《HPLC日常维护.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HPLC日常维护.doc（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、HPLC日常维护方法一、压 力 异 常操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决办法。1、没有压力显示，没有流动相流动原 因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被破坏2、更换保险丝3、控制器（软件）设定不正确或设定失败3、a.采用恰当的设定b.修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a.补充流动相b.更换入口滤头7、止逆阀损坏7、更换止逆阀8、漏夜（密封圈坏）8、拧紧接头或更换密封圈2、流动相流动正常，但没有压力显示原 因解决方法1、仪表损坏1、更换仪表2、压力传感器损
2、坏2、更换压力传感器3、压力持续偏高原 因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a.在允许情况下反冲色谱柱b.更换筛板 c.更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a.使用恰当的流动相 b.冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器4、压力持续偏低原 因解决方法1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏夜2、确定漏夜位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低柱温5、控制
3、器失常5、维修或更换控制器5、压力不断上升原 因解决方法1、见列表C2、见列表C6、压力降为零原 因解决方法1、见列表A、B1、见列表A、B7、压力不断下降，但不回零原 因解决方法1、见列表D1、见列表D8、压力波动原 因解决方法1、泵中有气体1、a.溶剂脱气 b.从泵中出去气体2、止逆阀损坏2、更换止逆阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、a.溶剂脱气 b.改变脱气方法（使用在线脱气法等）5、系统漏夜5、确定漏夜位置并维修6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动二、漏 液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏夜的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏夜和塑料接
4、头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏夜的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。1、接头处漏夜原 因解决方法1、接头松动1、拧紧2、接头磨损2、更换3、接头过紧3、a.拧松，再重新拧紧 b.更换4、接头被污染4、a.拆下清洗 b.更换5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件2、泵漏夜原 因解决方法1、止逆阀松动1、a.拧紧止逆阀（不必拧的过紧） b.更换止逆阀2、接头松动2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏3、a.更换混合器密封 b.更换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻
5、尼器损坏6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏7、a.检查隔膜，如果漏夜立即更换 b.检查手紧接头，损坏的立即更换8、排空阀的损坏8、a.拧紧排空阀 b.更换排空阀3、进样阀漏夜原 因解决方法1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞2、更换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管4、色谱柱漏夜原 因解决方法1、尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板（参考下表）5、筛板选择指导物质粒径筛板孔径3-4u0.5u5
6、-20u2u6、检测器漏夜原 因解决方法1、流通池垫片损坏1、a.避免过大的背景压力（压力降）b.更换垫片2、流通池窗破碎2、更换窗口3、手紧接头漏夜3、拧紧或更换4、废液管阻塞4、更换废液管5、流通池阻塞5、重新安装或更换三、谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。1、峰拖尾原 因解决方法1、筛板阻塞1、a.反冲色谱柱 b.更换进口筛板 c.更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a.使用更长的色谱柱 b.改变流动相或更换色谱柱
7、4、流动相PH选择错误4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应5、a.加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b.更改色谱柱2、峰前延原 因解决方法1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见A1，A23、峰分叉原 因解决方法1、保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品
8、溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。4、峰变形原 因解决方法样品过载减少样品载量5、早出的峰变形原 因解决方法样品溶剂选择不恰当a.减少进样体积运用低极性样品溶剂b.运用低极性样品溶剂6、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解决方法柱外效应a.调整系统连接（使用更短、内径更小的管路b.使用小体积的流通池7、K增加时，拖尾更严重原 因解决方法1、二级保留效应，反相模式1、a.加入三乙胺（或碱性样品） b.加入乙酸（或酸性样品） c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d.更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式2、a.加入三乙胺（或碱性样品） b.加入乙酸（或酸性样品） c.加入水（或多官能团化合物）
9、d.试用另一种方法3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）8、酸性或碱性化合物的峰拖尾原 因解决方法缓冲不合适1、a.使用浓度50-100mM的缓冲液 b.使用PKa等于流动相PH值的缓冲液9、额外的峰原 因解决方法1、样品中有其他组分1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a.增加运行时间或梯度斜率 b.提高流速3、空位或鬼峰3、a.检查流动相是否纯净 b.使用流动相作为样品溶剂 c.减少进样体积10、保留时间波动原 因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱11、保留时间不断变化原 因
10、解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a.更换合适的流动相 b.选择合适的混合流动相12、基线漂移原 因解决方法1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要
11、用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线8、使用保护柱，如有必要，在进行之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子9、使
12、用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相10、检测器没有设定在最大吸收波长10、将波长调整至最大吸收波长处13、基线噪音（规则的）原 因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气2、漏夜2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏夜，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6
13、、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器14、基线噪音（不规则的）原 因解决方法1、漏夜1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏夜，是否有盐出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏夜。2、流动相污染、变质或有低质溶剂配成2、检查流动相的组成3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置15、宽峰原 因解决方法1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏夜（特别是在柱子和检测器）3、见section3。检查接头是否松动、泵是否漏夜、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响
