谢性骨病的关系骨矿物质的激素调节与代谢性骨病的关系骨矿物质的激素调节与代谢性骨病的关系血清钙、磷和镁的检测方法血清钙、磷和镁的检测方法骨钙素、骨性碱性磷酸酶、骨钙素、骨性碱性磷酸酶、型胶原前肽和型胶原前肽和型胶型胶原交联降解产物在代谢性骨病诊断中的意义原交联降解产物在代谢性骨病诊断中的意义22.熟悉熟悉骨组织的基本组成、成骨作用与钙化、溶骨作用与脱钙骨组织的基本组成、成骨作用与钙化、溶骨作用与脱钙甲状旁腺素、降钙素和甲状旁腺素、降钙素和1,25-(
2、OH)2D3的主要生理作用的主要生理作用PTH、CT、维生素、维生素D的常用测定方法的常用测定方法3.了解了解PTH、CT及及1,25-(OH)2D3的合成与分泌及其调节的合成与分泌及其调节骨形成和吸收标志物的测定方法骨形成和吸收标志物的测定方法教学目标与要求教学目标与要求3骨组织组成骨组织组成 4骨组织与体内钙、磷代谢密切相关。由于多种原骨组织与体内钙、磷代谢密切相关。由于多种原因引起骨组织中钙、磷等矿物质、成骨细胞和因引起骨组织中钙、磷等矿物质、成骨细胞和/或破骨或破骨细胞功能异常,造成骨基质、骨细胞代谢紊乱,使骨细胞功能异常,造成骨基质、骨细胞代谢紊乱,使骨组织处于异常的疾病状态,总称为
3、组织处于异常的疾病状态,总称为骨代谢疾病(异常),骨代谢疾病(异常),包括佝偻病、骨软化病、骨质疏松症等。包括佝偻病、骨软化病、骨质疏松症等。骨代谢异常(疾病)骨代谢异常(疾病)5目录目录钙磷镁代谢异常与代谢性骨病钙磷镁代谢异常与代谢性骨病1激素调节与代谢性骨病激素调节与代谢性骨病2血清钙磷镁的测定血清钙磷镁的测定3骨代谢异常的生物化学测定骨代谢异常的生物化学测定4小结与展望小结与展望5返回总目录返回总目录6第一节第一节钙磷镁代谢异常与代谢性骨病钙磷镁代谢异常与代谢性骨病71. 血钙血钙 钙被称为钙被称为“生命金属生命金属”,占人体体重的,占人体体重的1.5%2.0%,其中,其中99%存在于骨
4、骼和牙齿中。存在于骨骼和牙齿中。 血浆中的钙约占机体总钙的血浆中的钙约占机体总钙的0.1%,称为,称为血钙。血钙。一、钙代谢异常一、钙代谢异常(一)血钙与骨代谢(一)血钙与骨代谢8血钙血钙离子钙(游离钙)(约离子钙(游离钙)(约50)结合钙(约结合钙(约50)与清蛋白结合与清蛋白结合(大部分)(大部分)与柠檬酸等结合与柠檬酸等结合(小部分)(小部分)可扩散钙可扩散钙不可扩散钙不可扩散钙血钙存在形式血钙存在形式9人体钙分布人体钙分布102. 成骨作用(成骨作用(osteogenesis)骨的生长、修复或重建过程骨的生长、修复或重建过程钙化(钙化(calcification)成骨过程中,成骨细胞合
5、成和分泌胶原和蛋白多糖等细成骨过程中,成骨细胞合成和分泌胶原和蛋白多糖等细胞间质成分,形成胞间质成分,形成“类骨质类骨质”,继后将钙、磷吸收到纤维,继后将钙、磷吸收到纤维的孔隙中进行沉淀结晶的过程的孔隙中进行沉淀结晶的过程11影响成骨作用(钙化)的主要因素影响成骨作用(钙化)的主要因素血液及骨组织微环境中的血液及骨组织微环境中的CaP浓度乘积浓度乘积正常血中存在的焦磷酸盐等抑制骨钙化正常血中存在的焦磷酸盐等抑制骨钙化基质中的骨连接素促进羟磷石结晶的形成并规律排列基质中的骨连接素促进羟磷石结晶的形成并规律排列胶原纤维的成熟和类骨质的正常是骨盐沉积的基础胶原纤维的成熟和类骨质的正常是骨盐沉积的基础
6、骨形态发生蛋白(骨形态发生蛋白(BMPs)与骨的生成相关)与骨的生成相关123. 溶骨作用(溶骨作用(osteolysis)骨的溶解和消失骨的溶解和消失,包括基质的水解和骨盐的溶解,主,包括基质的水解和骨盐的溶解,主要由破骨细胞引起要由破骨细胞引起。又称:又称:骨吸收(骨吸收(boneresorption)脱钙(脱钙(decalcification)13(二)常(二)常见钙代代谢异常异常1高钙血症高钙血症(hypercalcemia)概概念:血钙浓度超过念:血钙浓度超过2.75mmol/L常见表现:恶心、呕吐、便秘、嗜睡、神志不清等常见表现:恶心、呕吐、便秘、嗜睡、神志不清等病程长时可发生组织
7、内钙沉积病程长时可发生组织内钙沉积14常见病因:常见病因:原发性甲状旁腺功能亢进原发性甲状旁腺功能亢进甲状旁腺素异位分泌甲状旁腺素异位分泌恶性肿瘤骨转移恶性肿瘤骨转移维生素维生素D中毒中毒其它疾病其它疾病超过超过9090152低钙血症低钙血症(hypocalcemia)概概念:血钙浓度低于念:血钙浓度低于2.25mmol/L常见表现:手足抽搐、肌痉挛、喉鸣、惊厥等常见表现:手足抽搐、肌痉挛、喉鸣、惊厥等骨质钙化障碍包括佝偻病骨质钙化障碍包括佝偻病、骨质软化等、骨质软化等16常见病因:常见病因:甲状旁腺功能低下甲状旁腺功能低下维生素缺维生素缺D缺乏缺乏慢性肾功能衰竭慢性肾功能衰竭新生儿低钙血症新
8、生儿低钙血症长期低钙饮食或吸收不良等情况长期低钙饮食或吸收不良等情况17二、磷代谢异常二、磷代谢异常(一)常(一)常见磷代磷代谢异常异常 1 1高磷血症高磷血症 (hyperphosphatemia )概概 念:血磷浓度念:血磷浓度成人大于成人大于1.61mmol/L儿童大于儿童大于1.90mmol/L常见表现:常见表现:低钙血症、骨质钙化障碍低钙血症、骨质钙化障碍18高磷血症常见病因高磷血症常见病因:甲状旁腺功能减退甲状旁腺功能减退维生素维生素D增多症增多症慢性肾功能不全或衰竭慢性肾功能不全或衰竭多发性骨髓瘤及某些骨病多发性骨髓瘤及某些骨病新生儿生理状况下血钙较成人低,而血磷新生儿生理状况下
9、血钙较成人低,而血磷明显高于成人明显高于成人192低磷血症低磷血症 (hypophosphatemia)概概 念:血磷浓度小于念:血磷浓度小于0.8 mmol/L常见表现:鸭态步、骨痛、佝偻病、病理性骨折、常见表现:鸭态步、骨痛、佝偻病、病理性骨折、 精神错乱、抽搐和昏迷等精神错乱、抽搐和昏迷等 20低磷血症常见病因低磷血症常见病因:甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进佝偻病或骨软化症佝偻病或骨软化症糖利用增加糖利用增加乳糜泻乳糜泻肝硬化和肾脏疾病肝硬化和肾脏疾病使用雌激素、避孕药和苯巴比妥等药物使用雌激素、避孕药和苯巴比妥等药物21(二)低磷血症与代(二)低磷血症与代谢性骨病性骨病 1.低磷性佝
10、偻病和骨软化症低磷性佝偻病和骨软化症血磷显著降低,并有明显的肌无力血磷显著降低,并有明显的肌无力病人下肢无力,步态蹒跚或呈鸭态步病人下肢无力,步态蹒跚或呈鸭态步2.X连锁家族性低磷血症连锁家族性低磷血症又称遗传性低血磷性维生素又称遗传性低血磷性维生素D抵抗性佝偻病抵抗性佝偻病病因:肾小管对磷的重吸收障碍;肠道对磷的吸收减少病因:肾小管对磷的重吸收障碍;肠道对磷的吸收减少后果:血磷降低而引起佝偻病的骨改变后果:血磷降低而引起佝偻病的骨改变22三、镁代谢异常三、镁代谢异常(一)常(一)常见镁代代谢异常异常 1 1低镁血症低镁血症(hypomagnesemia)概概 念:念:血清镁低于血清镁低于0.
11、75mmol/L常见表现:常见表现:神经神经-肌肉障碍和精神与行动的异常肌肉障碍和精神与行动的异常23消化道吸收障碍消化道吸收障碍尿路丢失增多尿路丢失增多内分泌疾病内分泌疾病其它疾病其它疾病低镁血症常见病因低镁血症常见病因242 2高镁血症高镁血症(hypermagnesemia)概概 念:念:血清镁高于血清镁高于1.25mmol/L常见病因:常见病因:肾脏疾病肾脏疾病内分泌疾病内分泌疾病其它疾病其它疾病25(二)(二)镁代代谢异常与代异常与代谢性骨病性骨病 u大鼠实验表明,大鼠实验表明,低低镁幼鼠的幼鼠的钙化骨减少、化骨减少、发生生多种骨骼畸形多种骨骼畸形u高高镁可影响成骨作用,可影响成骨作
12、用,发生骨生骨营养不良养不良返回章目录返回章目录26第二节第二节激素调节与代谢性骨病激素调节与代谢性骨病 27一、甲状旁腺素一、甲状旁腺素 (parathormone,PTH)(一)甲状旁腺素合成及分泌(一)甲状旁腺素合成及分泌甲状甲状旁腺旁腺主细主细胞胞 前甲状旁前甲状旁腺素原腺素原 115aa115aa甲状旁甲状旁腺素原腺素原 90aa90aaPTH PTH 84aa84aa28(二)(二)PTH的的生理作用:升高血生理作用:升高血钙、降低血磷、降低血磷 1. 对骨的作用骨的作用 动员骨骨钙入血,使血入血,使血钙升高升高增加骨吸收和骨生成,骨吸收大于骨生成增加骨吸收和骨生成,骨吸收大于骨生
13、成2.对肾的作用对肾的作用钙重吸收钙重吸收磷重吸收磷重吸收保钙排磷保钙排磷293.对小肠的作用对小肠的作用PTH激活肾脏激活肾脏1-1-羟化酶羟化酶 活性活性D D3 3增加增加 肠道吸收肠道吸收钙增加钙增加30(三)甲状旁腺功能异常与代(三)甲状旁腺功能异常与代谢性骨病性骨病轻型的原发性甲状旁腺功能亢进患者轻型的原发性甲状旁腺功能亢进患者中重型原发性甲状旁腺功能亢进患者中重型原发性甲状旁腺功能亢进患者典型骨病变:纤维性囊性骨炎(棕色瘤)典型骨病变:纤维性囊性骨炎(棕色瘤)31二、降钙素二、降钙素(calcitonin,CT)(一)降(一)降钙素的合成与分泌素的合成与分泌甲状腺滤泡旁细胞合成和
14、分泌甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌单链多肽,由单链多肽,由32个氨基酸残基组成个氨基酸残基组成血钙是影响血钙是影响CT分泌的主要因素分泌的主要因素32抑制破骨、促进成骨抑制破骨、促进成骨抑制肾小管对钙、磷的重吸收抑制肾小管对钙、磷的重吸收抑制肾维生素抑制肾维生素D-1-羟化酶活性羟化酶活性因雌激素减少而减少因雌激素减少而减少(二)降钙素的生理作用(二)降钙素的生理作用降低血钙、降低血磷降低血钙、降低血磷其主要作用机制为:其主要作用机制为:33三、三、活性维生素活性维生素D (一)活性(一)活性维生素生素D的的生成生成 34(二)活性(二)活性维生素生素D的生理作用:升高血的生理作用:升高血钙、升高
15、血磷、升高血磷 基本途径基本途径活性维活性维生素生素D D靶细胞上维靶细胞上维生素生素D D受体受体激素受体激素受体复合物复合物二聚体二聚体维生素维生素D D反应元件反应元件相关基因的相关基因的转录和翻译转录和翻译钙磷代钙磷代谢调控谢调控视黄醛视黄醛X X受体受体 351.对小肠的作用:促进小肠对钙磷的吸收和转运对小肠的作用:促进小肠对钙磷的吸收和转运小肠粘膜上皮细小肠粘膜上皮细胞维生素胞维生素D D受体受体活性维活性维生素生素D D相关基因的转相关基因的转录和翻译录和翻译钙结合蛋白钙结合蛋白表达上调表达上调Ca2+-Mg2+ ATP酶增加酶增加小肠钙转小肠钙转运增加运增加362.对骨的作用:
16、溶骨和成骨的双重作用对骨的作用:溶骨和成骨的双重作用活性维活性维生素生素D D增加破骨细胞增加破骨细胞数量和活性数量和活性协同协同PTHPTH增加增加破骨细胞数量破骨细胞数量增加血钙增加血钙增加胶原增加胶原促进溶骨促进溶骨(低血钙时)(低血钙时)促进成骨促进成骨(高血钙时)(高血钙时)3.对肾脏的作用:促进肾小管对钙、磷的重吸收对肾脏的作用:促进肾小管对钙、磷的重吸收37(三)(三)维生素生素D缺乏与代缺乏与代谢性骨病性骨病1 1佝佝偻病和骨病和骨软化症化症 活性维生素活性维生素D D缺乏缺乏儿童儿童成人成人骨质软化症骨质软化症佝偻病佝偻病382 2肝性佝肝性佝偻病病 肝功能肝功能障碍障碍25
17、-25-羟化羟化酶下降酶下降25-羟化酶活性维生活性维生素素D D缺乏缺乏胆道阻塞钙胆道阻塞钙皂形成皂形成 维生素维生素D D吸收障碍吸收障碍维生素维生素D D缺乏缺乏佝偻病症状佝偻病症状393 3肾性佝性佝偻病、病、肾性骨性骨营养不良养不良 (renalosteodystrophy) 肾功能肾功能障碍障碍1-1-羟化羟化酶下降酶下降活性维生活性维生素素D D缺乏缺乏尿磷减少尿磷减少尿钙增加尿钙增加血磷增加血磷增加血钙减少血钙减少佝偻病佝偻病症状症状404.维生素生素D依依赖性佝性佝偻病(病(vitaminDdepedentrickets,VDDR)又称)又称假性维生素假性维生素D缺乏症缺乏症
18、。其特。其特点点为:肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞1-羟化酶先天性缺陷羟化酶先天性缺陷常染色体隐形遗传常染色体隐形遗传维生素维生素D缺乏症状典型,发病早缺乏症状典型,发病早大剂量活性维生素大剂量活性维生素D治疗可使疾病缓解治疗可使疾病缓解415.维生素生素D抵抗(抵抗(vitaminDresistance)机体机体对正常正常剂量甚至大量甚至大剂量的量的维生素生素D或或1,25-(OH)2D3的低反的低反应或无反或无反应现象象其特点为:其特点为:维生素维生素D受体基因突变:常染色体隐性遗传受体基因突变:常染色体隐性遗传常见的有三个主要位点:常见的有三个主要位点:Q259E、G319V和和R73X临
19、床上具有典型的佝偻病症状和体征临床上具有典型的佝偻病症状和体征约约50%的患者对任何形式的维生素的患者对任何形式的维生素D治疗无效治疗无效42钙磷代谢的激素调节钙磷代谢的激素调节43包括雌激素和雄激素,对处于生长阶段的个体骨骼发包括雌激素和雄激素,对处于生长阶段的个体骨骼发育和成熟十分重要。育和成熟十分重要。雌激素雌激素对对1,25-(OH)2D3的合成、降钙素和的合成、降钙素和PTH分泌均分泌均有重要的调节作用。有重要的调节作用。雄性激素雄性激素能促进蛋白质和骨基质的合成,促进肌肉和能促进蛋白质和骨基质的合成,促进肌肉和骨骼生长。骨骼生长。国内外报道中老年人骨矿物质丢失速度与血清性激素国内外
20、报道中老年人骨矿物质丢失速度与血清性激素含量呈负相关。含量呈负相关。四、性激素四、性激素44定义:定义:骨质疏松症是一种全身性的骨量减少,以骨质疏松症是一种全身性的骨量减少,以骨组织显微结构退化为特征,并引起骨脆性增加、骨强骨组织显微结构退化为特征,并引起骨脆性增加、骨强度降低的疾病。此时骨矿物质和骨基质等比例减少,基度降低的疾病。此时骨矿物质和骨基质等比例减少,基本特点在于单位体积内骨组织量减少。本特点在于单位体积内骨组织量减少。分类:分类:原发性原发性继发性(其中继发性(其中退行性骨质疏松症退行性骨质疏松症发病率最高发病率最高)骨质疏松症骨质疏松症45退行性骨质疏松症的分型退行性骨质疏松症
21、的分型型骨型骨质疏松症(疏松症(绝经后骨后骨质疏松症)疏松症)型骨质疏松症(老年性骨质疏松症)型骨质疏松症(老年性骨质疏松症)46(一)(一)型骨型骨质疏松症疏松症基本原因是雌激素分泌不足基本原因是雌激素分泌不足破骨细胞过于活跃,骨转换增加破骨细胞过于活跃,骨转换增加骨矿含量减少,导致骨质疏松骨矿含量减少,导致骨质疏松表现为单位体积内的骨量减少表现为单位体积内的骨量减少血液生化指标基本正常血液生化指标基本正常但骨形成和骨吸收的指标有增高但骨形成和骨吸收的指标有增高47(二)(二)型骨型骨质疏松症疏松症中老年人骨的吸收大于骨形成,导致骨质疏松中老年人骨的吸收大于骨形成,导致骨质疏松细胞学基础:破
22、骨细胞的吸收增加细胞学基础:破骨细胞的吸收增加成骨细胞功能衰减成骨细胞功能衰减主要由于老年人身体各机能退化而致主要由于老年人身体各机能退化而致骨形成与骨吸收的生化指标均有降低倾向骨形成与骨吸收的生化指标均有降低倾向返回章目录返回章目录48第三节第三节血清钙磷镁的测定血清钙磷镁的测定 49一、血清钙的测定一、血清钙的测定(一)血清(一)血清钙测定方法概述定方法概述总钙测定定 v标标 本:本:血清或低浓度肝素抗凝血浆血清或低浓度肝素抗凝血浆v测定方法:滴定法、比色法、火焰光度法、测定方法:滴定法、比色法、火焰光度法、 原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等 v
23、决定性方法:同位素稀释决定性方法:同位素稀释- -质谱法质谱法 (IFCC)v参考方法:原子吸收分光光度法参考方法:原子吸收分光光度法 (IFCC)v常规方法:邻甲酚酞络合酮常规方法:邻甲酚酞络合酮(O-CPC)法法 (卫生部)(卫生部)50(二)血清(二)血清钙测定方法概述定方法概述离子离子钙测定定 标标本:本:血清、低浓度肝素抗凝血浆或全血血清、低浓度肝素抗凝血浆或全血测定方法:生物学法、透析法、超滤法、测定方法:生物学法、透析法、超滤法、金属指示剂法、金属指示剂法、ISE法等法等参考方法:参考方法:ISE法法51(三)血清(三)血清钙测定定总钙测定定O-CPC 法法1.测定原理测定原理(
24、总)钙(总)钙O-CPC紫红色螯合物紫红色螯合物(575nm)pH108-羟基喹啉羟基喹啉2.方法评价方法评价操作简便、快速、稳定,同时适于手工和自动化分析操作简便、快速、稳定,同时适于手工和自动化分析反应体系的反应体系的pH值对结果影响较大值对结果影响较大52(四)血清(四)血清钙测定定离子离子钙测定定ISE 法法1.测定原理测定原理Nernst方程式:在一定条件下,方程式:在一定条件下,ISE的电的电位与溶液中的被测离子浓度的对数成正比位与溶液中的被测离子浓度的对数成正比2.方法评价方法评价操作简便、快速、重复性好操作简便、快速、重复性好准确度和敏感性高,影响因素少准确度和敏感性高,影响因
25、素少53二、血清磷的测定二、血清磷的测定(一)血清磷(一)血清磷测定方法概述定方法概述标标本:本:血清、肝素化血浆血清、肝素化血浆常用方法:常用方法:磷钼酸还原法、磷钼酸紫外分光光度法、酶磷钼酸还原法、磷钼酸紫外分光光度法、酶法、原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等法、原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等决定性方法:决定性方法:同位素稀释质谱法同位素稀释质谱法常规方法:常规方法:磷钼酸紫外分光光度法、磷钼酸还原法磷钼酸紫外分光光度法、磷钼酸还原法54(二)血清磷(二)血清磷测定定磷磷钼酸酸还原法原法1.测定原理测定原理无机磷无机磷钼酸铵钼酸铵磷钼酸磷钼酸复合物复合物钼蓝钼蓝(650nm)硫
26、酸亚铁硫酸亚铁或米吐尔或米吐尔2.方法评价方法评价方法简便、快速,稳定方法简便、快速,稳定体系中加入体系中加入TritonX-100等表面活性剂,则不需要等表面活性剂,则不需要除蛋白即可直接测定除蛋白即可直接测定55(三)血清磷(三)血清磷测定定酶酶法法1.测定原理测定原理次黄嘌次黄嘌呤核苷呤核苷 嘌呤核苷嘌呤核苷磷酸化酶磷酸化酶 次黄次黄嘌呤嘌呤 黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶 H H2 2O O2 2尿尿酸酸无机磷无机磷TrinderTrinder反应反应 2.方法评价方法评价血清磷测定的发展方向血清磷测定的发展方向显色稳定,线性范围宽,干扰因素小,可用于自动化分析显色稳定,线性范围宽,干扰因素
27、小,可用于自动化分析所用的酶试剂比较贵所用的酶试剂比较贵56三、血清镁的测定三、血清镁的测定(一)血清(一)血清镁测定方法概述定方法概述标标本:血清(本:血清(非钙离子络合抗凝剂)非钙离子络合抗凝剂)测定方法:比色法、原子吸收分光光度法测定方法:比色法、原子吸收分光光度法、酶法、酶法、同位素稀释质谱法等同位素稀释质谱法等决定性方法:同位素稀释质谱法决定性方法:同位素稀释质谱法参考方法:原子吸收分光光度法参考方法:原子吸收分光光度法常规方法:甲基麝香草酚蓝(常规方法:甲基麝香草酚蓝(MTB)比色法)比色法Calmagite染料结合法染料结合法57(二)血清(二)血清镁测定定比色法比色法1.测定原
28、理测定原理镁离子镁离子MTBEGTA掩蔽钙离子掩蔽钙离子蓝紫色复合物蓝紫色复合物(600nm600nm)2.方法评价方法评价方法简单、实用,可用于自动化分析方法简单、实用,可用于自动化分析采血后应尽快分离血清,而且避免溶血采血后应尽快分离血清,而且避免溶血EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸EGTA:乙二醇二乙醚二胺四乙酸乙二醇二乙醚二胺四乙酸 58(三)血清(三)血清镁测定定酶酶法法1.测定原理测定原理异柠檬酸异柠檬酸 -酮戊二酸酮戊二酸 NADPNADP+ +NADPHNADPH(340nm340nm处吸光度下降)处吸光度下降) 镁离子,镁离子,ICD2.方法评价方法评价成本低廉、影响因素小,
29、线性范围宽成本低廉、影响因素小,线性范围宽试剂稳定性欠佳,试剂稳定性欠佳,4下只能保存下只能保存2周左右周左右返回章目录返回章目录59第四节第四节 骨代谢异常的生物化学测定骨代谢异常的生物化学测定60一、骨代谢调节激素的测定一、骨代谢调节激素的测定(一)甲状旁腺素的(一)甲状旁腺素的测定定1.测定方法概述测定方法概述v存在形式:存在形式:PTH-N、PTH-C和和PTH-Mv测定形式:测定形式:PTH-C、PTH-M和完整和完整PTHv主要方法:主要方法:RIA、IRMA、ELISA、ICMA等等国外采用国外采用IRMA法和法和ICMA法测定完整的法测定完整的PTH分子分子国内应用最普遍的是国
30、内应用最普遍的是RIA法法61IRMA:免疫放射法:免疫放射法ICMA:免疫化学发光法:免疫化学发光法2. RIA法测定法测定PTHv测定对象:测定对象:PTH-M和和PTH-Cv方法类型:竞争性方法类型:竞争性RIA法法125I标记标记PTH-M和和PTH-C125I标记的标记的PTH-M和和PTH-C与病人样本中的与病人样本中的PTH-M和和PTH-C竞争抗体结合位点。竞争抗体结合位点。62(二)(二)维生素生素D的的测定定1.测定方法概述测定方法概述v25-(OH)D3是反映机体维生素是反映机体维生素D营养状态的理想指标营养状态的理想指标v1,25-(OH)2D3更适合用受体结合法进行分
31、析更适合用受体结合法进行分析v25-(OH)D3的测定方法:的测定方法:RIA-CPB和和HPLC等等v1,25-(OH)2D3的测定方法:的测定方法:RIA、RRA、生物学方法等、生物学方法等以以RRA和和RIA最为普遍最为普遍RIA-CPB:放免竞争性蛋白结合法:放免竞争性蛋白结合法RRA:放射受体法:放射受体法632.25-(OH)D3的测定的测定v目前主要采用目前主要采用RIA法法v佝偻病大鼠血清中维生素佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白为特异性的结合物结合蛋白为特异性的结合物v基本流程:基本流程:有机溶剂提取血清有机溶剂提取血清与放射性标记物竞争与维生素与放射性标记物竞争与维生素D结合
32、蛋白结合结合蛋白结合反应平衡后分离游离型和结合型标记物反应平衡后分离游离型和结合型标记物液闪计数、计算浓度液闪计数、计算浓度v评价:评价:方法简便,结合蛋白较稳定方法简便,结合蛋白较稳定测定前都需要对测定前都需要对25-(OH)D3提取纯化提取纯化643.1,25-(OH)2D3的测定的测定(1)RRAv采用维生素采用维生素D缺乏或正常的鸡肠道维生素缺乏或正常的鸡肠道维生素D受体受体v采用采用Sep-Pak色谱柱代替高效液相色谱的纯化步骤色谱柱代替高效液相色谱的纯化步骤(2)RIAv采用佝偻病大鼠血清中维生素采用佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白作为特异性结合蛋白作为特异性的结合物,比受体更稳定
33、,更方便的结合物,比受体更稳定,更方便65(三)降(三)降钙素的素的测定定1.生物分析法:生物分析法:降血钙效应分析降血钙效应分析2.放射免疫分析法:放射免疫分析法:样品样品CT、放射性标记、放射性标记CT竞争竞争性地与性地与CT特异性抗体结合特异性抗体结合3.夹心放射免疫分析:夹心放射免疫分析:快速、灵敏、特异快速、灵敏、特异66二、骨形成标志物的测定二、骨形成标志物的测定(一)骨(一)骨钙素素(osteocalcin,OC)的的测定定v又称骨又称骨-羧基谷氨酸蛋白(羧基谷氨酸蛋白(BGP)v由成骨细胞合成和分泌的一种活性多肽由成骨细胞合成和分泌的一种活性多肽v主要生理功能是维持骨的正常矿化
34、速率主要生理功能是维持骨的正常矿化速率v血骨钙素是反映骨代谢状态的一个特异和灵敏的生化指血骨钙素是反映骨代谢状态的一个特异和灵敏的生化指标标v测定测定BGP的方法应用最多的是放射免疫法和酶联免疫法的方法应用最多的是放射免疫法和酶联免疫法67(二)骨性碱性磷酸(二)骨性碱性磷酸酶酶(B-ALP)测定定 vALP是在碱性条件下催化磷酸酯水解的酶类是在碱性条件下催化磷酸酯水解的酶类vB-ALP来自成骨细胞,是骨形成的特异性标志物来自成骨细胞,是骨形成的特异性标志物v血清血清B-ALP测定方法:测定方法:总体分为电泳法和非电泳法总体分为电泳法和非电泳法应用较多的方法是放射免疫法应用较多的方法是放射免疫
35、法HPLC是目前是目前B-ALP测定分辨率最高的方法测定分辨率最高的方法68vB-ALP增高常见于:增高常见于:甲状腺、甲状旁腺功能亢进甲状腺、甲状旁腺功能亢进恶性肿瘤骨转移恶性肿瘤骨转移佝偻病、骨软化病佝偻病、骨软化病骨折和绝经后骨质疏松症等骨折和绝经后骨质疏松症等vB-ALP测定意义:测定意义:骨病早期诊断骨病骨病早期诊断骨病疗效的评价和预后的判断疗效的评价和预后的判断骨转移癌的病程和治疗效果的监测骨转移癌的病程和治疗效果的监测69v型胶原前肽是胶原的延伸段型胶原前肽是胶原的延伸段v多检测多检测型前胶原羧基前肽型前胶原羧基前肽(PICP)来评价骨形成来评价骨形成vPICP的检测大多采用的检
36、测大多采用RIA和电化学发光免疫分析(和电化学发光免疫分析(ECL)v血清中血清中型胶原前肽水平型胶原前肽水平在一定范围内是反映成骨细胞活在一定范围内是反映成骨细胞活动和骨形成以及反映动和骨形成以及反映型胶原合成速率的特异指标型胶原合成速率的特异指标(三)(三)型胶原前型胶原前肽测定定70三、骨吸收标志物的测定三、骨吸收标志物的测定vHOP是体内胶原代谢的终产物之一是体内胶原代谢的终产物之一v尿尿HOP排出量可以反映骨吸收和骨转换程度排出量可以反映骨吸收和骨转换程度v尿尿HOP增高见于:儿童生长期、甲状旁腺功能亢进增高见于:儿童生长期、甲状旁腺功能亢进骨转移癌、慢性肾功能不全骨转移癌、慢性肾功
37、能不全畸形性骨炎、佝偻病和软骨病畸形性骨炎、佝偻病和软骨病高转换的骨质疏松患者高转换的骨质疏松患者v尿尿HOP指标特异性较差,也缺乏灵敏性指标特异性较差,也缺乏灵敏性v尿尿HOP测定方法:分光光度法测定方法:分光光度法离子交换色谱法和反相离子交换色谱法和反相HPLC法法(一)尿(一)尿羟脯氨酸脯氨酸(hydroxyproline,HOP)71吡啶酚,脱氧吡啶酚吡啶酚,脱氧吡啶酚v型胶原降解产物型胶原降解产物型胶原交联型胶原交联N末端肽末端肽型胶原交联型胶原交联C末端肽末端肽v型胶原降解产物是反映骨吸收和骨转换的良好指标型胶原降解产物是反映骨吸收和骨转换的良好指标(二)(二)型胶原交型胶原交联降
38、解降解产物物测定定72v脱氧吡啶酚(脱氧吡啶酚(D-Pyr)和吡啶酚()和吡啶酚(Pyr)是)是型胶原分型胶原分子之间构成胶原纤维的交联物子之间构成胶原纤维的交联物v尿中尿中Pyr和和D-Pyr浓度是反映骨胶原降解和骨吸收的最浓度是反映骨胶原降解和骨吸收的最灵敏和特异的生化指标之一灵敏和特异的生化指标之一v尿中尿中D-Pyr的含量通常用尿肌酐来校正的含量通常用尿肌酐来校正v常用方法:常用方法:HPLC-荧光检测法、竞争性酶免疫法荧光检测法、竞争性酶免疫法73v型胶原交联型胶原交联C末端肽(末端肽(CTX)和)和型胶原交联型胶原交联N末端末端肽(肽(NTX)均是)均是型胶原分解的产物。型胶原分解
39、的产物。v血清血清CTX水平是破骨细胞胶原降解的灵敏指标:水平是破骨细胞胶原降解的灵敏指标:与骨形态计量学骨吸收参数呈显著正相关与骨形态计量学骨吸收参数呈显著正相关与其它骨吸收生化指标如与其它骨吸收生化指标如Pyr和和D-Pyr呈正相关呈正相关v常用常用ELISA法测定法测定74vTRAP主要存在于破骨细胞主要存在于破骨细胞v血血TRAP水平主要反映破骨细胞活性和骨吸收状态水平主要反映破骨细胞活性和骨吸收状态v血浆血浆TRAP增高见于:增高见于:原发性甲状旁腺机能亢进、慢性肾功能不全、畸形性骨炎原发性甲状旁腺机能亢进、慢性肾功能不全、畸形性骨炎骨转移癌、卵巢切除术后、高转换率的骨质疏松等骨转移
40、癌、卵巢切除术后、高转换率的骨质疏松等v血浆血浆TRAP降低见于:降低见于:骨吸收降低的疾病,如甲状旁腺功能降低骨吸收降低的疾病,如甲状旁腺功能降低vTRAP活性测定方法:免疫法活性测定方法:免疫法(缺少特异性识别骨(缺少特异性识别骨TRAP的检测方法)的检测方法)(三)抗酒石酸酸性磷酸(三)抗酒石酸酸性磷酸酶酶(TRAP)返回章目录返回章目录751.骨组织包括细胞和细胞间质两部分,前者主要有骨细骨组织包括细胞和细胞间质两部分,前者主要有骨细胞、成骨细胞和破骨细胞三类,后者包括钙、磷、镁、胞、成骨细胞和破骨细胞三类,后者包括钙、磷、镁、钾、钠和锰等无机成分和胶原、非胶原蛋白、蛋白多钾、钠和锰等
41、无机成分和胶原、非胶原蛋白、蛋白多糖和脂质组成的有机成分。糖和脂质组成的有机成分。 2.钙、磷、镁以及骨组织的正常代谢受多种激素的严密钙、磷、镁以及骨组织的正常代谢受多种激素的严密调控,包括调控,包括PTH、CT、活性维生素、活性维生素D3和性激素等。和性激素等。PTH由甲状旁腺合成和分泌,升高血钙、降低血磷;由甲状旁腺合成和分泌,升高血钙、降低血磷;降钙素降低血钙、降低血磷;活性维生素降钙素降低血钙、降低血磷;活性维生素D3升高血钙、升高血钙、升高血磷。升高血磷。 【小结小结】763.测定血清矿物质以及相关激素的水平对于代谢性骨测定血清矿物质以及相关激素的水平对于代谢性骨病的诊断、鉴别诊断等
42、有重要的意义,包括血钙测定、病的诊断、鉴别诊断等有重要的意义,包括血钙测定、血磷测定、血镁测定以及血清中血磷测定、血镁测定以及血清中PTH、CT、维生素、维生素D及其代谢产物、及其代谢产物、骨钙素和骨性碱性磷酸酶等物质的测骨钙素和骨性碱性磷酸酶等物质的测定。定。 【小结小结】77 骨代谢异常生化诊断方面目前的进展主要在于:骨代谢异常生化诊断方面目前的进展主要在于: 开发灵敏度、特异性更高、操作更简便的测定开发灵敏度、特异性更高、操作更简便的测定方法用于更方便、更准确地测定这些物质成分。方法用于更方便、更准确地测定这些物质成分。 探索骨代谢疾病新的生化标志物并确定其参考探索骨代谢疾病新的生化标志物并确定其参考范围、临床意义。范围、临床意义。【展望展望】78返回章目录返回章目录