乳酸菌的分离及乳酸菌发酵的实验方案5

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1、乳酸菌的分离及乳酸菌发酵的实验方案.5乳酸菌的分离及乳酸菌发酵的实验方案一. 实验材料：新鲜乳酸饮料（20ml）、脱脂奶粉（140g ） （ 345g ）、蔗糖 （20g）、1.6%漠甲酚绿乙醇溶液（漠甲酚绿、无水乙醇、1ml）、酵母 膏（10g）、琼脂（20g）、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、 95%乙醇、沙黄）、 75%乙醇、香柏油、 1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙等二. 实验仪器与设备 高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、 培养箱、pH试纸、酸乳瓶（915 ）、培养皿（申90或申120mm） （4）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管

2、、天平、牛角匙、电炉、 量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、 500ml 锥 形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、 擦镜纸三. 实验步骤步骤总思路：菌种的分离、纯化（五天半）I菌种的鉴别（半天）I饮料培养基质的制作（一天）I接种、乳酸发酵（一天半）I、菌种分离培养BCG牛乳培养基的配制：（A）溶液一脱脂乳粉100g，水500ml, 加入1.6%漠甲酚绿（BCG ）乙醇溶液1ml,80C灭菌20min ;（B ）溶 液一酵母膏10g，水500ml,琼脂20g,PH6.8,121C湿热灭菌20min, 以无菌操作趁热将A、B溶液混合后倒平板。样品的

3、处理：按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检 样，放入装有90m l无菌水的三角瓶内，振摇混匀；用十倍稀释法稀释 成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5各种稀释度的样品液。平板划线分离：直接用接种环蘸取10-4、10-5两个稀释度的试管 中原液，在 BCG 牛乳培养基琼脂平板上划线分离，每稀释度做两个平 皿。置40C培养箱中培养48h。如出现圆形稍扁平的黄色菌落及周围 培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。口、菌种纯化配制脱脂乳试管培养基、分装、包扎，灭菌备用脱脂乳试管培养基成分：20g脱脂奶粉，200ml灭菌水、10g蔗 糖把配置好的脱脂乳培养基分装到15支试管中 选取经初步

4、鉴定的乳酸菌典型菌落，用接种环挑取转至脱脂乳试 管中,40C培养箱中培养824h。若牛乳出现凝固，无汽泡，呈酸性， 涂片镜检细胞为杆状或链球状（两种形状的菌种分别选入），革兰氏 染色显阳性，则可将其连续传代46次，最终选择出在36h能凝固 的牛乳管，作菌种待用。乳酸发酵及检测1.发酵在无菌操作下将分离的1株乳酸菌接种于装有300mL乳 酸菌培养液的500mL三角瓶中，4042C静止培养。2检测为了便于测定乳酸发酵情况，实验分2组。一组在接种培 养后，每68h取样分析，测定pH值。另一组在接种培养24h后每 瓶加入CaCO3 3g以防止发酵液过酸使菌种死亡），每68h取样，测 定乳酸含量（方法见

5、注），记录测定结果皿、酸乳培养基质的制作将脱脂乳和水以1:710（W/V ）的比例，同时加入5%6%的 蔗糖，充分混合，于8085C灭菌1015min，冷却至3540C, 作为制作饮料的培养基质。即脱脂乳15g、无菌水100ml、蔗糖6goIV、接种将纯种嗜热乳酸链球菌、保加利亚乳酸杆菌及两种等量混合菌液作为发酵菌剂，均以25%的接种量分别接入培养基质中即为饮料发 酵液。接种后摇匀，分装到已灭菌的酸乳瓶中，每一种菌的发酵液重 复分装35瓶，将瓶盖拧紧密封。V发酵将接种后的酸乳瓶置4042弋培养箱中培养34h时。培养时注 意观察，出现凝乳后停止培养。然后转入45弋冰箱中冷藏24h以上。 经此后熟阶段，达到酸度适中（pH44.5 ），凝块均匀致密，无乳清晰 出,无汽泡,获得较好口感和特有风味。四、感官鉴定 将两种单菌及其混合菌液发酵的酸乳进行从色、香、味进行比较， 将品评结果记录下来。品尝时若出现异味，表明酸乳污染了杂菌。乳酸检测方法1.定性测定取酸乳上清液的10mL于试管中，加入10% H2SO4 1mL，再加2% KMnO4 1mL，此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨 的硝酸溶液中浸泡的滤纸条搭在试管口上，微火加热试管至沸，若滤 纸变黑，则说明有乳酸存在，这里因为加热使乙醛挥发的结果。