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1、65.120CCSB46备案号:XXXX-XXXX中华人民共和国农业行业标准43472023饲料添加剂丁酸梭菌FeedadditivesClostridiumbutyicum20230801实施20230411发布中华人民共和国农业农村部发布NY/T前言本文件按照GB/T标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中华人民共和国农业农村部畜牧兽医局提出.S本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(AC/TC)归口.本文件起草单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、浙江惠嘉生物科技股
2、份有限公司、山东宝来利来生物工程股份有限公司、河南金百合生物科技股份有限公司.本文件主要起草人:饶正华、曾新福、谷巍、李克克、张军民、刘金松、梁洺源、陆唯、焦京琳、高思祺、刘娜、徐海燕、谢秀兰.NY/T饲料添加剂丁酸梭菌范围本文件规定了饲料添加剂丁酸梭菌的术语和定义、技术要求、检验规则、标签、包装、运输、储存和保质期,描述了相应的取样和试验方法.本文件适用于以丁酸梭菌为菌种,经液体发酵、浓缩、载体吸附、干燥等工艺制得的饲料添加剂丁酸梭菌固态产品.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文
3、件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T饲料中水分的测定GB/T分析实验室用水规格和试验方法GB/T数值修约规则与极限数值的表示和判定GB饲料标签GB/T饲料中总砷的测定GB/T饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T饲料中汞的测定GB/T饲料中镉的测定GB/T饲料中沙门氏菌的测定GB/T饲料中霉菌总数测定方法GB/T饲料中大肠菌群的测定GB/T饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化高效液相色谱法NY/T饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T毒素的测定液相色谱串联质谱法术语和定义下列术语和定义适用于本文件.i丁酸梭菌Clostrdiumbutyrcum酪酸菌丁
4、酸梭状芽孢杆菌属于芽孢杆菌科梭菌属,大小为()m()m直或微弯的杆菌,单个或成对、短链排列;有芽孢,芽孢卵圆形或短杆状、偏中生或次端生;专性厌氧;革兰氏阳性,培养后期可变为革兰氏阴性.技术要求载体载体来自饲料原料目录或饲料添加剂品种目录.外观与性状产品颜色为白色至灰褐色,流动性好,颗粒大小均匀,无结块,无异物,无霉变,有丁酸梭菌发酵的特殊气味,无异味.项目指标总砷,mg/kg铅,mg/kg汞,mg/kg镉,mg/kg黄曲霉毒素Ba,g/kga玉米赤霉烯酮,
5、mg/kga脱氧雪腐镰刀菌烯醇,mg/kg霉菌总数,CFU/g大肠菌群,MPN/g沙门氏菌/(g)不得检出a此类指标仅适用于植物性载体生产的产品.项目指标丁酸梭菌活菌数,CFU/g水分/()NY/T菌种鉴别应符合附录A中所述的丁酸梭菌的形态和生理生化特性.必要时,进行分子生物学鉴定.质量指标应符合表的要求.表质量指标卫生指标应符合表的要求.表卫生指标取样取样原则样品的采集应遵循随机性、代表性的原则.取样过程应遵循无菌操作程序,防止一切可
6、能的外来污染.取样方法应在同一批次产品中采集样品,每件样品的取样量应满足微生物指标检验的要求,一般不少于g.独立包装不大于g的产品,取完整包装.独立包装大于g的产品,应用无菌取样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品,与从其他包装取的样品共同放入同一个无菌取样容器内作为一件样品.样品的保存和运输应在接近原有保存温度条件下运输及保存样品,或采取必要措施尽快将样品送达实验室检验,以防止样品中微生物数量
7、的变化.运输过程中应保持样品完整.试验方法外观与性状取适量试样于透明玻璃杯中,在自然光线下观察颜色,检查状态,嗅其气味.菌种鉴别观察亚硫酸铁琼脂上的菌落形态,挑取特征菌落进行革兰氏染色后在显微镜下观察菌体形态,并按附NY/T录A规定的生理生化特性进行试验鉴定.分子生物学鉴定见附录B.丁酸梭菌活菌数按照附录C的规定执行.水分按照GB/T的规定执行.总砷按照GB/T的规定执行.铅按照GB/T的规定执行.汞按照GB/T的规
8、定执行.镉按照GB/T的规定执行.黄曲霉毒素B、玉米赤霉烯酮按照NY/T的规定执行.脱氧雪腐镰刀菌烯醇按照GB/T的规定执行.霉菌总数按照GB/T的规定执行.大肠菌群按照GB/T的规定执行.沙门氏菌按照GB/T的规定执行.检验规则组批以相同菌株、相同的发酵工艺、相同生产条件、连续生产或同一班次生产的产品为一批,但每批产品不得超过t.出厂检验出厂检验项目为外观与性状、丁酸梭菌活菌数、水分.型式检验型式检验项目为本文件第
9、章规定的所有项目,在正常生产情况下,每半年至少进行次型式检验.在有下列情况之一时,亦应进行型式检验:a)产品定型投产时;b)生产工艺、配方或主要原料来源有较大改变,可能影响产品质量时;c)停产个月以上,重新恢复生产时;d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时;e)管理部门提出检验要求时.判定规则所验项目全部合格,判定为该批产品合格.检验结果中有任何指标不符合本文件规定时,可自同批产品中重新加倍取样进行复检.复检结果即使有一项指标不符合本文件规定,则判定该批产品不合格.卫生指标中的微生物项目
10、不得复检.各项目指标的极限数值判定按照GB/T修约值比较法执行.NY/T标签、包装、运输、贮存和保质期标签按照GB的规定执行.包装包装材料应无毒、无害、防潮.运输运输中防止包装破损、日晒、高温、雨淋,不得与有毒有害物质共运.储存阴凉储存,仓库应通风、干燥、能防暴晒、防雨淋,有防虫、防鼠设施,不得与有毒有害的物质混储.保质期未开启包装的产品,在规定的运输、储存条件下,产品保质期应与标签中标明的保质期一致.特征结果特性结果淀粉水解山梨醇产酸明胶液化鼠李糖产酸葡
11、萄糖产酸蜜二糖产酸乳糖产酸核糖产酸木糖产酸棉籽糖产酸蔗糖产酸水杨苷产酸注:“”表示试验结果为阳性;“”表示试验结果为阴性.NY/T附录A(规范性)形态与生理生化特性A形态丁酸梭菌菌体形态为:大小为()m()m直或微弯的杆菌,单个或成对、短链排列;有芽孢,芽孢卵圆形或短杆状、偏中生或次端生;专性厌氧;革兰氏阳性,培养后期可变为革兰氏阴性.在本文件中规定的试验条件下,丁酸梭菌的特征菌落形态为:菌落圆形,中心为黑色实心.A生理生化特性丁酸梭菌的生理生化特性见表A.A表丁酸梭菌生理生化特性靶基因名称扩增引物序列测序引物序列SrRNAF:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG同扩增引物R:TACGACTTAACCCCAATCGCNY/T附录B(资料性)分子生物学鉴定用丁酸梭菌纯培养物提取DNA,作为模板.以SrRNA基因的通用引物(见表B),进行PCR扩增、纯化和测序,用基因数据库进行序列比对,与模式菌株(ATCC)的序列相似性时,判定为丁酸梭菌.