《人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养和分离课件共32张》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养和分离课件共32张（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 微生物的培养和应用微生物的培养和应用课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养一、培养基一、培养基1 1、概念概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养配置出供其生长繁殖的营养基基质。质。 一般都含有一般都含有 四类物质，四类物质，此外还要满足微生物生长对此外还要满足微生物生长对 、 以及以及 的的要求。要求。 2 2、营养成分营养成分：碳源碳源、氮、氮源源、水、无机盐、水、无机盐 pH pH 特殊营养物质特殊营养物质 O O2 2 3 3、分类分类：按按形形态态划划分分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养
2、基半固体培养基微生物在微生物在 培养基表面生培养基表面生长，可以形成肉眼可见的长，可以形成肉眼可见的菌落菌落固体固体 （由（由一个细胞一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落）繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落）根霉根霉 曲霉曲霉 青霉青霉按按用用途途划划分分基础培养基：基础培养基：鉴别培养基鉴别培养基: :含有一般微生物生长繁殖所需的基本营含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）用来将某种或某类微生物从混杂的微生物用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。在培养基中群体中分离出来的培养基。在培养
3、基中加加入特殊营养物质或化学物质入特殊营养物质或化学物质，有利于特定有利于特定微生物的生长，同时抑制其它微生物的生微生物的生长，同时抑制其它微生物的生长长。如。如 的培养基的培养基。选择培养基选择培养基: :用于鉴别不同类型微生物的培养基。微用于鉴别不同类型微生物的培养基。微生物产生某种代谢产物，与培养基中的生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特殊化学物质发生特定的化学反应特定的化学反应，产，产生明显的特征变化。如？生明显的特征变化。如？以尿素为唯一以尿素为唯一氮氮源、源、以纤维素为唯一碳源以纤维素为唯一碳源在以尿素为唯一在以尿素为唯一氮氮源的培养基中加入源的培养基中加入酚红指示
4、剂酚红指示剂，以纤维素为唯一碳源的培养基中加入以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红。刚果红。【例例】以下是单克隆抗体制备流程示意图：以下是单克隆抗体制备流程示意图： 根据培养基的根据培养基的_分类，图中分类，图中HATHAT培养基培养基属于属于_培养基培养基选择选择用途用途二、无菌技术二、无菌技术（1 1）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手，进行，进行 。（2 2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行 . .（3 3）为避免周围环境中微生物的污染，）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作实验
5、操作应在应在酒精灯火焰酒精灯火焰 附近进行附近进行。（4 4）实验操作时应）实验操作时应避免避免已经灭菌处理的材料用具已经灭菌处理的材料用具与周围的物品与周围的物品 相接触相接触。 清洁和清洁和消毒消毒灭菌灭菌目的：防止实验室的培养物目的：防止实验室的培养物 ；同时避免操；同时避免操作者自身被微生物感染。作者自身被微生物感染。 被其他微生物污染被其他微生物污染消毒消毒灭菌灭菌概念概念指使用指使用较为温和较为温和的物理或化的物理或化学方法仅杀死物体表面或内学方法仅杀死物体表面或内部部的的 微生物微生物( (不包括不包括 ) )指使用指使用强烈强烈的理化因素的理化因素杀死物体内外杀死物体内外 微微
6、生物，包括生物，包括 。常用常用方法方法适用适用对象对象操作空间、液体、双手等操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等器皿，培养基等部分部分芽孢和孢子芽孢和孢子所有所有芽孢和孢子芽孢和孢子煮沸消毒法、煮沸消毒法、 巴氏消毒法、巴氏消毒法、 化学药剂消毒法、化学药剂消毒法、 紫外线消毒法紫外线消毒法灼烧灼烧灭菌灭菌、 干热灭菌、干热灭菌、 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌煮沸煮沸消毒消毒法：法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：化学药剂：化学药剂：紫外线：紫外线：针对不耐高温的液体针对不耐高温的液体接种室、超净工作台接种室、超净工作台培养皿培养皿.吸管等玻璃器皿吸管等玻璃器皿耐
7、高温、需保持干燥耐高温、需保持干燥灼烧灭菌：灼烧灭菌：干热灭菌：干热灭菌：高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：接种环等金属工具接种环等金属工具实验操作者的双手实验操作者的双手培养基培养基1 1、消毒方法、消毒方法2、灭菌方法、灭菌方法 【20102010广州调研广州调研】下列实验方法及其结果合理下列实验方法及其结果合理的是的是 A A稀释的鸡蛋清溶液与蛋白酶混合后用双缩稀释的鸡蛋清溶液与蛋白酶混合后用双缩脲试剂检测会发生紫色反应脲试剂检测会发生紫色反应 B B酒精溶液与重铬酸钾溶液混合后在沸水浴酒精溶液与重铬酸钾溶液混合后在沸水浴条件下才会出现灰绿色条件下才会出现灰绿色 C C在植物组织培养中，可用酒
8、精对外植体进在植物组织培养中，可用酒精对外植体进行灭菌行灭菌 D D用二苯胺试剂鉴定用二苯胺试剂鉴定DNADNA时，在沸水浴条件时，在沸水浴条件下溶液呈蓝色下溶液呈蓝色（双选）（双选）计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板三、微生物培养的实验操作三、微生物培养的实验操作1、制备培养基、制备培养基制备培养基制备培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，才能用来倒平板。左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸，刚刚不烫手时用手触摸，刚刚不烫手时2.2.为什么需要使锥形瓶的为什么
9、需要使锥形瓶的瓶口通过火焰瓶口通过火焰？灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染有关问题有关问题防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。3.3.为什么将为什么将平板倒置平板倒置？2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法: :稀释涂布平板法稀释涂布平板法: :(1(1) )接接种种方方法法.连续划线，连续划线，.逐步稀释逐步稀释.梯度稀释，梯度稀释，.分别涂布分别涂布.将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并打开棉塞打开棉塞 将试管口通过火焰将试管口通过火焰
10、.将已将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。注意盖上皿盖。注意不要划破培养基不要划破培养基。.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。注意线。注意不要将最后一区的划不要将
11、最后一区的划线与第一区相连线与第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。入培养箱中培养。 倒置倒置 操作的第一步灼烧接种环是为了操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在避免接种环上可能存在的微生物污染培养物的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少数的增加，使每次划线时菌种的数目
12、逐渐减少，以便得到菌，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者种，避免细菌污染环境和感染操作者。 避免接种环温度太高，杀死菌种避免接种环温度太高，杀死菌种将涂布器浸将涂布器浸在盛有酒精在盛有酒精的烧杯中的烧杯中 取少量稀释液滴取少量稀释液滴加到培养基表面加到培养基表面 待酒精燃尽后待酒精燃尽后冷却冷却8 810s 10s 将沾有少量酒将沾有少量酒精的涂布器在精的涂布器在火焰上引燃火焰上引燃灼灼烧烧用涂布器将菌液均匀地用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂涂布在培养基表面。涂布时可转动培养
13、皿，使布时可转动培养皿，使涂布均匀涂布均匀稀稀释释涂涂布布平平板板法法(3)(3)菌种培养：菌种培养： 将接种的培养基（至少将接种的培养基（至少3 3个）和一个未个）和一个未接种的培养基接种的培养基倒置放入倒置放入3737的恒温箱中。的恒温箱中。(4)(4)实验结果观察实验结果观察: : 未接种的培养基表面是否有菌落生长？未接种的培养基表面是否有菌落生长？ 菌落的形态、大小、颜色？菌落的形态、大小、颜色？(5)(5)菌株的保存方法菌株的保存方法4 4冰箱保藏冰箱保藏甘油管藏（甘油管藏（- -2020）临时保存：临时保存：长期保存：长期保存：固体斜面固体斜面纯化大肠杆菌的实验是否需要设置对照实验
14、？纯化大肠杆菌的实验是否需要设置对照实验？【例例2 2】进行细菌接种培养实验时，以下哪个进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？操作步骤是非必要的？ A A双手带上胶手套双手带上胶手套 B B接种前后都灼烧接种环接种前后都灼烧接种环 C C接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面 试管口试管口 D D要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌 或加热灭菌或加热灭菌课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株一、筛选菌株无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源凝固剂凝固剂尿素是唯一氮源的
15、选择培养基尿素是唯一氮源的选择培养基二、统计菌落数目二、统计菌落数目用什么方法统计？用什么方法统计？稀释涂布平板法稀释涂布平板法显微镜直接计数显微镜直接计数一般选择菌落数在一般选择菌落数在 的平板进行计数。的平板进行计数。统计菌落数往往比活菌的实际数目统计菌落数往往比活菌的实际数目 。 30-300低低（酵母菌）（酵母菌）血球板计数法血球板计数法 2.2.计算公式计算公式 每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数（C CV V）M M，其中，其中C C代表代表某一稀释度下平板上生长的某一稀释度下平板上生长的平均菌落数平均菌落数，V V代表涂布代表涂布平板时所用的稀释液的体积（平板时所用的稀释液的体
16、积（mLmL），），M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。 稀释涂布平板法稀释涂布平板法统计菌落数目统计菌落数目1.1.理论依据：理论依据：恰当的稀释度恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将为了保证结果准确，通常将几个稀释度几个稀释度下的菌液都下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在涂布在平板上，培养后再选择菌落数在3030300300的平的平板进行计数。板进行计数。三、设置对照三、设置对照目的：目的：排除无关变量（非测试因素）的影响，排除无关变量（非测试因素）的影响，提高实验结果的可信度。提高实验结果的可信度。(1)(1)空白对照：空白对
17、照：培养基是否有杂菌污染培养基是否有杂菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照：牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。选择培养基上的菌落数较少。四、实验设计四、实验设计土壤土壤取样取样制备培养基制备培养基样品样品稀释稀释涂布涂布培养培养观察观察统计统计 1. 1.取样时，一般要铲去表层土。取样时，一般要铲去表层土。 2. 2.分别制备分别制备 的的选择性培养基和选择性培养基和牛肉膏蛋白胨培牛肉膏蛋白胨培养基养基（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌）（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌） 3. 3.不同
18、的微生物要采用不同的稀释度。不同的微生物要采用不同的稀释度。 4. 4.每个稀释度需倒每个稀释度需倒6 6个平板：个平板： 4 4个选择性培养基，个选择性培养基，3 3个涂布，个涂布，1 1个空白；个空白； 2 2个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。以尿素为唯一氮源以尿素为唯一氮源 将待测样品经一系列将待测样品经一系列1010倍稀释，然后选择倍稀释，然后选择三个稀释度三个稀释度的菌的菌液，分别取液，分别取0.1 mL0.1 mL接种到已制备好的平板上，将接种到已制备好的平板上，将同一稀释度同一稀释度加到加到三个或三个以上的平板上；三个或三个以上的
19、平板上；培养后，培养后，计算出同一稀释度菌落平均计算出同一稀释度菌落平均数数。三重复组三重复组求平均值使求平均值使结果更准确结果更准确五、实验结果的分析、评价五、实验结果的分析、评价(1)(1)空白对照：空白对照：是否有杂菌污染是否有杂菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照：牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的选择培养基上的菌落数较少菌落数较少。 结果：结果： 酚红指示剂酚红指示剂变变_，初步鉴定该细菌能够分解尿素，初步鉴定该细菌能够分解尿素 分析分析：细菌能分解尿素产生氨，使培：细菌能分解尿素产生氨，使培养基
20、呈碱性，氨增加养基呈碱性，氨增加pHpH升高，酚红由无升高，酚红由无色变为红色。色变为红色。 操作：操作：在以在以_为唯一氮源的培养基中为唯一氮源的培养基中加入加入 。尿素尿素（鉴别培养基）（鉴别培养基）红红色色六、实验结果的鉴定六、实验结果的鉴定酚红指示剂酚红指示剂课题课题3 3 分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离一、一、纤维素的分解纤维素的分解纤维素纤维素酶酶酶酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖（多糖）（多糖）与刚果红作用与刚果红作用红色复合物红色复合物 不与刚果红作用不与刚果红作用纤维素酶是一种复合酶纤维素酶是一种复合酶二二、实验设计实验设计：选择纤维素丰富的环境（将滤纸埋入约：选择纤维素丰富的环境（将滤纸埋入约10cm10cm土壤中）土壤中）: :配制配制 的选择培养基的选择培养基刚果红染色法刚果红染色法土壤取样土壤取样选择培养选择培养样品稀释样品稀释鉴别培养鉴别培养挑选产生挑选产生 的菌落的菌落以纤维素为唯一碳源以纤维素为唯一碳源透明圈透明圈唯一碳源唯一碳源液体培养基液体培养基三三、纤维素分解菌的进一步鉴定纤维素分解菌的进一步鉴定 发酵产纤维素酶的实验发酵产纤维素酶的实验纤维素酶测定：纤维素酶分解滤纸等纤维素后所纤维素酶测定：纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生产生的葡萄糖进行定量测定的葡萄糖进行定量测定。
