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1、免疫诊断一 概述1. 抗原抗体结合反应的特点 血清学试验或血清学反应 ：(1) 具有特异性：抗原的表位与抗体的抗原结合点结构互补(2) 可逆性结合 (3) 具有可见性：抗原与相应抗体结合后能肉眼直接观察 (4) 抗原抗体比例对反应现象的影响2. 抗原抗体结合反应的条件 (1)温度：最适温度为37 (2)酸碱度：最适pH 6-8 (3)电解质: 可促进抗原与抗体的结合，常用生理盐水二 抗原或抗体的检测方法(一) 凝集反应：1. 概述：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，出现肉眼可见团块状凝集物的现象叫做凝集反应。凝集反应颗粒性抗原：细菌、红细胞等，肉眼观悬浊液，显微镜下有一定形态；沉淀反
2、应可溶性抗原：如蛋白质、多糖等，肉眼观澄清透明，显微镜下看不到其形态；2. 直接凝集试验： 将己知的颗粒性抗原(或抗体)与未知抗体(或抗原)直接进行反应而出现肉眼可见团块状凝集物的试验。（1） 玻片凝集试验：已知抗体测抗原用于血型检查、细菌鉴定和分型等（2） 试管直接凝集试验：已知抗原定量测抗体如肥达氏反应 3. 间接凝集反应：可溶性抗原吸附于载体颗粒(乳胶颗粒、红细胞等)制成免疫微球或致敏载体颗粒，然后再与相应抗体进行反应而出现载体颗粒凝集的现象。 本法常用于检测类风湿因子、抗Rh抗体等。 （Notice：如将抗体包被在载体上称反向间接凝集试验）4. 间接凝集抑制反应：将可溶性抗原先与相应抗
3、体混合，然后再加入抗原致敏的载体颗粒，由于抗体已与可溶性抗原结合，故不能再与致敏载体颗粒发生间接凝集。（二）沉淀反应：1. 概述：指可溶性抗原（细菌培养滤液、组织浸出液、血清蛋白等）与相应抗体结合，形成肉眼可见沉淀物的反应 因沉淀反应多在琼脂凝胶中进行，故又称为琼脂扩散试验或免疫扩散试验。 2.2. 分类：单向免疫扩散试验 ，双向免疫扩散试验 ，免疫电泳 ，免疫比浊(三) 免疫标记技术 概念：指用荧光素、酶、放射性同位素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体结合反应。具有敏感、快速、能定性和/定量甚至定位等优点。 1. 免疫荧光法：将荧光素与抗体结合成荧光抗体，再与待测抗原(组织切片、细胞涂片)进行结
4、合反应，最后在荧光显微镜下观察(荧光素在紫外线的激发下可发射肉眼可见的荧光) 常用荧光素：异硫氰酸荧光素 (FITC) 发黄绿色荧光 藻红蛋白 (PE) 发红色荧光应用：免疫荧光法常用于检查病原微生物的抗原或抗体，也可用于免疫细胞CD分子鉴定。2. 酶免疫测定：指用酶标抗体进行的抗原抗体结合反应。同时利用了酶对底物的高效催化作用以及抗原抗体的特异性结合反应。 标记物：辣根过氧化物酶 (HRP) 碱性磷酸酶 (AP) 酶联免疫吸附试验(ELISA) ： 抗原或抗体包被在固相上(聚苯乙烯微孔板等)，然后加入酶标抗体或抗原进行反应，然后用洗涤液洗去未结合的或游离的抗原或抗体，再加入底物显色。观察有无
5、显色反应，以对抗体或抗原进行定性、定量检测(用酶标测定仪测定光密度值)。类型：A.双抗夹心法 B.间接法 C.酶联免疫斑点试验（ELISPOT） D.免疫组化技术用标记物标记的抗体与组织或细胞的抗原反应，结合形态学 检查，对抗原进行定性、定量、定位检测的技术3. 放射免疫测定法(RIA) ： 常用标记物：125I、131I 液相法、固相法 应用：常用于微量物质的测定，如激素、IgE等 4. 化学发光免疫分析 ： 常用标记物：吖啶酯、鲁米诺 应用：常用于血清超微量活性物质的测定，如甲状腺素等的检测 5. 免疫印迹法(Western blotting) ： 凝胶电泳与固相免疫法结合的一种方法，常用于检测多种病毒的抗体或抗原。例如检测HIV抗体等
