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1、- L-岩藻糖苷酶检测的几点临床价值乔博明（北京大学人民医院检验科 100044）1引言-L-岩藻糖苷酶(-L-Fucosidase，AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，早期测定本酶主要用于遗传性AFU缺乏症的诊断，并借以与其他遗传性粘多糖贮积病的鉴别。1980 年Deugnier发现原发性肝癌(PHC)患者的AFU升高，并被后来研究证实，故有人提出AFU可作为PHC的肿瘤标志物，从此对AFU临床意义有了更多更深的研究。近年来研究发现，AFU对某些疾病的发生、发展均具有重要意义，特别在肝炎、妊娠等多种临床病理、生理中得到应用。2 生物学特性AFU系统命名为-L岩藻糖苷岩藻糖水解酶（EC3.2.1.
2、51）其生理功能是参与含岩藻糖基的各种糖脂、糖蛋白、粘多糖等大分子物质的分解代谢。AFU广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中，胎盘、胎儿组织、脑、肺、肝、胰、肾以及血清、尿液、唾液和泪液中均含有AFU。AFU的化学本质是一种糖蛋白，血清中的AFU分子量为270390 kD。用神经氨酸苷酶处理血清AFU，可使其分子量降至37 kD4 kD，在pH值3.85.9酶活性基本消失，而在pH6.27.0酶活性增强。AFU分子具有多态性，这可能由决定这些酶单位形成的结构基因位点的突变引起。AFU的糖蛋白性质和分子中含唾液酸说明它确实存在核蛋白合成后的修饰，从而使血清中的AFU独具特性1。3 血清-L-岩
3、藻糖苷酶对于原发性肝癌的诊断原发性肝癌（PHC）是一种常见的恶性肿瘤，血清甲胎蛋白（AFP）曾被认为是PHC的特异性好、阳性率高的标志物，但有30左右的PHC患者血清AFP阴性。因此，寻找AFP以外的肝癌标志物显得尤为重要。近年来，血清-L-岩藻糖苷酶（AFU）被认为是肝癌的一个新的标志物。肝癌时AFU升高机制：AFU是一种溶酶体酶，广泛分布于各种组织细胞体液中，参与糖蛋白等多种生物活性物质的分解代谢。肝脏是富含溶酶体的器官，当肝脏细胞癌变时，AFU合成增加并大量释放入血，其机制可能为：血清AFU激活物存在影响酶活性。有文献报道，PHC及正常人血清都能使标准的AFU活性升高，正常人血清AFU激
4、活物与AFU活性呈正相关。而在PHC时，血清AFU激活物含量增加且和AFU关系发生紊乱，提示AFU激活物含量增加对PHC血清AFU活性升高起重要作用；AFU底物浓度升高而使AFU代偿性升高。PHC时血清PBF（蛋白结合岩藻糖）和岩藻糖基化AFU浓度增加，人体内与蛋白结合的岩藻糖为L-岩藻糖，含岩藻糖的糖蛋白是AFU生理底物之一。有研究表明，PHC患者血清PBF含量增加。癌外肝细胞合成AFU增加，肝癌细胞可分泌某种刺激因子作用于正常肝细胞，促使酶蛋白合成增加，引起血清AFU活性增加。其他消化道肿瘤即使发生肝转移，血清AFU也无明显增加示这种刺激具有肝癌特异性2。 临床资料3，4，5表明，PHC患
5、者血清AFU 活性不仅显著高于正常对照，而且也显著高于转移性肝癌、胆管细胞癌、恶性间皮瘤、恶性血管内皮细胞瘤、肝硬化、先天性肝囊肿和其它良性肝占位性病变。对PHC诊断的阳性率为6484%，特异性达 90%左右。张世民5等报道肝癌患者中AFU、N-乙酰氨基-D葡萄糖苷酶、N-乙酰氨基-D半乳糖苷酶和甘露糖苷酶活性均显著高于正常对照，阳性率依次为67.8%，37.3%，32.2%和18.6%，其中AFU的阳性率最高。这四种糖苷酶的活性密切相关，而与AFP水平不相关。某些良性肝病和肝外疾患时也可出现一种糖苷酶活性升高，但同时出现几种糖苷酶活性升高主要见于肝癌。因此，AFU 对PHC的诊断和鉴别诊断具
6、有重要意义，尤其是AFP阴性者价值更大。综上所述，对于原发性肝癌,AFU 是一个有意义的肿瘤标志物，应用于临床将能较大地提高PHC的诊断率。4 血清AFU联合碱性磷酸酶(ALP)检测在妊娠监测中的价值-L-岩藻糖苷酶(AFU)作为原发性肝癌( PHC)的特异性及诊断性血清标志物 3 也愈来愈多的被临床所接受和应用。血清碱性磷酸酶(ALP)在临床上主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断。在临床工作中又发现在孕妇的妊娠晚期,血清AFU、ALP含量均有所增高。王玉洁6通过对妊娠晚期孕妇血清中岩藻糖苷酶(AFU)、碱性磷酸酶(ALP) 的含量测定,以探讨其含量变化在妊娠晚期中的意义。其实验组孕32
7、40 周妊娠晚期妇女血清AFU、ALP含量较对照组明显升高，差异有显著性变化( P0.01)。其中观察实验组孕3236 周110 例、孕3640 周 80 例血清AFU、ALP含量水平，发现两组之间血清AFU、ALP含量差异无显著性变化,但随孕周的增加，两种酶的含量有逐渐增高的趋势。此实验还观察了人工终止妊娠或自然分娩1 周后的产妇40 例，其血清AFU、ALP含量均在正常参考值范围之内。因此，血清AFU、ALP含量可以作为妊娠晚期胎儿、胎盘动态监测的一项指标。这也与报道胎儿、胎盘组织可影响妊娠时血清AFU 监测指标，使妊娠期血清AFU 升高 7 相符。血清ALP含量增高的原因可能是：妊娠晚期
8、来自胎盘的ALP同工酶ALP4升高有关。血清AFU含量增高的原因可能是：妊娠晚期由于孕妇体内激素发生变化，使含岩藻糖的糖蛋白和糖脂代谢紊乱；孕期时组织糖苷酶的释放增加；胎盘组织的影响；由于妊娠晚期孕妇的肝脏负荷增加而使肝细胞对AFU的处理能力下降8。由此可见，血清AFU、ALP活性检测,可以作为孕妇在妊娠晚期胎盘、胎儿动态观察的指标。5 尿AFU检测对肾小管损伤的临床价值-L岩藻糖苷岩藻糖水解酶广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中。以肝、肾等组织中AFU 含量最高,尤以近端肾小管上皮细胞溶酶体最为明显。尿中AFU 活性测定主要用于近端肾小管上皮细胞的缺血、缺氧性病变而引起溶酶体酶破坏释放到尿
9、液中，此方面报道较少。常连刚9对118 例肾脏疾病患者尿中AFU 活性进行测定。结果表明：慢性肾小球肾炎、肾病综合征、慢性肾衰和尿毒症组等各类肾脏疾病患者尿液AFU 均高于正常人群组，差异具有极显著性。增高的原因可能与细胞免疫、体液免疫、蛋白、脂质代谢异常有关。由于各类肾脏疾病的病因和发病机理不同，AFU 升高机制也不相同，故各肾脏病组间的尿液AFU 活性有极大差异。有关机理的探讨，尚需积累更多的资料加以阐明。AFU 在118 例病人中随2-MG和NAG的变化而改变，具有高度相关性，并且其阳性率高于2-MG和NAG，具有显著性。所以，尿AFU 测定与其它指标相比更能早期敏感特异地反映肾脏疾病时
10、发生的近端肾小管损害。糖尿病、高血压极易诱发肾病，形成糖尿病肾病和高血压肾病，检测尿AFU 活性，对于是否合并肾微小血管病变有其重要价值，做到早发现、早治疗，延缓疾病的发展。因此，对于肾损伤患者，AFU 活性的检测不失为早期诊断肾损伤的一项有价值的辅助指标。总之，在肾脏疾病中，尿液AFU 活性均有不同程度的增高，增高的原因可能与细胞免疫、体液免疫、蛋白脂质代谢紊乱有关。说明AFU 与肾脏病的发生发展有密切关系，在一定程度上表明，检测尿液AFU 可作为反映肾脏病肾小管损伤的一个参考指标。6 检测方法血清AFU测定方法：荧光法：利用AFU水解4-甲基伞型酮-L-岩藻吡喃糖苷，释放4-甲基伞型酮，用
11、碱性缓冲液终止反应，并使产物呈现荧光，用360 nm或365 nm激发波长和400 nm或448 nm发射波长检测荧光强度，对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求酶活性。此法敏感性高，最小检出限为0.06 UL。比色法：以4-硝基苯-L-岩藻吡喃糖苷为底物经AFU水解释放4-硝基苯酚，同样用碱性缓冲液终止反应，使4-NP呈显著黄色，在规定波长下读取吸光度A。用纯4-NP作标准，利用标准曲线或4-NP摩尔吸光度计算出AFU活性。本法简便，设备要求不高，国内外广泛采用10。7 结语原发性肝癌(PHC)是常见恶性肿瘤，多年来甲胎蛋白(AFP)作为PHC诊断指标，虽有较高特异性和诊断价值，但仍有2
12、030%PHC患者甲胎蛋白阴性造成漏诊。近年来国内外报道PHC患者-L-岩藻糖苷酶活性显著升高具有较高敏感性和特异性，提出-L-岩藻糖苷酶可作为诊断AFU的标记物，它和甲胎蛋白联合检测可提高肝癌诊断率。而其作为妊娠状况的监测，也起到了重要的作用。最新研究发现，AFU测定在肾病、糖尿病、白血病等疾病中同样具有相当积极的作 用11，值得我们不断地探索，和挖掘其在诸多疾病当中的临床价值。 参考文献1 张秀明,李健斋,等.现代临床生化检验学M.北京:人民军医出版社,2003.607-608.2 张华,叶震璇,刘广宣.血清-L-岩藻糖苷酶在原发性肝癌当中的诊断价值J.山东医药,2000,22(40):5
13、0.3 于志伟,杨晓卫,段芳龄,等. 血清-L-岩藻糖苷酶的测定方法J.中华医学检验杂志,1992,15(3):139.4 王毓三,柯金陵,马莹,等. 血清-L-岩藻糖苷酶的测定方法及初步临床应用J.中华医学检验杂志,1988, 11(3): 129-132.5 张世民,吴孟超,陈汉,等. 糖苷酶谱在肝细胞癌诊断中的价值J.中华肿瘤杂志,1992,14(2):143.6 王玉洁. 妊娠晚期孕妇血清碱性磷酸酶岩藻糖苷酶含量变化及意义J.实用医技杂志,2007,14(3):306-307.7 Lombardo A, Goi G, Pistolesi E, et al. Behaviour of s
14、everal enzymes of lysosmal origin in human plasma during pregnaneyJ. Clin Chim Acta,1984,143(3):253-256.8 徐永中,钱小蔷. 血清AFU在妊娠晚期的变化J.现代医药卫生,2006,22(7):1106.9 常连刚.尿-L-岩藻糖苷酶活性测定对肾小管损伤的临床意义J.医学检验与临床,2006,17(4):59.10 韩志钧,黄志锋,卢业成,等.临床化学常用项目自动分析法M.辽宁:辽宁科学技术出版社.2005.11 2004年华东地区临床检验中心协作组.临床实验室质量管理及新技术高级研讨会资料汇编.2004,373-376.（收稿日期：20120305）
