体外抑菌实验方案

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1、体外抑菌实验方案体外实验室是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代 谢的影响，可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌停止生 长或部分抑制，借以判断药物对细菌有无抗菌作用或抗菌范围。体外实验是细菌 与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一 致，需两方面综合分析进行评价。一、体外实验的准备（一）实验菌株的选择一般使用实验室保存的典型菌株和临床分离菌株。（二）培养基的制备选择适合细菌生长繁殖的营养物质的培养基（三）实验器皿的准备抗菌实验的步骤需用无菌操作，应用的试管、平皿、吸管等与细菌接触的器 皿，均需经过高压灭菌后应用。（四）药物的准备

2、实验时称取一定量的药物，铵盐基折算成效价/mg，配成溶液或制成均匀的 混悬液，pH调至中性。（五）菌液制备抗菌药物实验是针对细菌的作用，实验菌株不能含其他杂菌。（六）细菌计数将菌稀释至0D值为0.002 （实验时1ml菌液加1ml药液OD值降为0.001）二、体外抗菌实验（试管稀释法）（一） 1ml 药液采用 8 个梯度：500、100、50、25、10、5、2.5、1.25 （ug）。 配置方法： 每个药液浓度为1ml，8个梯度总共694ug，取整700ug。（1）称取700ug待测物，溶解在1.4ml溶剂中得到500ug/ml的药液。（2）从500mg/ml的药液中取0.4ml，加入1.6

3、ml溶剂得到100ug/ml的药液。（3）从100mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到50ug/ml的药液。(4) 从50mg/ml的药液中取0.5ml，加入0.5ml溶剂得到25ug/ml的药液。(5) 从50mg/ml的药液中取0.5ml，加入2ml溶剂得到10ug/ml的药液。(6) 从10mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到5ug/ml的药液。(7) 从5mg/ml的药液中取1ml,加入1ml溶剂得到2.5ug/ml的药液。(8) 从2.5mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到1.25ug/ml的药液。 (图示如下图)(二) 1ml菌液采用OD值0.002的菌液配置方法：菌悬液在600nm波长下测定其OD值，根据具体的OD值按10 倍稀释使菌悬液的OD值接近0.002,在接近0.002后缩小稀释倍数使菌悬液OD 值为0.002。(三) 菌药混合培养取稀释药液各1ml分装于小试管内(从稀到浓可不换吸管)，做好标记，然 后取经培养16-18h细菌培养液，每管1ml，每小试管总量为2ml,置37C培养 箱内培养16-18h,检查结果。(四) 结果分析如加入细菌的药液管仍未澄清，即表明无细菌生长，则该管药物有抗菌作用； 如为浑浊，即表明细菌已生长，该管药物无抗菌作用。以完全无细菌生长的最低 药物浓度作为细菌对药物的敏感度，即为该药物最小抑菌浓度。