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1、跑核酸电泳配制琼脂糖凝胶50TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。Tris242 gNa2EDTA2H2O37.2 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。用时稀释成1TAE Buffer (pH8.5)Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5TBE或1TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加
2、入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容 量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60左右，如需要可在此时加入0.175l goldwell,并充分混匀（
3、一定要）。 注：goldwell是一种对皮肤和眼睛有刺激性物质。使用含有 goldwell的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度 一般在35 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4下保存，一 般可保存25天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp) 0.5% 0.7% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0% 1,00030,000 80012,000 50010,000 4007,000 2003,00
4、0 502,0006 Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度30 mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)Xylene Cyanol FF0.05%(W/V)Bromophenol Blue 配制量 500 ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。EDTA4.4gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg 2.向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。 3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4.用去离子水定容至500 ml
5、后，室温保存。跑核酸电泳1） 将Agarose凝胶放入电泳槽中1) 加样: 在点样板或一次性手套上混合3I DNA样品和3I 6 Loading Buffer, 6 Loading Buffer的最终稀释倍数应不小于1X.用微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序). 2) 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳. 3) 观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.
