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1、磷的测定方法1.原理食物中的有机物经酸氧化分解,使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成兰色化合物-钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值,以测定磷的含量。反应式为:H3PO4+12(NH4)3MoO4+21HNO3(NH4)3PO412MoO3+21NH4NO3+12H2O2.适用范围依据中华人民共和国国家标准:GB12393-90,此方法适用于所有食品及保健品中磷元素含量的测定。3.仪器722可见分光光度计4.试剂(1)硝酸(G.R),高氯酸(G.R)硫酸(A.R)(2)混合酸消化液:硝酸+高氯酸按4+1混合(3)15%(V/V)硫酸溶液:
2、取15ml硫酸缓慢加入到80ml水中,并定容至100ml。(4)5%(W/V)钼酸铵溶液:取5g钼酸铵,用15%硫酸溶液稀释至100ml。(5)对苯二酚溶液:取0.5g对苯二酚于100ml水中,溶解后加一滴浓硫酸。(6)20%(W/V)亚硫酸钠溶液(注:此溶液需在每次实验前临时配制):称取一定量的亚硫酸钠,用蒸馏水溶解即可。(7)标准质控物:猪肝粉(国家标准物质研究中心提供),质控物需室温干燥保存。(8)国家标准物质中心提供:磷标准储备溶液,浓度为1000g/mL(9)标准中间液的配制:吸取1ml磷标准储备溶液,然后移入100ml容量瓶中,用去离子水定容至100ml,浓度为10mg/L5.操作
3、步骤5.1样品消化:实验操作需在无元素污染的环境中进行。准确称取样品干样(0.3-0.7g左右),湿样(1.0g左右),饮料等其他液体样品(1.0-2.0g左右),然后将其放入50ml消化管中,加混酸15ml(油样或含糖量高的食品可多加些酸),过夜。次日,将消化管放入消化炉中,消化开始时可将温度调低(约130左右),然后逐步将温度调高(最终调至240左右)进行消化,一直消化到样品冒白烟液体变成无色或黄绿色为止。若样品未消化完全可再加几毫升混酸,直到消化完全。消化完后,待凉,再加5ml去离子水,继续加热,直到消化管中的液体约剩2ml左右,取下,放凉,然后转移至10ml试管中,再用去离子水冲洗消化
4、管2-3次,并最终定容至10ml。样品进行消化时,应同时做样品空白消化。5.2磷标准曲线:分别吸取标准储备液1.0ml、3.0ml、5.0ml至20ml刻度试管中,然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液,加蒸馏水定容至20ml,混匀,静置30分钟,在波长660nm处测定其吸光度,由此计算出回归系数,利用回归方程计算或绘制成校正曲线。5.3测定:取样品及空白液各2ml分别至20ml试管中,然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液,加蒸馏水定容至20ml,混匀,静置30分钟,在波长660nm处测定其吸光度,并根据测出的吸光度在标准曲线上算得未知溶液中的磷含量。6.计算X (mg/100g) =(Cm)(V1V2)100式中:X-样品中磷含量,mg/100gC-由标准曲线及回归方程算得样品测定液中磷含量,mgm-称样量gV1-消化液定溶总体积,mlV2-测定用消化液的体积,ml此元素最低检出限为2g7.注意事项(1)亚硫酸钠溶液最好每次实验前临时配制,否则可能会使钼蓝溶液发生浑浊。(2)其次定容完后,静置时间不亦过长,否则溶液颜色将会加深,其结果不准确。