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1、热灭活：温度在45C到62C之间，而时间则从15分钟到60分钟不等其中最常用的手法是 56C热处理30分钟。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，热灭活并不会 改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比 率也是微不足道的。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染。以56摄 氏度，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与 的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋 巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后
2、，在细胞 壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层 次较多且交联致密，革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染 后用酒精脱色，再用蕃红复染。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色, 加碘液媒染后用酒精脱色，再用蕃红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为 两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G+）。被酒精脱色复染成红色者 为革兰氏阴性菌（G-）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结 构诵诱性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、 白喉杆菌、碳疽杆
3、菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、 霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。原理：该染色法所 以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌 的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙 酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出， 结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类 脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初 染时的颜色，呈现蓝紫色。实验流程1、取载玻片
4、用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液 滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环 在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm 左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使 其薄而均匀。3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1mi n。6、水洗：用水缓慢
5、冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形 态。7、媒染：滴加1滴碘液，染1min,水洗。&脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30S至流出液无紫色，立即水洗。9、复染：滴加蕃红复染3-5m in,水洗。至此，革兰氏染色结束。血清与血浆区分血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已 被除去的血浆。血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不 加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡 黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维 蛋白块，所
6、以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板 释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如 凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。 但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成 分的分析，都以血清为样品。血浆是血液的液体成分，血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血 液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白， 还包括葡萄糖、无机盐离子、激素以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞，同时也是 运输分泌产物的主要媒介。将新鲜血液离心，使血细胞沉降，上层淡黄色清液即是血浆。血 浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。纤维蛋白原（英语：Fibrinogen,又称为血纤蛋白原）是一种蛋白质，能够溶解于水。血小 板破裂时，会释出凝血致活酶，在钙离子的作用下催化凝血酶原变成凝血酶，凝血酶将血浆 中原本可水溶的纤维蛋白原凝固成为变成不溶于水的纤维蛋白，纤维蛋白扭结其他血细胞成 团，凝固成为血块。是一种凝血因子。
