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1、溶液的配制一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成 小份贮存于-20C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮 存于-20C。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate ）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖
2、后， 轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成 小份贮存于-20C。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶 液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate ）:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）:溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约90m
3、l水中，用冰乙酸调溶 液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三 钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2），然后用水定 容至 100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT （异丙基硫代另-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份
4、贮 存于-20C。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgC26H20于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直 至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20C。10mg/mlRnase （无 DNase）（DNasefree RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol
5、/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用 1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌）， 氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10%SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量
6、水中使终体积为100ml。 100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至 完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% Xgal （5-溴-4-氯-3-吲哚一卜半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20C。lOOxDenhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll, 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及
7、杂质，分装成小份于-20C贮存。10x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选） 水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存
8、于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20%PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质
9、量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二 水）3mol/L氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h，然后 在15 psi条件下高
10、压灭菌20min以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱） 贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶 解138g
11、于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量 水中使终体积为 1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl (pH7.
12、4-8.0, 25C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸 （11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50xTris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA
13、水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 补足1L5xTris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 补足1L染料1溴酚蓝（ bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 二甲苯青 FF（ xylene cyanole FF ）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到1
14、00ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解 用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液（ gel loading solutions）6x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)1.8g15mg25mg 补足到10ml6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝1.5ml 1%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF1.5ml 1%二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)15%聚蔗糖（400型）1.5g水补足到10ml6x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25 %溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型）水2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1%二甲苯青 FF1.5g补足到10ml6x甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝
