《细胞培养常见问题及回答》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞培养常见问题及回答（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞培养常见问题及回答细胞培养常见问题及回答1. 如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM中培养的细胞，很可能在 DMEM或M199中同样很容易生长。总 之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V培养基（SFM） 在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件：细胞系细胞类型种组织推荐使用的培养基293成纤维细胞人胚胎肾MEM, 10%热灭活马血清3T6成纤维细胞小鼠胚胎DMEM, 10% 胎牛血清A549上皮细胞人肺癌F-12K, 10% 胎牛血清A9成纤维细胞小鼠结缔组织DMEM, 10%胎牛血清AtT-
2、20上皮细胞小鼠垂体肿瘤F-10, 15% 马血清和2.5%胎牛血清BALB/3T3成纤维细胞小鼠胚胎DMEM, 10% 胎牛血清BHK-21成纤维细胞仓鼠肾GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAABHL-100上皮细胞人乳房McCoy5A, 10% 胎牛血清BT成纤维细胞牛鼻甲骨细胞MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAACaco-2上皮细胞人结肠腺癌MEM, 20% 胎牛血清 和NEAAChang上皮细胞人肝脏BME, 10% 小牛血清CHO-K1上皮细胞仓鼠卵巢F-12, 10% 胎牛血清Clone 9上皮细胞大鼠肝脏F-12K, 10% 胎牛血清Clone
3、 M-3上皮细胞小鼠黑素瘤F-10, 15% 马血清和2.5%胎牛血清COS-1成纤维细胞猴肾DMEM, 10% 胎牛血清COS-3成纤维细胞猴肾DMEM, 10% 胎牛血清COS-7成纤维细胞猴肾DMEM, 10% 胎牛血清CRFK上皮细胞X-I+ 猫肾MEM, 10% 胎牛血清和NEAACV-1成纤维细胞猴肾MEM, 10% 胎牛血清D-17上皮细胞狗骨肉瘤MEM, 10% 胎牛血清和NEAADaudi成淋巴细胞人淋巴瘤病人血液RPMI-1640, 10% 胎牛血清GH1上皮细胞大鼠垂体肿瘤F-10, 15% 马血清和2.5%胎牛血清GH3上皮细胞大鼠垂体肿瘤F-10, 15% 马血清和2
4、.5%胎牛血清H9f成淋巴细胞人T细胞淋巴瘤RPMI-1640, 20% 胎牛血清HaK上皮细胞仓鼠肾BME, 10% 小牛血清HCT-15上皮细胞人结肠直肠腺癌RPMI-1640, 10% 胎牛血清HeLa上皮细胞人子宫颈癌MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA (in suspension, S-MEM)HEp-2上皮细胞人喉癌MEM, 10% 胎牛血清HL-60成淋巴细胞人早幼粒细胞白血病RPMI-1640, 20% 胎牛血清HT-1080上皮细胞人纤维肉瘤MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAAHT-29上皮细胞人结肠腺癌McCoys 5A, 10% 胎牛血清HUVEC内皮细胞人
5、脐带F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素盐100 ug/ ml-10上皮细胞小鼠睾丸癌F-10, 15% 马血清和2.5%胎牛血清M-9成淋巴细胞人骨髓瘤病人骨髓RPMI-1640, 10% 胎牛血清JEG-2上皮细胞人绒毛膜癌MEM, 10% 胎牛血清Jensen成纤维细胞大鼠肉瘤McCoys 5A, 5% 胎牛血清Jurkat成淋巴细胞人淋巴瘤RPMI-1640, 10% 胎牛血清K-562成淋巴细胞人骨髓性的白血病RPMI-1640, 10% 胎牛血清KB上皮细胞人口腔癌MEM, 10% 胎牛血清和NEAAKG-1骨髓白细胞人红白血病病人骨髓IMDM, 20% 胎牛血清L2上皮细胞大
6、鼠肺F-12K, 10% 胎牛血清L6大鼠骨骼肌成肌细胞DMEM, 10% 胎牛血清LLC-WRC 256上皮细胞大鼠癌Medium 199, 5% 马血清McCoy成纤维细胞小鼠未知MEM, 10% 胎牛血清MCF7上皮细胞人乳腺癌MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素WEHI-3b类巨噬细胞小鼠骨髓单核细胞白血病DMEM, 10% 胎牛血清WI-38上皮细胞人胚胎肺BME, 10% 胎牛血清WISH上皮细胞人羊膜BME, 10% 胎牛血清WS1人胚胎皮肤MEM, 10% 胎牛血清和NEAAXC上皮细胞大鼠肉瘤MEM, 10% 胎牛血清和NEAAY-1上皮细胞小鼠肾上
7、腺瘤F-10, 15% 马血清和2.5%胎牛血清2. 为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细 胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。3. L 谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。4. GlutaMAX-l是什么
8、？培养细胞如何利用GlutaMAX-l ?这个二肽有多稳定？GlutaMAX-l二肽是L 谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的a氨基用L 丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L 谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-l二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-l二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。5. 为什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中被用来作为 PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以 模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的 培养基。由于酚红干扰
9、检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。6.如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200 - 2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入 0.1毫升的0.4 %的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。7.如何消除组织培养的污染？当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污 染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产
10、生毒性的 剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素 B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。3每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2 - 3代。5在无抗生素的培养基中培养细胞一代。6重复步骤4。7在
11、无抗生素的培养基中培养 4 6代，确定污染是否以已被消除。8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话， 细胞也可以代谢丙酮酸钠。9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在 2-8 C时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻 粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20 C储存胎牛血清，避免反复冻融。10.目录上说，Hank s平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank s平衡盐溶液（HBS ）和Earle 平衡盐溶液（EBS ）有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在 Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L） 中高。
