《食品营养与安全作业.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《食品营养与安全作业.doc（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、三聚氰胺的质量检测讨论0902062001 杨子涵 09食品（2）班摘要：2008年中国奶制品污染事件是中国的一起食品安全事件。事件起因是很多食用三鹿集团生产的奶粉的婴儿被发现患有肾结石，随后在其奶粉中被发现化工原料三聚氰胺。三聚氰胺的检测方法逐渐被人们关注，本文主要介绍了高效液相色谱法法测定。关键词：三聚氰胺，HPLC2008年中国奶制品污染事件是中国的一起食品安全事件。事件起因是很多食用三鹿集团生产的奶粉的婴儿被发现患有肾结石，随后在其奶粉中被发现化工原料三聚氰胺。在奶粉中添加三聚氰胺是为了增加牛奶中的氮含量，而老的测定蛋白质的方法凯氏定氮法无法区别三聚氰胺氮和氨基酸氮。1. 三聚氰胺的理
2、化性质 三聚氰胺（Melamine）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类。1.1物理性质外观与性状：白色、单斜晶体。 熔点()：300（升华）， 相对密度（水=1）：1.573 ，相对蒸气密度（空气=1）：4.34 ，饱和蒸气压(kPa)：6.66 ，水中溶解度(20)：0.33g ，溶解性：不溶于冷水，溶于热水，微溶于乙二醇、甘油、乙醇，不溶于乙醚、苯、四氯化碳
3、。1.2化学性质不可燃，在常温下性质稳定。水溶液呈弱碱性（pH值=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.56.5）与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。2国家检测标准2008年10月7日，国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会批准发布了原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法(GB/T22388-2008)国家标准，规定了三聚氰胺的检测方法的检测定量限。在国标中包括三个方法：第
4、一法高效液相色谱法，第二法液相色谱-质谱/质谱法，第三法气相色谱-质谱联用法。本文中注重介绍第一法高效液相色谱法。2.1 原理试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。2.2 试剂与材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。2.2.1 甲醇：色谱纯。2.2.2 乙腈：色谱纯。2.2.3 氨水：含量为2528。2.2.4 三氯乙酸。2.2.5 柠檬酸。2.2.6 辛烷磺酸钠：色谱纯。2.2.7 甲醇水溶液：准确量取50 mL 甲醇和50 mL 水，混匀后备用。2.2.8 三氯乙酸溶液(1)：准确称取10 g 三氯乙
5、酸于1 L 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。2.2.9 氨化甲醇溶液(5)：准确量取5 mL 氨水和95 mL 甲醇，混匀后备用。2.2.10 离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约980 mL 水溶解，调节pH 至3.0 后，定容至1L 备用。2.2.11 三聚氰胺标准品：CAS 108-78-01，纯度大于99.0%。2.2.12 三聚氰胺标准储备液：准确称取100 mg(精确到0.1 mg)三聚氰胺标准品于100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液(3.2.7)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL 的标准储备液，于4避光保存。2.2
6、.13 阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg，3 mL，或相当者。使用前依次用3 mL 甲醇、5 mL 水活化。2.2.14 定性滤纸。2.2.15 海砂：化学纯，粒度0.65 mm0.85 mm，二氧化硅(SiO2)含量为99。2.2.16 微孔滤膜：0.2 m，有机相。2.2.17 氮气：纯度大于等于99.999。2.3 仪器和设备2.3.1 高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。2.3.2 分析天平：感量为0.0001 g和0.01 g。2.3.3 离心机：转速不低于4000 r/min。2.3.
7、4 超声波水浴。2.3.5 固相萃取装置。2.3.6 氮气吹干仪。2.3.7 涡旋混合器。2.3.8 具塞塑料离心管：50 mL。2.3.9 研钵。2.4 样品处理2.4.1 提取2.4.1.1 液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等称取2 g(精确至0.01 g)试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液(2.2.8)和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，加入5 mL水混匀后做待净化液。2.4.1.2 奶酪、奶油和巧克力
8、等称取2 g(精确至0.01 g)试样于研钵中，加入适量海砂(试样质量的4倍6倍)研磨成干粉状，转移至50 mL具塞塑料离心管中，用15 mL三氯乙酸溶液(2.2.8)分数次清洗研钵，清洗液转入离心管中，再往离心管中加入5 mL乙腈，余下操作同3.4.1.1中“超声提取10 min，加入5 mL水混匀后做待净化液”。注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。2.4.2 净化将2.4.1中的待净化液转移至固相萃取柱(2.2.13)中。依次用3 mL水和3 mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6 mL氨化甲醇溶液(2.2.9)洗脱。整个固相萃取过程流速不超过
9、1 mL/min。洗脱液于50下用氮气吹干，残留物(相当于0.4 g样品)用1 mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜(2.2.16)后，供HPLC测定。2.5 高效液相色谱测定2.5.1 HPLC 参考条件a) 色谱柱：C8柱，250 mm4.6 mm(i.d.)，5 m，或相当者；C18柱，250 mm4.6 mm(i.d.)，5 m，或相当者。b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液(2.2.10)-乙腈(85+15，体积比)，混匀。C18柱，离子对试剂缓冲液(2.2.10)-乙腈(90+10，体积比)，混匀。c) 流速：1.0 mL/min。d) 柱温：40。e) 波长：240
10、nm。f) 进样量：20 L。2.5.2 标准曲线的绘制用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80 g/mL 的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。基质匹配加标三聚氰胺的样品2.5.3 定量测定待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。2.5.4 结果计算试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算获得：A c V1000X= f (1)As m1000式中：X 试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；A 样液中三聚氰胺的峰面积；c 标准溶液中三聚氰胺的浓
11、度，单位为微克每毫升(g/mL)；V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；As 标准溶液中三聚氰胺的峰面积；m 试样的质量，单位为克(g)；f 稀释倍数。2.6 空白实验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。2.7 方法定量限本方法的定量限为2 mg/kg。2.8 回收率在添加浓度2 mg/kg10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%110%之间，相对标准偏差小于10%。2.9 允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。3 三聚氰胺检测方法分析HPLC法是目前研究三聚氰胺与三聚氰酸残留最常用的检测方法,具有高精确度、假阳性低等优点,但样品处理复杂
12、、废弃试剂易造成环境污染。质谱联用技术则具有更高的分析灵敏度、且假阳性率更低,特异性更强,但仪器设备十分昂贵,不利于检测工作的全面开展。 ELISA法是较好的残留检测方法,具有快速、简便等优点,但容易出现假阳性问题,不能作为残留物的最终确证方法。理想的分析技术应该满足以下条件:高灵敏度或低检测限,高度专一,分析时间短,成本低廉,便捷易携带,少量或不用预处理程序,适合复杂基质测定。但目前使用的分析方法几乎没有一种能完全满足上述条件。因此,研制简单、快速和便携化的残留分析技术,实现分析过程自动化或智能化以提高检测准确性,缩短检测时间,是今后国内检测三聚氰胺与三聚氰酸残留方法的目标和方向, 值得我们
13、深入研究和开发。此外,三聚氰胺与三聚氰酸测试面临的另一个挑战是测试方法没有得到统一。萃取溶剂的组成、溶剂/重量比、萃取程序本身、样品处理和最终所使用的仪器和测试条件等都会产生重要偏差,从而导致错误的结果,这将非常不利于各项检测工作的开展。目前我国只有饲料和乳制品中三聚氰胺残留的行业标准,因此迅速开展各种食品中三聚氰胺与三聚氰酸残留检测标准的制定十分必要,以保证消费者的健康。4参考文献1 宋书锋,鲁杰,安娟,等.中华人民共和国国家标准原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法GB/T 22388 - 2008S.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会,2008:1-13.2 张美金
14、,林海丹,林峰,等.高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺含J.中国卫生检验杂志,2007,12(17):2205-2206.3 马丽莎,郑光明,朱新平,等. 食品中三聚氰胺与三聚氰酸残留检测研究进展J .中国兽药杂志, 2010, 44 (8) : 4851.4 陈君义,孙慧宇,苏燕,等.食品和饲料中三聚氰胺检测技术研究进展J. 粮油食品科技,2010,18(5):38-435 彭科怀，王艳. 高效液相色谱二级管阵列法测定含乳食品中三聚氰胺含量J.预防医学情报杂志,2010,26(7):589-592.6 黄芳,黄晓兰,吴惠勤,等.高效液相色谱- 质谱法对饲料及食品添加剂中三聚氰胺的测定J. 分析测试学报,2008,27(3):313-315.7 陈葭玲. 高效液相色谱法测定三聚氰胺甲醛食品容器中三聚氰胺单体迁移量J. 质量技术监督研究,2010,(2):40-43.8 辜雪英，吴小花,仇满珍.饲料中三聚氰胺残留量高效液相色谱测定的研究J.江西化工，2007(2):70-73. 9 王顺来,王自良.动物性食品三聚氰胺污染检测技术研究进展J.现代农业科技,2011,(18):353-355.
